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氧化應(yīng)激型脫發(fā)及防脫體外評價

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2024年12月28日 08:59

??隨著臭氧層的破壞，紫外線輻射不斷增強，且環(huán)境污染加重，越來越多的因素誘發(fā)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生。機體可通過抗氧化機制來維持自身的氧化平衡。在病理狀態(tài)或外界刺激下，當氧化應(yīng)激產(chǎn)生的損傷超過抗氧化體系的修復(fù)能力時，氧化平衡的穩(wěn)態(tài)被破壞。

氧化應(yīng)激參與許多生理狀態(tài)及疾病，而越來越多的證據(jù)表明，氧化應(yīng)激是誘導(dǎo)真皮毛乳頭細胞衰老甚至脫發(fā)的重要病因之一。

今天的文章，我們主要闡述如何評價針對氧化應(yīng)激型脫發(fā)的防脫活性物。

體外防脫功效體系

測試模型——毛乳頭細胞

毛乳頭細胞位于毛囊底部，與表皮毛基質(zhì)細胞共同構(gòu)成毛球部，位于真皮的毛乳頭細胞與表皮毛基質(zhì)的相互作用是毛發(fā)生長與脫落的關(guān)鍵（如圖1），從而促進毛發(fā)的生長。

另外毛囊的生長是具有周期性的，其中生長期是毛囊生長最旺盛的時期，生長期的持續(xù)時間決定了毛發(fā)的長度和毛發(fā)的稀疏。這個階段毛球部細胞表觀變大，細胞快速增殖。

然而生長期的毛乳頭細胞和毛基質(zhì)細胞很容易受到外界因素的影響，如化療、一些藥物以及自由基等，從而導(dǎo)致處于生長期的毛發(fā)提前進入退行期，導(dǎo)致毛發(fā)脫落。

圖1 真皮毛乳頭與表皮毛基質(zhì)的相互作用

刺激物——過氧化氫（H2O2）

H2O2是一種典型的氧化劑，也是體外實驗常用的一種氧化應(yīng)激反應(yīng)的誘導(dǎo)物。它可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，形成大量的自由基，從而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)、細胞活性等損傷。

例如H2O2誘導(dǎo)真皮毛乳頭細胞早衰：Wen-YenHuang等人在建立體外細胞早衰模型時發(fā)現(xiàn)，H2O2能夠誘導(dǎo)真皮毛乳頭細胞（DPC）活性降低，誘導(dǎo)其早衰。真皮毛乳頭細胞早衰后會影響生長期毛發(fā)的生長，使得處于生長期的毛發(fā)脫落。

圖2 不同濃度H2O2處理1.5h后DPC存活率變化

陽性對照

H2O2能夠誘導(dǎo)毛乳頭細胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激，誘導(dǎo)炎癥因子的產(chǎn)生，同時會導(dǎo)致毛乳頭細胞衰老，影響其增殖。根據(jù)多指標多陽標的原則，設(shè)立陽性對照物如下：

① 米諾地爾：

米諾地爾原本主要用于治療頑固性高血壓，在使用過程中發(fā)發(fā)現(xiàn)，服用了米諾地爾的患者出現(xiàn)了毛發(fā)增多、增粗現(xiàn)象，從而啟發(fā)了臨床醫(yī)生將其應(yīng)用于脫發(fā)治療。

米諾地爾治療脫發(fā)主要從改變毛發(fā)生長周期、舒張血管、開放鉀離子通道和激活Wnt/β-catenin信號通路出發(fā)。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與毛乳頭細胞增殖密切相關(guān)，VEGF與其受體結(jié)合后，可以發(fā)揮多種生物學(xué)功能，如：促進血管內(nèi)皮細胞分裂增殖，增加血管通透性等等。因此檢測血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）時可將米諾地爾作為陽標。

②維生素E

機體的抗氧化系統(tǒng)分為抗氧化酶和非酶抗氧化分子，前者包括超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化酶等；后者包括維生素E、維生素C、谷胱甘肽和輔酶Q10等。

維生素E具有強氧化性，可以有效清除活性氧，終止自由基的形成。因此在檢測ROS生成量時可將其作為陽標。

③地塞米松

地塞米松作為糖皮質(zhì)激素（GC）的代表之一，被廣泛應(yīng)用于治療炎癥性疾病、自身免疫性疾病和過敏性疾病以及防止移植排異反應(yīng)。

多項研究表明，地塞米松可通過抑制多條炎癥通路包括NF-κB通路的表達，從而抑制IL-1α、IL-1βIL-6等多種炎癥因子的表達，從而發(fā)揮其抗炎作用。因此在檢測炎癥因子表達量時，可將地塞米松作為陽標。

基于H2O2-DPC的防脫功效評估

用H2O2-DPC模型評價防脫功效，我們可以從H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)的角度出發(fā)，通過相應(yīng)的指標檢測，評價活性物或產(chǎn)品的防脫功效：

VEGF

VEGF是血管內(nèi)皮生長因子，毛囊底部含有大量的血管，是毛發(fā)生長的關(guān)鍵，另外毛乳頭細胞也會分泌大量的VEGF，從而供給表皮毛基質(zhì)，保障毛發(fā)的健康生長。

圖3 VEGF含量檢測結(jié)果（博溪生物）

從圖中可以看出，sample組VEGF的表達量與NC組相比上升極顯著，說明樣品可以促進VEGF的表達，從而促進毛乳頭細胞增殖，達到防脫功效。

ROS含量

H2O2可以誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生，如果樣品能夠阻斷或減緩反應(yīng)，降低ROS含量，那么我們可以認為活性物具有一定的防脫功效。我們以VE為陽性物來進行檢測：

圖4 ROS含量檢測結(jié)果（博溪生物）

從圖中可以看出，相較于NC組，sample組的ROS含量下降極顯著，活性物對于氧化應(yīng)激反應(yīng)有極顯著的抑制效果，即活性物有一定的防脫功效。

炎癥因子含量

炎癥反應(yīng)也廣泛地參與了AGA的發(fā)生和發(fā)展。H2O2可以誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，那么我們就可以通過檢測炎癥因子含量，來評價活性物的防脫功效。以IL-6為例：

圖5 IL-6含量檢測結(jié)果（博溪生物）

結(jié)果表明，相較于NC組，sample組的IL-6含量下降顯著，活性物有抑制炎癥反應(yīng)的效果。

對于H2O2-DPC防脫功效評價就介紹到這里，除此以外，我們同樣可以基于毛乳頭細胞，以DHT為刺激物造模進行體外防脫功效評價。以上對于防脫功效的體外評價方法，適用于前期的原料篩選和化妝品配方開發(fā)及改良。

而《化妝品功效宣稱評價規(guī)范》中規(guī)定了，宣稱具有防脫功效，必須要進行人體實驗，人體防脫功效評價參考《防脫發(fā)化妝品防脫功效評價方法征求意見稿》來進行，在此不再詳述。

將防脫功效評價梳理梳理如下：

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參考文獻

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