不同提取工藝對茶多酚的提取及品質(zhì)影響 0 黃酮及茶多酚類化合物的提取工藝 黃酮類和茶多酚化合物是植物中廣泛分布的一系列自然產(chǎn)物。這些是許多中藥的有效成分，具有較強(qiáng)的抗逆性和自由基性。大多數(shù)植物體內(nèi)的糖是包含甾醇的。在游離態(tài)（甾醇）中，一些是以游離態(tài)（甾醇）的形式出現(xiàn)的。近年來，黃酮類和茶多酚的研究轉(zhuǎn)向其藥用價(jià)值的開發(fā)，以及提取過程中對黃酮類和茶多酚的含量、測定和制備以及藥物的提取。 茶多酚又叫茶單寧、茶鞣質(zhì),是決定茶湯滋味、顏色的主體成分,它的藥用價(jià)值很高,具有抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑菌等藥理作用.其測定方法主要有滴定法、酒石酸鐵比色法、紫外分光光度法等.目前國內(nèi)外茶多酚粗品的提取方法主要有:溶劑萃取法、離子沉淀法、樹脂吸附分離法、超臨界流體萃取法、超聲波浸提方法、微波浸提法等.本文采用超聲波提取法和沸水浸提法及傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法等不同提取方法,并用酒石酸亞鐵作顯色劑,分光光度法測定茶多酚的含量. 1 測試 1.1 u3000茶多酚溶液的配制 722型光柵分光光度計(jì)(上海儀器廠);HH-4智能數(shù)顯恒溫水浴鍋(鄭州長盛實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);KQ-300VDB型三頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);BS224S電子分析天平(北京賽多利斯儀器廠);ZRD干燥箱(上海智城分析儀器廠);微型砂芯漏斗(安徽千玻儀器廠);SHB-111循環(huán)水泵(鄭州長盛實(shí)驗(yàn)儀器有限公司). 0.5 mg/mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液:準(zhǔn)確稱取50 mg(準(zhǔn)確至0.000 1 g)純茶多酚,用蒸餾水溶解移入100 mL的容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,備用. 酒石酸亞鐵溶液:稱取0.1 g FeSO4·7H2O和0.5 g C4H4O6KNa·4H2O,混合并用蒸餾水溶解后移入100 mL容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻即可. pH值為7.5的磷酸鹽緩沖液:(1)0.033 mol/L的磷酸氫二鈉溶液.準(zhǔn)確稱取2.969 g Na2HPO4·12H2O加入蒸餾水溶解,移至250 mL容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,此溶液稱為A液;(2)0.067 mol/L的KH2PO4溶液.準(zhǔn)確稱取2.269 5 g磷酸二氫鉀,用蒸餾水溶解,移至250 mL容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,此溶液稱為B液;(3)取A液85 mL,B液15 mL混勻,即為pH值為7.5的緩沖液.茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所純度99%),無水乙醇,乙酸乙酯,四氯化碳.試驗(yàn)材料為市售河南信陽毛尖綠茶,置于粉碎機(jī)中粉碎后備用所用試劑均為分析純,水為去離子水. 1.2 u3000酸、鐵、酸亞鐵 吸取適量茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液于25 mL比色管中,然后依次加入4 mL水和酒石酸亞鐵溶液5 mL,充分混合,加pH 值為7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容至刻度,搖勻,放置20 min,以試劑空白為參比,用1 cm比色皿在545 nm處測定吸光度. 2 結(jié)果與討論 2.1 最大吸收波長測定 取1.0 mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液,用1 cm比色皿,以試劑空白為參比,波長在470 ～ 590 nm范圍掃描吸收光譜,每隔10 nm測一次吸光度,在最大吸收峰附近,每隔5 nm測一次吸光度A,可知絡(luò)合物的最大吸收波長為545 nm,見圖1. 2.2 反應(yīng)溫度的影響 溫度對配合物的形成影響很顯著,當(dāng)反應(yīng)溫度高于30 ℃時(shí)吸光度變化比較大,因此本試驗(yàn)應(yīng)在室溫條件下進(jìn)行. 2.3 顯色劑的確定 取1.0 mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液,按試驗(yàn)方法操作,用1 cm比色皿,以試劑空白為參比,依次測量放置5,10,20,30,60,…,120 min,在選擇波長下測定吸光度A值,結(jié)果表明絡(luò)合物在顯色55 min后吸光度變化較大. 2.4 緩沖區(qū)和ph值的影響 使用不同pH值緩沖體系進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果表明溶液在pH值為7.5時(shí)的吸光度較大且基本不變,試驗(yàn)選用pH值為7.5的磷酸鹽緩沖溶液. 2.5 酒石酸亞鐵的用量 僅改變酒石酸亞鐵的用量,按試驗(yàn)方法配制系列溶液,酒石酸亞鐵在5.0 mL吸光度較大且較穩(wěn)定,選用加入酒石酸亞鐵量為5.0 mL. 2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 在25 mL比色管中依次加入0,0.5,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5 mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液,按試驗(yàn)方法處理后進(jìn)行測定,其線性回歸方程為:A=7.679 39c+0.005 13,R=0.999 7,結(jié)果表明,茶多酚在0.00～0.09 mg·mL-1范圍內(nèi),吸光度與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系. 2.7 干預(yù)試驗(yàn) 2.7.1 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液抗壞血酸含量的測定 茶葉中的抗壞血酸,蔗糖和氨基酸可能對測定產(chǎn)生影響,經(jīng)用茶葉內(nèi)所含純品驗(yàn)證:對于質(zhì)量濃度為0.02 mg/mL的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液,同倍的抗壞血酸,3倍的氨基酸,3倍的蔗糖對測定無干擾,一

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