一種富含維生素k2的菌菇粉及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種富含維生素K2的菌菇粉，該菌粉中富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，維生素K2含量在200ug/g以上，同時(shí)含有多種蛋白、膳食纖維及微量元素。本發(fā)明還公開(kāi)了這種菌菇粉的制備方法。本發(fā)明是以自主篩選的納豆芽孢桿菌(保藏編號(hào)CCTCC M2014405)為出發(fā)菌株，以提取過(guò)活性多糖的菌菇渣為主要氮源，通過(guò)合適的發(fā)酵控制手段，繁殖大量的菌體細(xì)胞，收集細(xì)胞，經(jīng)膜過(guò)濾或離心、噴霧干燥制得富含維生素K2的菌菇粉。該菌菇粉具有治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松、促進(jìn)心血管健康、修復(fù)損傷細(xì)胞、抗腫瘤等功效。本發(fā)明為維生素K2的工業(yè)化生產(chǎn)、菌菇渣的綜合利用以及開(kāi)發(fā)新的保健食品奠定了基礎(chǔ)，開(kāi)辟了生產(chǎn)維生素K2的新途徑。
CCTCC NO:M2014405
2014.09.09
【專利說(shuō)明】一種富含維生素K2的菌菇粉及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種富含維生素K2的菌菇粉及其制備方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 維生素K2是一類脂溶性凝血類維生素，為甲萘醌類系列化合物，在骨質(zhì)疏松癥的 預(yù)防和治療方面具有顯著的效果，被稱為"第四代抗骨質(zhì)疏松產(chǎn)品"。維生素K2是一類化合 物--甲基萘醌類化合物，根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)上C-3位異戊二烯側(cè)鏈的長(zhǎng)短不同共有14種形 式，以MK-n表示（n指?jìng)?cè)鏈上異戊二烯單位的個(gè)數(shù)），甲萘醌-4 (MK-4)和甲萘醌-7 (MK-7) 最為常見(jiàn)，MK-4與維生素Kl分子量相似，均具有很短的血清半衰期，要實(shí)現(xiàn)血液循環(huán)需要 很大的劑量，比MK-7推薦劑量高1000倍。而MK-7可快速被腸道吸收，由大的脂質(zhì)顆粒所 運(yùn)輸，在循環(huán)系統(tǒng)中停留很長(zhǎng)時(shí)間，血液半衰期長(zhǎng)，有能力在除肝臟外的骨骼和動(dòng)脈中發(fā)揮 作用。本發(fā)明所制備的維生素K2屬于MK-7構(gòu)型。
[0003] 維生素K2可以迅速改善由于維生素K缺乏引起的出血，因此幾十年來(lái)維生素K2 一直被用作治療出血的抗凝藥物，并未作為人體內(nèi)一種重要營(yíng)養(yǎng)物被關(guān)注。除了作為抗凝 藥物外，維生素K2最顯著的功能為改善骨骼和心血管健康。根據(jù)報(bào)道，維生素K2還可以： 1)抗動(dòng)脈鈣化及骨關(guān)節(jié)炎；2)抗腫瘤；3)延緩衰老；4)修復(fù)損傷細(xì)胞，潛在的治療帕金森 癥藥物，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域。隨著對(duì)維生素K2生理功能研究的深入和加強(qiáng)，維 生素K2的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，并得到了權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。2005年日本批準(zhǔn)維生素K2作為抗 骨質(zhì)疏松藥物上市。我國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局也將維生素K2列入"營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑申報(bào)與 審評(píng)規(guī)定（試行）"的"維生素、礦物質(zhì)化合物名單"中（國(guó)食藥監(jiān)注[2005]202號(hào)），可用 做保健食品或營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的原料。2008年1月，維生素K2通過(guò)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 (FDA)安全認(rèn)定。2009年，歐洲議會(huì)和歐盟理事會(huì)決定在其所有成員國(guó)中，維生素K2可用 作保健食品或營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的原料（2009/345/EC)。
[0004] 灰樹(shù)花、香菇、姬松茸、猴頭菇、雞腿菇是常見(jiàn)的藥食兩用菌，他們含有豐富的營(yíng)養(yǎng) 物質(zhì)。如：每百克干香菇中，含蛋白質(zhì)13克，脂肪1.8克，鈣124毫克，磷415毫克，鐵25. 3 毫克，以及豐富的維生素B1、B2、C、D等。香菇蛋白質(zhì)由18氨基酸組成，占人體必需氨基酸 總量的35. 9%，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高。灰樹(shù)花被譽(yù)為"食用菌王子"和"華北人參"，其干品含有蛋 白質(zhì)25. 2克（其中含有人體所需氨基酸18種18. 68克，其中必需基酸占45. 5% )脂肪3. 2 克、膳食纖維33. 7克、碳水化合物21. 4克，并富含多種有益的礦物質(zhì)和維生素，多種營(yíng)養(yǎng)素 居各種食用菌之首。猴頭菇有"山珍猴頭、海味魚(yú)翅"之稱，含有猴頭菌酮、堿及葡聚糖、麥 角甾醇、猴菇菌素和多糖等，具有補(bǔ)脾胃、助消化、益腎精等功效。上述菌菇經(jīng)過(guò)水浸提活性 多糖后，菌菇渣中仍含有大量的蛋白質(zhì)，膳食纖維等活性物質(zhì)，用其做原料發(fā)酵，一方面可 以作為氮源提供微生物生長(zhǎng)，另一方面其他活性物質(zhì)仍保留，提高后續(xù)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0005] 目前國(guó)內(nèi)關(guān)于維生素K2制備的專利主要集中在：（1)菌種誘變篩選；（2)維生素 K2的提純；沒(méi)有利用廉價(jià)原料進(jìn)行維生素K2生產(chǎn)的專利，更沒(méi)有利用灰樹(shù)花渣、香菇渣等 此類藥食兼用、具有很好保健作用和藥用價(jià)值的菌菇渣做原料進(jìn)行維生素K2生產(chǎn)的實(shí)例。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種富含維生素K2的菌菇粉。
[0007] 本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供上述菌菇粉的制備方法。
[0008] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0009] -種富含維生素K2的菌菇粉的制備方法，以納豆芽孢桿菌為出發(fā)菌株，以提取過(guò) 活性多糖的菌菇渣為主要氮源，發(fā)酵菌體細(xì)胞，收集細(xì)胞，經(jīng)膜過(guò)濾或離心、收集固體部分 經(jīng)噴霧干燥制得富含維生素K2的菌菇粉。
[0010] 其中，所述的維生素K2為MK-7型。
[0011] 具體的制備方法，包括如下步驟：
[0012] (1)利用粗碎機(jī)將提取過(guò)活性多糖的菌菇渣進(jìn)行初步粉碎，再用超微粉碎機(jī)進(jìn)行 精細(xì)粉碎，入篩粉機(jī)過(guò)200目篩,獲得原始菌菇粉；
[0013] (2)將保存在甘油管的納豆芽孢桿菌接入固體培養(yǎng)基中進(jìn)行菌種活化，37°C培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)，20?28h，連續(xù)活化兩代；
[0014] (3)利用滅菌后的生理鹽水將斜面上的菌洗下，接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的 250mL搖瓶中，在30?37°C的搖床中，以120?200rpm的轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)24?48h，獲得一級(jí)種 子液；
[0015] (4)將一級(jí)種子接入裝有IOOmL種子培養(yǎng)基的500mL搖瓶中，接種量2?10% (v/ v)在30?37°C的搖床中，以120?200rpm的轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)24?48h，獲得二級(jí)種子液；[0016] (5)將二級(jí)種子接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種量2?10% (v/v)，加入消 泡齊U，維持pH在7. 0左右，通氣量0? 2?2vvm，攪拌轉(zhuǎn)速200?600rpm，罐溫30?37°C，培 養(yǎng)64?96h，發(fā)酵生產(chǎn)維生素K2;所述的發(fā)酵培養(yǎng)基以步驟（1)得到的原始菌菇粉為主要 氮源；
[0017] (6)將發(fā)酵液經(jīng)管式分離膜設(shè)備或離心機(jī)分水，濃縮物料至200g/L以上，濾液經(jīng) 納濾截留維生素K2;
[0018] (7)將濃縮物料和截留物料經(jīng)噴霧干燥機(jī)干燥得到富含維生素K2的菌菇粉。
[0019] 步驟（1)中，所述的提取過(guò)活性多糖的菌菇渣為提取過(guò)香菇多糖的香菇渣、提取 過(guò)灰樹(shù)花多糖的灰樹(shù)花渣、提取過(guò)姬松茸多糖的姬松茸渣、提取過(guò)雞腿菇多糖的雞腿菇渣 和提取過(guò)猴頭菇多糖的猴頭菇渣中的任意一種或幾種的混合物。
[0020] 步驟⑵中，所述的納豆芽孢桿菌，其分類命名為納豆芽孢桿菌R127 (Bacillus natto R127)，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（簡(jiǎn)稱CCTCC)，地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)， 郵編：430072,其保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 2014405,保藏日期為2014年9月9日。該納豆 芽孢桿菌從江蘇省南京市市場(chǎng)上購(gòu)買的納豆產(chǎn)品中獲得，后經(jīng)紫外誘變，篩選獲得蛋白酶 活性較高菌種。通過(guò)該菌株發(fā)酵制備的維生素K2為MK-7型。
[0021] 納豆芽孢桿菌CCTCC NO :M 2014405菌株特性如下：
[0022] (1)菌落形態(tài)：將菌種稀釋涂布在固體培養(yǎng)基上，30_37°C培養(yǎng)，24h后，菌落表面 粗糙不透明，污白色或微黃色；
[0023](2)菌體形態(tài)：在光學(xué)顯微鏡下觀察CCTCC NO :M 2014405的形態(tài)及結(jié)構(gòu)，菌體為 桿狀，單個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)〇. 5-3微米，革蘭氏陽(yáng)性菌，好氧，含有芽孢，位于菌體中央或稍偏；
[0024] (3)液體培養(yǎng)：靜置培養(yǎng)表面會(huì)產(chǎn)生一層白色的生物膜，震蕩培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)速度 快，無(wú)白色膜；
[0025] (4)代謝：主要代謝產(chǎn)物為七烯甲基萘醌構(gòu)型的維生素K2,該菌株在25-40°C均能 生長(zhǎng)，其中30_37°C為最適生長(zhǎng)溫度；菌體適合在中性pH培養(yǎng)液中生長(zhǎng)。
[0026] (5)胞外酶：可產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等，可分解胞外含氮原料，如大豆 粉、菌渣等。
[0027] 通過(guò)形態(tài)及培養(yǎng)特性判定本菌為芽孢菌屬的微生物，為進(jìn)一步對(duì)所獲得的菌株進(jìn) 行鑒定，借用分子生物學(xué)手段對(duì)其16sRNA序列（如SEQ ID No :1所示）進(jìn)行比對(duì)。發(fā)現(xiàn) 本菌與Bacillus subtilis的16SRNA序列存在96%的同源性，因此判定本菌株屬于芽孢桿 菌，命名為 Bacillus natto R127。
[0028]步驟（2)、（3)或（4)中，所述的固體培養(yǎng)基配方為：30g/L葡萄糖，40g/L蛋白胨， 5g/L NaCl，5g/L牛肉膏，5g/L酵母膏，30g/L瓊脂，溶劑為水。種子培養(yǎng)基配方為10-50g/ L葡萄糖，20-80g/L蛋白胨，2-10g/L NaCl，2-10g/L牛肉膏，2-10g/L酵母膏，溶劑為水。種 子培養(yǎng)基優(yōu)選配方為：30g/L葡萄糖，40g/L蛋白胨，5g/L NaCl，5g/L牛肉膏，5g/L酵母膏， 溶劑為水。發(fā)酵培養(yǎng)基配方為30-80g/L甘油，20-100g/L大豆蛋白胨，0. 2-1. 5g/L酵母粉， 0. l-lg/LK2HP04,0. I-IgAXaCl2 ?%0,0. l-lg/LMgS04 *7H20,溶劑為水。發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)選配方 為：50g/L 甘油，30g/L 大豆蛋白胨，0? 6g/L 酵母粉，0? 3g/LK2HP04,0. IgAXaCl2 ? H20,0? 3g/ LMgSO4 ? 7H20,溶劑為水。
[0029] 步驟（5)中，所述的消泡劑為silicone SE-2,使用量為0?2_3g/L，優(yōu)選0?3g/L。
[0030] 步驟（5)中，發(fā)酵罐中發(fā)酵產(chǎn)維生素K2油脂采用間歇式發(fā)酵或補(bǔ)料式發(fā)酵方法。
[0031] 步驟（5)中，發(fā)酵罐采用養(yǎng)魚(yú)用的氣石（微孔分布器）作為氣體分布器。
[0032] 步驟（5)中，原始菌菇粉在作為主要氮源加入發(fā)酵培養(yǎng)基之前，先經(jīng)過(guò)堿性蛋白 酶水解的預(yù)處理。水解條件：溫度30?60°C，轉(zhuǎn)速150?300rpm，時(shí)間1?3h，pH7?10， 將不可溶的蛋白進(jìn)行分解后，再進(jìn)行發(fā)酵。
[0033] 本發(fā)明所采取的工藝方法同樣適用于納豆芽孢桿菌同均屬的其他菌株以及在此 基礎(chǔ)上進(jìn)行誘變獲得的菌種，如Bacillus subtilis CICC10262、Bacillus subtilis CGMCC NO. 8400 等，最適的菌種為 CCTCC NO :M 2014405。
[0034] 上述制備方法制備得到的富含維生素K2的菌菇粉也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0035] 該菌菇粉具有以下?tīng)I(yíng)養(yǎng)特性：
[0036] (1)富含 100ug/g_300ug/g 的維生素 K2;
[0037] (2)粒度可過(guò)200目篩；
[0038] (3)含有干燥后的芽孢桿菌菌粉；
[0039] (4)含有一定量的蛋白質(zhì)、膳食纖維、微量元素（如維生素D、礦物質(zhì)）、少量脂類物 質(zhì)（如：麥角留醇）；
[0040] 上述富含維生素K2的菌菇粉在制備具有預(yù)防骨質(zhì)疏松、心血管健康、延緩衰老、 抗癌或修復(fù)損傷細(xì)胞功能的保健食品或者藥品中的應(yīng)用也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0041] 本發(fā)明所制備的菌菇粉除了含有維生素K2外，還含有維生素D，在鈣吸收方面具 有明顯效果，維生素D可促進(jìn)鈣在小腸的吸收，將鈣轉(zhuǎn)化為血鈣，而維生素K2可促進(jìn)血鈣向 骨鈣的轉(zhuǎn)化，讓鈣流向該去的地方，防止因鈣在血管等部位的堆積形成的血管硬化等問(wèn)題 的發(fā)生，是補(bǔ)鈣的完美組合，再加上近期在Science等文章中報(bào)道的維生素K2在修復(fù)損傷 細(xì)胞等方面的功效，因此本發(fā)明所提供的菌菇粉在預(yù)防骨質(zhì)疏松、心血管健康、延緩衰老、 抗癌或修復(fù)損傷細(xì)胞功能等方面具有保健功能。
[0042]目前的補(bǔ)鈣產(chǎn)品主要是鈣片加維生素D，維生素D是促進(jìn)鈣吸收，變成血液中的 鈣，而補(bǔ)鈣的目的是補(bǔ)到骨骼上，維生素K2主要是促進(jìn)血鈣轉(zhuǎn)化成骨鈣，本發(fā)明所提供的 這種菌菇粉，富含l〇〇ug/g以上的維生素K2,此外，香菇本身就含有少量的維生素D，菌菇渣 中也有保留，所以，本產(chǎn)品中既含有VD，又含有VK2，是優(yōu)良的補(bǔ)鈣產(chǎn)品。
[0043] 有益效果：本發(fā)明提供了一種富含維生素K2的菌菇粉，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，口味芳香， 適合用作制備預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松、預(yù)防心血管健康、延緩衰老、抗癌、修復(fù)損傷細(xì)胞等功 能的保健食品或者藥品。同時(shí)本發(fā)明還提供了這種菌菇粉的制備方法，以納豆芽孢桿菌 (CCTCC NO :M 2014405)為出發(fā)菌株，以提取過(guò)活性多糖的菌菇渣為主要氮源，發(fā)酵積累維 生素K2,收集細(xì)胞，經(jīng)膜過(guò)濾或離心、噴霧干燥制得富含維生素K2的菌菇粉。該方法獲得 的維生素K2產(chǎn)量與利用大豆粉、大豆蛋白胨等氮源的濃度接近，具有產(chǎn)業(yè)化潛力，制備的 菌菇粉中含有l(wèi)〇〇_3〇〇ug/g維生素K2,當(dāng)今國(guó)際上MK7用于骨質(zhì)疏松的有效劑量為45-125 微克（成人劑量），因此每日食用不到Ig的該菌菇粉即可達(dá)到膳食補(bǔ)充要求。此外，菌菇中 自身含有所中微量元素，如維生素D，與維生素K2聯(lián)合使用，是優(yōu)良的補(bǔ)鈣產(chǎn)品。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0044] 圖1為發(fā)酵樣品維生素K2(MK_7)質(zhì)譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0045] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的內(nèi)容僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)中所詳細(xì)描述的本 發(fā)明。
[0046] 實(shí)施例1:菌株篩選
[0047] 取Ig納豆產(chǎn)品溶解于IOOml生理鹽水中，振蕩混合均勻，將樣品懸液按照每級(jí)稀 釋10倍的次序制得KT 1-IO-7個(gè)濃度，分別將KT3-IO-7五個(gè)濃度中吸取IOOul稀釋液加到 篩選培養(yǎng)基中涂布，每個(gè)濃度涂三塊板，37 °C，培養(yǎng)48h，挑選可產(chǎn)生水解圈且較大的菌落， 繼續(xù)在篩選培養(yǎng)基中劃線，獲得純菌，經(jīng)發(fā)酵復(fù)篩，高效液相分析及質(zhì)譜鑒定，獲得可產(chǎn)維 生素K2的菌種Bacillus natto R，且該菌株所產(chǎn)維生素K2為MK-7構(gòu)型（如圖1)。
[0048] 為提高菌種分解蛋白的能力，對(duì)所得Bacillus natto R進(jìn)行誘變篩選：將活化 后的菌液用生理鹽水洗滌，將菌懸液在紫外燈下照射，照射距離30cm，每隔20s取樣，最后 選擇180s，致死率在80%左右的條件進(jìn)行誘變篩選，所得誘變菌液稀釋涂布在篩選培養(yǎng)基 中，篩選透明圈較大的菌株，命名為Bacillus natto R127,保藏于中國(guó)典型微生物菌種保 藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 2014405。
[0049] 篩選培養(yǎng)基為：4g干酪素溶于100ml水中，115°C滅菌20min，牛肉膏3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，瓊脂20g，溶于900ml水中，121 °C，滅菌20min，冷卻至50°C左右，將兩者混合， 倒平板待用。
[0050] HPLC方法：色譜柱：C18柱，柱溫：50°C，流動(dòng)相：甲醇，流速：lml/min，紫外檢測(cè)波 長(zhǎng)270nm，進(jìn)樣量：30ul，檢測(cè)時(shí)間：35min。
[0051] 實(shí)施例2 :菌株基本生長(zhǎng)性能考察。
[0052] 對(duì)篩選獲得的菌株CCTCC NO :M 2014405進(jìn)行基本性能考察，采用不同液體種子 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，考察細(xì)胞生長(zhǎng)速率，結(jié)果如表1，所用培養(yǎng)基為（％表不每IOOml培養(yǎng)基中 含有物質(zhì)的質(zhì)量g):
[0053] 培養(yǎng)基I :100mL豆芽汁，5 %蔗糖
[0054] 培養(yǎng)基2 :1%葡萄糖，1%蛋白胨，0?5% NaCl
[0055] 培養(yǎng)基3 :3%葡萄糖，4%蛋白胨，0. 5% NaCl，0. 5%牛肉膏，0. 5%酵母膏
[0056] 培養(yǎng)基4 :0. 5%葡萄糖，1%蛋白胨，0. 5% NaCl，0. 5%牛肉膏，0. 5%酵母膏
[0057] 表1不同種子培養(yǎng)基菌體生長(zhǎng)情況表
[0058]

【權(quán)利要求】
1. 一種富含維生素K2的菌菇粉的制備方法，其特征在于，以納豆芽孢桿菌為出發(fā)菌 株，以提取過(guò)活性多糖的菌菇渣為主要氮源，發(fā)酵菌體細(xì)胞，收集細(xì)胞，經(jīng)膜過(guò)濾或離心、收 集固體部分經(jīng)噴霧干燥制得富含維生素K2的菌菇粉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的維生素K2為MK-7型。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，它包括如下步驟： (1) 利用粗碎機(jī)將提取過(guò)活性多糖的菌菇渣進(jìn)行初步粉碎，再用超微粉碎機(jī)進(jìn)行精細(xì) 粉碎，入篩粉機(jī)過(guò)200目篩,獲得原始菌菇粉； (2) 將保存在甘油管的納豆芽孢桿菌接入固體培養(yǎng)基中進(jìn)行菌種活化，37°C培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)，20?28h，連續(xù)活化兩代； (3) 利用滅菌后的生理鹽水將斜面上的菌洗下，接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的250mL搖 瓶中，在30?37°C的搖床中，以120?200rpm的轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)24?48h，獲得一級(jí)種子液； (4) 將一級(jí)種子接入裝有IOOmL種子培養(yǎng)基的500mL搖瓶中，接種量2?10% (v/v) 在30?37°C的搖床中，以120?200rpm的轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)24?48h，獲得二級(jí)種子液； (5) 將二級(jí)種子接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種量2?10% (v/v)，加入消泡 齊U，維持PH在7. 0左右，通氣量0? 2?2vvm，攪拌轉(zhuǎn)速200?600rpm，罐溫30?37°C，培 養(yǎng)64?96h，發(fā)酵生產(chǎn)維生素K2 ;所述的發(fā)酵培養(yǎng)基以步驟（1)得到的原始菌菇粉為主要 氮源； (6) 將發(fā)酵液經(jīng)管式分離膜設(shè)備或離心機(jī)分水，濃縮物料至200g/L以上，濾液經(jīng)納濾 截留維生素K2; (7) 將濃縮物料和截留物料經(jīng)噴霧干燥機(jī)干燥得到富含維生素K2的菌菇粉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)中，所述的提取過(guò)活性多糖 的菌菇渣為提取過(guò)香菇多糖的香菇渣、提取過(guò)灰樹(shù)花多糖的灰樹(shù)花渣、提取過(guò)姬松茸多糖 的姬松茸渣、提取過(guò)雞腿菇多糖的雞腿菇渣和提取過(guò)猴頭菇多糖的猴頭菇渣中的任意一種 或幾種的混合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)中，所述的納豆芽孢桿菌，其 分類命名為納豆芽孢桿菌（Bacillus natto)，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏 編號(hào)為CCTCC M 2014405,保藏日期為2014年9月9日。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的固體培養(yǎng)基配方為30g/L葡 萄糖，40g/L蛋白胨，5g/LNaCl，5g/L牛肉膏，5g/L酵母膏，30g/L瓊脂，溶劑為水；種子培養(yǎng) 基配方為10_50g/L葡萄糖，20-80g/L蛋白胨，2-10g/L NaCl，2-10g/L牛肉膏，2-10g/L酵母 膏，溶劑為水；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為30-80g/L甘油，20-100g/L大豆蛋白胨，0. 2-1.5g/L酵母 粉，0? l-lg/LK2HP04,0. I-IgAXaCl2 ? H20,0. l-lg/LMgS04 ? 7H20,溶劑為水。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟（5)中，發(fā)酵罐中發(fā)酵產(chǎn)維生素 K2油脂采用間歇式發(fā)酵或補(bǔ)料式發(fā)酵方法；發(fā)酵罐采用微孔分布器作為發(fā)酵罐的氣體分 布器。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟（5)中，原始菌菇粉在作為主要 氮源加入發(fā)酵培養(yǎng)基之前，先經(jīng)過(guò)堿性蛋白酶水解的預(yù)處理。
9. 權(quán)利要求1?8中任意一項(xiàng)制備方法制備得到的富含維生素K2的菌菇粉。
10. 權(quán)利要求9所述的菌菇粉在制備具有預(yù)防骨質(zhì)疏松、心血管健康、延緩衰老、抗癌 或修復(fù)損傷細(xì)胞功能的保健食品或者藥品中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23L1/28GK104323222SQ201410473168
【公開(kāi)日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年9月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月16日
【發(fā)明者】黃和, 邱宏偉, 任路靜, 王星麗 申請(qǐng)人:麗水雙健生物工程有限公司

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