黑豆幾丁質(zhì)酶的純化及其生物學(xué)活性研究

【摘要】：植物幾丁質(zhì)酶是植物體中能夠水解幾丁質(zhì)多聚體的一種致病性相關(guān)蛋白(Pathogenesis-related proteins),是植物體中與防御有關(guān)的一種次生水解酶。主要水解幾丁質(zhì)多聚體中的β-1,4-糖苷鍵,生成N-乙酰氨基葡萄糖寡聚體或單體。大多數(shù)酶的分子量為25-40 k D,最適p H值為6,多數(shù)以單體形式存在,50℃仍很穩(wěn)定。由于其具有顯著的抗病蟲(chóng)害和抗真菌活性,近年來(lái)幾丁質(zhì)酶已經(jīng)成為工業(yè)、農(nóng)業(yè)、生物技術(shù)以及食品等領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。黑豆是眾所周知的健康食品,但是對(duì)于黑豆中幾丁質(zhì)酶的研究卻很少,隨著人們對(duì)于黑豆研究的逐步加深,黑豆在食品、保健等各方面的應(yīng)用會(huì)更加廣泛,對(duì)黑豆中的幾丁質(zhì)酶的研究將會(huì)轉(zhuǎn)化成巨大的經(jīng)濟(jì)效益。本研究將采用先進(jìn)的生化分離技術(shù)對(duì)黑豆中的一種活性物質(zhì)-幾丁質(zhì)酶進(jìn)行提取、純化及表征,并對(duì)其生物活性進(jìn)行研究。首先將黑豆粉碎后經(jīng)石油醚脫脂,40%-60%的硫酸銨分級(jí)沉淀,然后透析,經(jīng)DEAE-FF陰離子柱、SephacrylTMS-100HR凝膠柱,SDS-PAGE凝膠電泳檢驗(yàn),得到具有幾丁質(zhì)酶活性的條帶,分子量約為20 k D。經(jīng)電泳純化的幾丁質(zhì)酶比活力為42U/mg,純化倍數(shù)3.7倍,總回收率35%。進(jìn)一步將對(duì)所得蛋白質(zhì)進(jìn)行最適溫度、最適p H、作用時(shí)間等理化性質(zhì)表征后,進(jìn)行生物學(xué)活性及抗真菌實(shí)驗(yàn)的研究,為黑豆幾丁質(zhì)酶的純化及應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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