專利名稱：黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法，屬于一種多糖類的制備方法領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黑木耳(Auricularia auricula(Hook)Underw)是我國珍貴的藥食兩用的膠質(zhì)真菌。明代李時珍在《本草綱目》中已記載，“主治，益氣不饑，輕身強(qiáng)志，斷谷治痔”。木耳多糖是黑木耳的主要活性成分，具有降低血脂膽固醇、抗凝血、抗動脈粥樣硬化等作用。但由于黑木耳多糖主要存在于細(xì)胞壁上，而細(xì)胞壁由真菌幾丁質(zhì)成分組成，影響了黑木耳多糖等有效成分的吸收，因此只有充分破壁才能有效提取及利用黑木耳多糖等有效成分。
由于黑木耳是富含膠質(zhì)的真菌，常規(guī)的熱水提取工藝具有提取液粘稠，難于進(jìn)行濃縮等后處理。目前，主要的黑木耳提取加工方法有(1)黑木耳酶法提取工藝。利用果膠酶、木瓜蛋白酶等復(fù)合酶提取黑木耳多糖；(2)采用酸提取法或堿提取法提取黑木耳多糖；(3)黑木耳深層液體發(fā)酵。(4)直接將黑木耳磨成粉。傳統(tǒng)的提取方法多采用單純酸法或堿法，容易破壞多糖結(jié)構(gòu)，影響人體吸收。專利申請?zhí)枮镃N200410020591.5的發(fā)明專利“一種木耳多糖的提取方法”，以木耳為原料，采用醇提、微波或超聲波處理，并結(jié)合復(fù)合酶法酶解，將木耳中的多糖物質(zhì)充分溶解出來，提高了木耳多糖的得率，保持了多糖物質(zhì)的生物活性，有利于人體吸收。同時，利用木耳多糖加工過程中剩余的殘渣提取堿性木耳多糖，最大限度地利用了原料，節(jié)約了資源。采用酶法提取工藝具有一定的降低提取液粘性的作用，提高了提取得率，但是該方法加工過程繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種成分全面，具有有效降低血脂功能的黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法。
本發(fā)明所述的制備方法的過程為按重量百分比取50～100％的黑木耳菌絲體粉與0～50％的黑木耳粉末混合均勻而成。
本發(fā)明中使用的黑木耳菌絲體粉的制備方法為將黑木耳發(fā)酵菌絲體連同發(fā)酵液一起經(jīng)膠體磨處理10～20分鐘后干燥而成。
其中，發(fā)酵過程為按重量百分比取3～5％碳源(蔗糖、葡萄糖、高梁粉、糊精、玉米粉、淀粉等碳源中的一種)、5～8％麩皮煮汁、0.5～1％氮源(酵母膏、蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、硫酸銨、尿素等氮源中的一種)、0.1～0.2％KH2PO4、0.1～0.2％MgSO4、消泡劑適量，pH自然，液體發(fā)酵罐裝量1∶0.7，二級種接種量為2～10％，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.2～0.5，100～180r/min培養(yǎng)3d。
進(jìn)一步優(yōu)選的發(fā)酵過程為按重量百分比取5％蔗糖、8％蔗糖、0.5％酵母膏、0.2％KH2PO4、0.1％MgSO4、0.05％泡敵，pH自然，液體發(fā)酵罐裝量1∶0.7，接種量為5％，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.5，100～180r/min培養(yǎng)3d。
其中，菌種優(yōu)選Au-5菌株，由廣東省微生物研究所菌種保藏中心。菌種的制備過程為1)菌種活化從母種試管中切出5～10×5～10mm大小的菌絲塊接種于PDA斜面的中部，于25～28℃培養(yǎng)7～10d；2)一級種子培養(yǎng)100ml麥芽汁(Bx3)、0.2g蛋白胨、0.2g KH2PO4、0.1gMgSO4，pH自然，采用500ml三角瓶，裝液量為100ml，接入活化菌種，28～30℃，100r/min培養(yǎng)5d；3)二級種子培養(yǎng)于500ml三角瓶裝上述一級種子培養(yǎng)液100ml，接入一級種子種量為5％，28～30℃，100r/min培養(yǎng)3d。
本發(fā)明中黑木耳粉末的制備方法為將黑木耳子實(shí)體泡開、洗凈后煮熟并晾干，粉碎20目以上，優(yōu)選采用超微粉碎機(jī)粉碎3分鐘以上。
本發(fā)明通過優(yōu)選黑木耳深層液體發(fā)酵條件，并經(jīng)膠體磨細(xì)胞破壁處理，最后與經(jīng)過細(xì)胞破壁處理的黑木耳超微粉混合均勻。本發(fā)明方法利用細(xì)胞破壁技術(shù)全面提取黑木耳深層發(fā)酵菌絲體及黑木耳子實(shí)體的胞內(nèi)和胞外多糖，成分全面，所制得的黑木耳降脂產(chǎn)品具有明顯的降低血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白作用，可用于高血脂癥病人的輔助治療或正常人預(yù)防高血脂癥的產(chǎn)生。
該實(shí)驗是在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗動物中心進(jìn)行，在該實(shí)驗中使用雄性SPF級SD大鼠(體重150～200g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗動物中心提供[合格證號SCXK(粵)2006A015])。灌胃的“實(shí)驗品”為按本發(fā)明所述的方法獲得的降脂產(chǎn)品，“對照品”為絞股蘭皂甙片(廣州白云山制藥廠生產(chǎn))。
將大鼠在實(shí)驗環(huán)境下喂基礎(chǔ)飼料7天，然后取尾巴血，分別測定凝血時間、TC、TG、HDL-C、LDL-C值。然后將大鼠隨機(jī)分組，每組10只；給藥前，各組動物的凝血時間、TC、TG、HDL-C和LDL-C值等指標(biāo)與空白組間無顯著性差異(見表1)?？瞻捉M每天喂普通飼料及生理鹽水灌胃，高脂對照組每天喂高脂飼料及生理鹽水灌胃，用藥組每天喂高脂飼料及實(shí)驗品灌胃(灌胃劑量見表1)，陽性對照組每天喂高脂飼料及對照品灌胃(灌胃劑量見表1)。
表1用藥前大鼠血脂情況表
喂養(yǎng)45天后，結(jié)束實(shí)驗。在結(jié)束前禁食16小時，結(jié)束時取尾巴血，分別測定凝血時間、TC、TG、HDL-C、LDL-C值，結(jié)果見表2。
喂養(yǎng)45天后，大部分動物給藥后精神活動正常、皮毛光亮潔凈，眼、口及肛門無異常分泌物；表2中的結(jié)果表明，各組間凝血時間無顯著性差異；與空白組比較，高脂對照組大鼠的總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)均極其顯著地升高(P＜0.01)，說明造?；境晒ΑＳ盟幹袆┝拷M及高劑量組、陽性對照組的總膽固醇極其顯著低于高脂對照組(P＜0.01)；用藥中劑量組的大鼠甘油三脂極其顯著低于高脂對照組(P＜0.01)，用藥高劑量組的大鼠甘油三脂顯著低于高脂對照組(P＜0.05)。用藥高劑量組的高密度脂蛋白(HDL-C)極其顯著高于高脂對照組(P＜0.01)。用藥各組的低密度脂蛋白(LDL-C)均極其顯著低于高脂對照組(P＜0.01)。
表2用藥后大鼠血脂情況表
注與空白組比較，#表示p＜0.05；##表示p＜0.01。與高脂對照組比較，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01。
因此，根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》中輔助降血脂功能檢驗方法的結(jié)果判定規(guī)則，本發(fā)明所制得的黑木耳降脂產(chǎn)品在血清總膽固醇、甘油三酯均有兩項指標(biāo)陽性，可判定具有輔助降血脂功能。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法1(1)黑木耳液體菌種的制備。
①菌種活化從母種試管中切出蠶豆大小的菌絲塊接種子于PDA斜面的中部，于26℃培養(yǎng)7d。
②一級種子培養(yǎng)以1000mL培養(yǎng)液計，取麥芽汁(Bx3)1000mL、2g蛋白胨、2g KH2PO4、1g MgSO4，pH自然，采用500mL三角瓶，裝液量為100mL。培養(yǎng)液在0.11MPa壓力條件下滅菌30分鐘，然后在無菌接種室中將活化后的斜面母種培養(yǎng)基，切成0.5×0.5cm大小，接入7-8塊/瓶，最后于28℃搖床培養(yǎng)5d，其中前18小時轉(zhuǎn)速80r/min，18小時后轉(zhuǎn)速改為100r/min。
③二級種子培養(yǎng)以1000mL培養(yǎng)液計，取蔗糖50g，麩皮80g(加入10倍水煮沸后過濾去渣)，酵母膏5g，KH2PO4 2g、MgSO4 1g，加水補(bǔ)足至1000mL，于500ml三角瓶裝培養(yǎng)基100ml，培養(yǎng)液在0.11MPa壓力條件下滅菌30分鐘。然后在無菌接種室接入5mL上述一級種子，28℃，100r/min培養(yǎng)3d。
(2)黑木耳菌絲體發(fā)酵。以27L培養(yǎng)基計，按重量百分比取1350g蔗糖、2160麩皮煮汁(加入10倍水煮沸后過濾去渣)、135g酵母膏、54g KH2PO4、27g MgSO4、13.5g泡敵，pH自然，于40L液體發(fā)酵罐中補(bǔ)足水至27L，然后在0.11MPa壓力條件下滅菌30分鐘。待培養(yǎng)液冷卻至30℃左右時接入上述二級發(fā)酵液1350mL，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.5，180r/min培養(yǎng)3d。
(3)黑木耳菌絲體提取精制過程。發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵菌絲體連同發(fā)酵液一起經(jīng)膠體磨反復(fù)處理10分鐘后，用中藥噴霧干燥設(shè)備瞬間噴霧干燥而成。
(4)黑木耳超微粉的制備方法將黑木耳子實(shí)體用冷水泡開、洗凈，用100℃熱水煮熟、撈起，晾干，超微粉碎機(jī)粉碎5分鐘。
(5)取90克的黑木耳菌絲體粉與10克的黑木耳粉混合均勻，裝入膠囊即可。
實(shí)施例2黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法2(1)黑木耳液體菌種的制備。按實(shí)施例1所述方法制備。
(2)黑木耳菌絲體發(fā)酵。以27L培養(yǎng)基計，按重量百分比取1350g葡萄糖、2160麩皮煮汁(加入10倍水煮沸后過濾去渣)、135g蛋白胨、54g KH2PO4、27g MgSO4、13.5g泡敵，pH自然，于40L液體發(fā)酵罐中補(bǔ)足水至27L，然后在0.11MPa壓力條件下滅菌30分鐘。待培養(yǎng)液冷卻至30℃左右時接入上述二級發(fā)酵液1350mL，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.5，150r/min培養(yǎng)3d。
(3)黑木耳菌絲體提取精制過程。發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵菌絲體連同發(fā)酵液一起經(jīng)膠體磨15分鐘反復(fù)，噴霧干燥設(shè)備噴干或干燥箱烘干。
(4)黑木耳超微粉的制備方法將黑木耳子實(shí)體用冷水泡開、洗凈，用100℃熱水煮熟、撈起，晾干，超微粉碎機(jī)粉碎3分鐘。
(5)取80克的黑木耳菌絲體提取物與20克的黑木耳粉混合均勻，裝入膠囊即可。
實(shí)施例3黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法3(1)黑木耳液體菌種的制備。按實(shí)施例1所述方法制備。
(2)黑木耳菌絲體發(fā)酵。以27L培養(yǎng)基計，按重量百分比取1350g玉米粉、2160麩皮煮汁(加入10倍水煮沸后過濾去渣)、135g牛肉膏、54g KH2PO4、27g MgSO4、13.5g泡敵，pH自然，于40L液體發(fā)酵罐中補(bǔ)足水至27L，然后在0.11MPa壓力條件下滅菌30分鐘。待培養(yǎng)液冷卻至30℃左右時接入上述二級發(fā)酵液1350mL，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.5，120r/min培養(yǎng)4d。
(3)黑木耳菌絲體提取精制過程。發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵菌絲體連同發(fā)酵液一起經(jīng)膠體磨20分鐘反復(fù)，熱風(fēng)循環(huán)干燥箱烘干。
(4)黑木耳超微粉的制備方法將黑木耳子實(shí)體用冷水泡開、洗凈，用100℃熱水煮熟、撈起，晾干，超微粉碎機(jī)粉碎8分鐘。
(5)取50克的黑木耳菌絲體提取物與50克的黑木耳粉混合均勻，裝袋即可。
權(quán)利要求
1.黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法，其特征在于包括以下步驟按重量百分比取50～100％的黑木耳菌絲體粉與0～50％的黑木耳粉末混合均勻而成。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的黑木耳菌絲體的制備方法為將黑木耳液體發(fā)酵菌絲體連同發(fā)酵液一起經(jīng)膠體磨處理10～20分鐘后干燥即可。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于制備黑木耳菌絲體所使用的黑木耳發(fā)酵菌絲體的發(fā)酵過程為按重量百分比取3～5％碳源、5～8％麩皮煮汁、0.5～1％氮源、0.1～0.2％ KH2PO4、0.1～0.2％ MgSO4、消泡劑適量，pH自然，液體發(fā)酵罐裝量1∶0.2～0.7，接種量為2～10％，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.2～0.5，100～180r/min培養(yǎng)3d。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于制備黑木耳菌絲體所使用的黑木耳發(fā)酵菌絲體的發(fā)酵過程為按重量百分比取5％蔗糖、8％麩皮煮汁、0.5％酵母膏、0.2％ KH2PO4、0.1％ MgSO4、0.05％泡敵，pH自然，液體發(fā)酵罐裝量1∶0.7，接種量為5％，25～30℃，通風(fēng)量控制在1∶0.5，100～180r/min培養(yǎng)3d。
5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于發(fā)酵菌種選用Au-5菌株。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于菌種的制備過程為1)菌種活化從母種試管中切出5～10×5～10mm的菌絲塊接種子于PDA斜面的中部，于25～28℃培養(yǎng)7～10d；2)一級種子培養(yǎng)100ml麥芽汁、0.2g蛋白胨、0.2g KH2PO4、0.1g MgSO4，pH自然，采用500ml三角瓶，裝液量為100ml，接入活化菌種，28～30℃，100r/min培養(yǎng)5d；3)二級種子培養(yǎng)于500ml三角瓶裝上述一級種子培養(yǎng)液100ml，接入一級種的種量為5％，28～30℃，100r/min培養(yǎng)3d。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的黑木耳粉末的制備方法為將黑木耳子實(shí)體泡開、洗凈后煮熟并晾干，粉碎20目以上即可。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于粉碎過程采用超微粉碎機(jī)粉碎3分鐘以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黑木耳降脂產(chǎn)品的制備方法，屬于一種多糖類的制備方法領(lǐng)域。本發(fā)明通過采用黑木耳深層液體發(fā)酵技術(shù)，經(jīng)膠體磨細(xì)胞破壁處理后全面提取黑木耳深層發(fā)酵培養(yǎng)物的胞內(nèi)及胞外多糖，最后與經(jīng)過細(xì)胞破壁處理的黑木耳粉精制而成。本發(fā)明所制得的黑木耳降脂產(chǎn)品，具有明顯的降低血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白作用，可用于高血脂癥病人的輔助治療或正常人預(yù)防高血脂癥的產(chǎn)生。
文檔編號A23L1/29GK101057659SQ20071002810
公開日2007年10月24日 申請日期2007年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月22日
發(fā)明者謝意珍, 李崇, 周靜文, 張智, 李森柱 申請人:廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司

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