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氨基酸分析方法的研究進(jìn)展

來(lái)源：泰然健康網(wǎng) 時(shí)間：2025年07月26日 21:05

第33卷2005年3月

分析化學(xué)(FENXIHUAXUE) 評(píng)述與進(jìn)展

ChineseJournalofAnalyticalChemistry

第3期398~404

評(píng)述與進(jìn)展

氨基酸分析方法的研究進(jìn)展

于泓

1,2

牟世芬

(中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心,北京100085) (哈爾濱師范大學(xué)化學(xué)系,哈爾濱150080)

摘要對(duì)目前應(yīng)用于氨基酸分析的主要方法作了較詳細(xì)評(píng)述。這些方法包括柱后衍生高效陽(yáng)離子交換色譜法、柱前衍生反相高效液相色譜法、高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測(cè)法等。引用文獻(xiàn)73篇。關(guān)鍵詞氨基酸,色譜法,評(píng)述

1 引言

迄今為止,自然界中已發(fā)現(xiàn)180多種氨基酸,其中參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸只有20多種,稱為基本氨基酸。氨基酸主要有兩種存在形式,一種是以游離態(tài)存在于生理體液(血漿、尿)、食品(酒、飲料)中,另一種是以結(jié)合態(tài)存在于肽和蛋白質(zhì)中。由于氨基酸分析在蛋白質(zhì)化學(xué)、生物化學(xué)、食品科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究中起著重要的作用,因此,對(duì)氨基酸分析方法的研究與改進(jìn)得到人們高度重視。1958

[1]

年,Spackman等首先提出了用陽(yáng)離子交換色譜與柱后茚三酮衍生結(jié)合的方法分析蛋白質(zhì)中的氨基酸,實(shí)現(xiàn)了氨基酸分析的自動(dòng)化。其后,人們不斷地發(fā)展新的氨基酸分析方法,柱前衍生反相高效液相色譜法、高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測(cè)法等相繼應(yīng)用于氨基酸分析?，F(xiàn)已是多種氨基酸分析方法并存、互補(bǔ)。本文就目前應(yīng)用于氨基酸分析的主要方法作一綜述。

2 柱后衍生高效陽(yáng)離子交換色譜法

高效陽(yáng)離子交換色譜(HPCEC)-柱后茚三酮衍生光度檢測(cè)分離測(cè)定氨基酸是一種經(jīng)典的氨基酸分析方法。此方法是利用氨基酸在酸性條件下形成陽(yáng)離子而在陽(yáng)離子交換柱中分離,分離后的氨基酸用茚三酮衍生、紫外可見(jiàn)光度檢測(cè)器檢測(cè)。采用陽(yáng)離子交換色譜分離、柱后茚三酮衍生光度檢測(cè)技術(shù)的商品化的自動(dòng)氨基酸分析儀在20世紀(jì)60年代初問(wèn)世?，F(xiàn)在的自動(dòng)氨基酸分析儀已實(shí)現(xiàn)了程控自動(dòng)化和數(shù)據(jù)處理電腦化,分析時(shí)間已縮短至1h以內(nèi)。

目前,專用氨基酸分析儀的色譜柱主要是以磺酸型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為柱填料。該樹(shù)脂是由苯乙烯和二乙烯基本聚合后磺化而成,球狀樹(shù)脂的粒度一般在5~10Lm之間,交聯(lián)度多為8%~12%。流動(dòng)相一般采用3~5種不同pH值的緩沖液(檸檬酸鈉或檸檬酸鋰等)。氨基酸的分離不僅受離子交換樹(shù)脂的型號(hào)、交聯(lián)度和粒度的影響,還受柱溫、洗脫緩沖液的陽(yáng)離子類型、pH、離子強(qiáng)度、淋洗梯度、流速以及其中有機(jī)溶劑含量的影響。

由于大多數(shù)氨基酸在紫外可見(jiàn)光區(qū)無(wú)吸收,因此必須將其衍生、轉(zhuǎn)化為具有紫外可見(jiàn)吸收或能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)才能檢測(cè)。茚三酮是最常用的柱后衍生化試劑。采用茚三酮作柱后衍生試劑的方法被認(rèn)為是這一技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法(AOAC采用的氨基酸分析標(biāo)準(zhǔn)方法)。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好,能測(cè)定大量氨基酸及其同系物。方法的不足是靈敏度不高,只可對(duì)100pmol以上的氨基酸進(jìn)行準(zhǔn)

[2]

確分析,而且需要雙波長(zhǎng)檢測(cè),在440nm處檢測(cè)脯氨酸,在570nm處檢測(cè)其它氨基酸。

為了提高分析靈敏度,用熒光胺代替茚三酮作柱后衍生試劑,采用熒光檢測(cè),可檢測(cè)幾個(gè)pmol的氨基酸

[3]

。熒光胺與氨反應(yīng)的靈敏度比茚三酮與氨反應(yīng)的靈敏度大約提高了3個(gè)數(shù)量級(jí)。這樣,測(cè)定中

2003-07-16收稿;2003-11-17接受

本文系國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究計(jì)劃(973)項(xiàng)目(No.2003CB415001)和國(guó)家自然科學(xué)基金(No.20475060)資助課題

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