說明書元寶楓葉提取物的新用途
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及元寶楓葉提取物的一種新用途。
背景技術(shù)
元寶楓又名五角楓(Acer Truncatum Bunge)，為槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)的一個落葉喬木。元寶楓樹冠蔭濃，樹姿優(yōu)美，葉形秀麗，嫩葉紅色，入秋后，葉片變色，紅綠相映，甚為美觀，是營造風景林的主要樹種。自90年代以來，元寶楓被開發(fā)為集油料、藥用、化工、生態(tài)、水保、風景觀賞等多用途、多效益于一體的經(jīng)濟樹種。
元寶楓是高效的經(jīng)濟樹種。元寶楓種子顆粒大，種仁含油率達48％，高于油菜籽出油率32％，油橙黃色，其物理、化學性質(zhì)可與食用植物油媲美。試驗證明，在荒坡、荒溝、退耕還林地上發(fā)展元寶楓，用良種嫁接苗造林3-5年后，可畝產(chǎn)元寶楓翅果800公斤-1000公斤，榨油150公斤左右，是種植油葵的5.5倍。元寶楓種子除榨油外，種皮中單寧含量高達60％，3年-5年生樹，畝產(chǎn)單寧120公斤。元寶楓單寧是優(yōu)質(zhì)的鞣料原料。元寶楓葉含7.26％的黃酮，高于銀杏葉黃酮含量，葉子中還含有類胡蘿卜素、多種維生素等12種與人體健康有關(guān)的礦物質(zhì)元素，可生產(chǎn)系列保健茶和保健品。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供元寶楓葉提取物的一種新用途。
本發(fā)明所提供的元寶楓葉提取物的用途是元寶楓葉提取物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用；所述元寶楓葉提取物按照如下方法制備：以元寶楓葉為原料，用丙酮-水或乙醇-水混合溶劑浸取得到的。
其中，所述丙酮-水混合溶劑中丙酮的體積百分數(shù)可為50-70％；所述乙醇-水混合溶劑中乙醇的體積百分數(shù)可為50-70％；所述混合溶劑與元寶楓干葉的重量份數(shù)比可為(8-50)∶1。
其中，所述丙酮-水混合溶劑中丙酮與水的體積份數(shù)比具體可為50∶50，或60∶40，或70∶30；乙醇-水混合溶劑中乙醇與水的體積份數(shù)比具體可為50∶50，或60∶40，或70∶30。
所述浸取的方法可為在15-30℃下攪拌，或40-100℃下回流；所述在15-30℃下攪拌浸取的時間可為3-24小時；所述40-100℃下回流的時間可為1-6小時。
為了提高所述提取物的純度，所述浸取后還進行過濾和濃縮；所述濃縮的方法為除去所述過濾得到的濾液中的丙酮或乙醇，然后用乙酸乙酯從水相中萃取，收集乙酸乙酯提取液，再減壓蒸發(fā)除去所述乙酸乙酯提取液中的乙酸乙酯，得到經(jīng)濃縮的元寶楓葉提取物浸膏。可將所述浸膏進一步(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物。
為了進一步提高所述提取物的純度，在用所述乙酸乙酯進行萃取之前可用石油醚萃取所述水相，除去其中的脂類物質(zhì)，再收集水相，然后再用乙酸乙酯進行萃取。
所述抗菌藥物的活性成分是上述方法得到的元寶楓葉提取物。
需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等，必要時還可以加入香味劑、甜味劑、和著色劑等。
用元寶楓葉提取物制備的抗菌藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
實驗證明，用元寶楓葉提取物制備的抗菌藥物對細菌(包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌)和真菌具有抑菌作用。
具體實施方式
實施例1、元寶楓葉提取物的制備
將在北京11月份采集的元寶楓葉洗凈，在45℃烘干后將其粉碎，用下述方法提取有效物：
用丙酮-水混合溶劑(丙酮的體積百分數(shù)為50％)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為20∶1混合，70℃回流3小時，過濾；在同樣條件下再回流2小時，過濾，將兩次濾液合并。減壓蒸發(fā)濃縮，除去丙酮，得到含有效物質(zhì)的水相，用等體積的石油醚分3-4次進行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑，得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物A。
三次重復實驗的元寶楓葉提取物A的提取率(提取率＝元寶楓葉提取物A的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為70±2g/kg干葉。
實施例2、元寶楓葉提取物的制備
將在北京10月份采集的元寶楓葉洗凈，在40℃烘干后將其粉碎，用下述方法提取有效物：
用乙醇-水混合溶劑(乙醇的體積百分數(shù)為50％)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為35∶1混合，室溫25℃下攪拌浸取12小時，過濾，在同樣條件下再浸取12小時，過濾，將兩次濾液合并，減壓蒸發(fā)濃縮，除去乙醇，得到含有效物質(zhì)的水相，對水相中的有效物進一步濃縮，具體方法為：用乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將此浸膏進一步(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物B。
三次重復實驗的元寶楓葉提取物B的提取率(提取率＝元寶楓葉提取物B的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為72±2.1g/kg干葉。
實施例3、元寶楓葉提取物的制備
將在北京9月份采集的元寶楓葉洗凈，自然晾干或低溫烘干(<50℃)后將其粉碎，用下述方法提取有效物：
用丙酮-水混合溶劑(丙酮的體積百分數(shù)為70％)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為8∶1混合，40℃回流6小時，過濾；在同樣條件下再回流2小時，過濾，將兩次濾液合并。減壓蒸發(fā)濃縮，除去丙酮，得到含有效物質(zhì)的水相，用等體積的石油醚分3-4次進行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑，得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物C。
三次重復實驗的元寶楓葉提取物C的提取率(提取率＝元寶楓葉提取物C的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為68±1.8g/kg干葉。
實施例4、元寶楓葉提取物的制備
將在北京8月份采集的元寶楓葉洗凈，自然晾干后將其粉碎，用下述方法提取有效物：
用乙醇-水混合溶劑(乙醇的體積百分數(shù)為70％)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為50∶1混合，100℃回流1小時，過濾；在同樣條件下再回流2小時，過濾，將兩次濾液合并。減壓蒸發(fā)濃縮，除去乙醇，得到含有效物質(zhì)的水相，用等體積的石油醚分3-4次進行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑，得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物D。
三次重復實驗的元寶楓葉提取物D的提取率(提取率＝元寶楓葉提取物D的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為70±2.3g/kg干葉。
實施例5、細菌微量藥敏檢測試驗
(1)配置抑菌藥液：分別稱取實施例1、2、3和4中的元寶楓葉提取物1mg，用二甲基亞砜10μl溶解后加蒸餾水至1ml(濃度為1mg/ml)。
(2)細菌菌液制備：
菌種：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922、綠膿桿菌ATCC27853、表皮葡萄球菌、溶黃嘌呤厄菌、產(chǎn)堿假單胞菌、粘膜炎布蘭漢氏球菌、鮑氏不動桿菌。
將上述菌種分別轉(zhuǎn)種平皿，37℃孵育24小時。用無菌生理鹽水制備菌懸液，使用麥氏比濁儀調(diào)制菌液為0.5麥氏單位，吸取0.2ml加生理鹽水40ml，此時菌液濃度為106CFU/ml。
(3)元寶楓葉提取物對細菌抑菌作用檢測：采用倍比稀釋法，接種96孔板：
第1-2列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液→混勻后吸取100μl分別加入到第3-4列中的相應(yīng)孔；
第3-4列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液(為第1-2列孔混勻后的藥液)→混勻后吸取100μl分別加入到第5-6列中的相應(yīng)孔；
第5-6列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液(為第3-4列孔混勻后的藥液)→混勻后吸取100μl分別加入到第7-8列中的相應(yīng)孔；
第7-8列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液(為第5-6列孔混勻后的藥液)→混勻后吸取100μl丟棄。
第1-8列孔對應(yīng)的第1-8行孔中，每行孔中加入一種細菌菌液100μl(106CFU/ml)。
另做：a.菌液對照孔第9-10列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl細菌菌液(106CFU/ml)，其中，第9-10列孔對應(yīng)的第1-8行孔中，每行孔中加入一種細菌菌液；b.MH肉湯對照孔第11-12列孔：第11-12列孔對應(yīng)的第1-8行孔中，每孔100μl MH肉湯。
實驗設(shè)三次重復。將該96孔板放入濕盒37℃孵育，24小時觀察。如果有細菌生長，在小孔中呈彌散狀混濁，或小孔底部有圓形或網(wǎng)狀沉淀，反之為無細菌生長，在無細菌生長的小孔內(nèi)所含最低藥物濃度稱為最小抑菌濃度MIC。結(jié)果見表1-4。表1-4中的結(jié)果為三次實驗的平均值。
由表1-4可知，實施例1、2、3和4中的元寶楓葉提取物對細菌均有明顯的抑菌作用。
表1 實施例1的元寶楓葉提取物對細菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
   菌  種金黃色      葡萄球      菌    表皮    葡萄    球菌    大腸    桿菌    綠膿    桿菌溶黃    嘌呤    厄菌      產(chǎn)堿假      單胞菌粘膜炎      布蘭汗      氏球菌鮑氏    不動    桿菌   MIC0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml
表2 實施例2的元寶楓葉提取物對細菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
   菌  種金黃色      葡萄球      菌    表皮    葡萄    球菌    大腸    桿菌    綠膿    桿菌溶黃    嘌呤    厄菌      產(chǎn)堿假      單胞菌粘膜炎      布蘭汗      氏球菌鮑氏    不動    桿菌   MIC0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml
表3 實施例3的元寶楓葉提取物對細菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
   菌  種金黃色      葡萄球      菌    表皮    葡萄    球菌    大腸    桿菌    綠膿    桿菌溶黃    嘌呤    厄菌      產(chǎn)堿假      單胞菌粘膜炎      布蘭汗      氏球菌鮑氏    不動    桿菌   MIC0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml
表4 實施例4的元寶楓葉提取物對細菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
   菌  種金黃色      葡萄球      菌    表皮    葡萄    球菌    大腸    桿菌    綠膿    桿菌溶黃    嘌呤    厄菌      產(chǎn)堿假      單胞菌粘膜炎      布蘭汗      氏球菌鮑氏    不動    桿菌   MIC0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.25    mg/ml0.125     mg/ml 0.25    mg/ml
實施例7、真菌微量藥敏檢測試驗
(1)配置抑菌藥液：分別稱取實施例1、2、3和4中的元寶楓葉提取物2mg，用二甲基亞砜10μl溶解后加蒸餾水至1ml(濃度為2mg/ml)。
(2)真菌菌液制備：
菌種：鐮刀菌、克柔念珠菌、青霉菌、交鏈孢霉菌。
菌種轉(zhuǎn)種PDA平皿，28℃孵育72小時。用無菌鹽水沖洗平皿菌落，制備菌懸液，使用麥氏比濁儀調(diào)制菌液濁度為0.5麥氏單位，吸取0.2ml菌液用40ml生理鹽水稀釋，此時菌液濃度為106CFU/ml。
(3)元寶楓葉提取物對真菌抑菌作用檢測：采用倍比稀釋法，接種96孔板：
第1-2列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液→混勻后吸取100μl分別加入到第3-4列中的相應(yīng)孔；
第3-4列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液(為第1-2列孔混勻后的藥液)→混勻后吸取100μl分別加入到第5-6列中的相應(yīng)孔；
第5-6列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液(為第3-4列孔混勻后的藥液)→混勻后吸取100μl分別加入到第7-8列中的相應(yīng)孔；
第7-8列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl藥液(為第5-6列孔混勻后的藥液)→混勻后吸取100μl丟棄。
第1-8列孔對應(yīng)的第1-8行孔中，每兩行孔中加入一種真菌菌液100μl(106CFU/ml)。
另做：a.菌液對照孔第9-10列孔：每孔100μl MH肉湯+100μl真菌菌液(106CFU/ml)，其中，第9-10列孔對應(yīng)的第1-8行孔中，每兩行孔中加入一種真菌菌液；b.MH肉湯對照孔第11-12列孔：第11-12列孔對應(yīng)的第1-8行孔中，每孔100μl MH肉湯。
實驗設(shè)三次重復。將該96孔板放入濕盒28℃孵育，48小時觀察。如果有真菌生長，在小孔中呈彌散狀混濁，或小孔底部有圓形或網(wǎng)狀沉淀，反之為無真菌生長，在無真菌生長的小孔內(nèi)所含最低藥物濃度稱為最小抑菌濃度MIC。結(jié)果見表5-8。表5-8中的結(jié)果為三次實驗的平均值。
由表5-8可知，實施例1、2、3和4中的元寶楓葉提取物對真菌均有明顯的抑菌作用。
表5 實施例1的元寶楓葉提取物對真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
 菌種鐮刀菌克柔念珠菌青霉菌交鏈孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
表6 實施例2的元寶楓葉提取物對真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
 菌種鐮刀菌克柔念珠菌青霉菌交鏈孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
表7 實施例3的元寶楓葉提取物對真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
 菌種鐮刀菌克柔念珠菌青霉菌交鏈孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
表8 實施例4的元寶楓葉提取物對真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)
 菌種鐮刀菌克柔念珠菌青霉菌交鏈孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml

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網(wǎng)址: 元寶楓葉提取物的新用途.pdf http://m.u1s5d6.cn/newsview384285.html