臨床生物化學(xué)是在人體正常的生物化學(xué)代謝基礎(chǔ)上，研究疾病狀態(tài)下，生物化學(xué)病理性變化的基礎(chǔ)理論和相關(guān)代謝物的質(zhì)與量的改變，從而為疾病的臨床實(shí)驗(yàn)診斷、治療監(jiān)測、藥物療效和預(yù)后判斷、疾病預(yù)防等方面提供信息和決策依據(jù)的一門學(xué)科。它是一門發(fā)展迅速的獨(dú)立學(xué)科。其主要任務(wù)是利用物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的理論與技術(shù)，探討疾病的發(fā)病機(jī)制，研究其病理過程中的特異性化學(xué)標(biāo)志物或體內(nèi)特定成分的改變。

中文名

臨床生物化學(xué)

主要任務(wù)

利用物理學(xué)等探討疾病的發(fā)病機(jī)制

學(xué)科類型

一門理論和實(shí)踐性的應(yīng)用學(xué)科

主要基礎(chǔ)

化學(xué)和醫(yī)學(xué)知識(shí)

主要作用

闡述有關(guān)疾病生物化學(xué)變化等

廣義上講

各個(gè)方面提供信息和理論依據(jù)

目錄

1定義

2主要作用

3發(fā)展過程

?名詞由來

?應(yīng)用

4研究作用

?作用與地位

?面臨的任務(wù)

5研究方法

臨床生物化學(xué)定義

臨床生物化學(xué)是化學(xué)、生物化學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的結(jié)合，已經(jīng)發(fā)展成為一門成熟的獨(dú)立學(xué)科。臨床生物化學(xué)有其獨(dú)特的研究領(lǐng)域、性質(zhì)和作用，是一門理論和實(shí)踐性較強(qiáng)的、邊緣性的應(yīng)用學(xué)科，以化學(xué)和醫(yī)學(xué)知識(shí)為主要基礎(chǔ)。廣義上講，臨床生物化學(xué)是研究器官、組織人體體液的化學(xué)組成和進(jìn)行著的生物化學(xué)過程，以及疾病、藥物對(duì)這些過程的影響，為疾病診斷、病情監(jiān)測、藥物療效、預(yù)后判斷和疾病預(yù)防等各個(gè)方面提供信息和理論依據(jù)。臨床生物化學(xué)除了要求應(yīng)用化學(xué)與醫(yī)學(xué)方面的理論知識(shí)和技術(shù)外，還應(yīng)與生物學(xué)、物理學(xué)、教學(xué)、電子學(xué)等各方面的知識(shí)密切聯(lián)系，廣泛地應(yīng)用這些學(xué)科領(lǐng)域的新成就。

臨床生物化學(xué)主要作用

第一

闡述有關(guān)疾病的生物化學(xué)基礎(chǔ)和疾病發(fā)生發(fā)展過程中的生物化學(xué)變化。這些生物化學(xué)改變可以是原發(fā)性的，也可能是某種原因引起器官病損或并發(fā)癥導(dǎo)致體液生化組成發(fā)生的一系列繼發(fā)性的改變。這部分內(nèi)容又稱之為化學(xué)病理學(xué)(chemicalpathology)。

第二

開發(fā)應(yīng)用臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)方法和技術(shù)，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)及其臨床意義作出評(píng)價(jià)，用以幫助臨床診斷以及采取適宜的治療。這部分內(nèi)容有兩方面的側(cè)重點(diǎn)：在闡明疾病生化診斷的原理方面，側(cè)重于論述疾病的生化機(jī)制，比較接近化學(xué)病理學(xué)的范疇；而在技術(shù)方法的開發(fā)應(yīng)用方面，偏重于臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用，有人稱之為臨床化學(xué)(clinicalchemistry)，其中一部分內(nèi)容又稱之為診斷生物化學(xué)(diagnosticclinicalchemistry)。

由于社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，其它相應(yīng)學(xué)科的進(jìn)展以及新技術(shù)的應(yīng)用，臨床生物化學(xué)這門學(xué)科及其實(shí)驗(yàn)室技術(shù)獲得迅速發(fā)展和完善。它在臨床醫(yī)學(xué)中所起的作用和地位已日益受到重視，并已成為任何醫(yī)院及有關(guān)研究部門建設(shè)中不可缺少的重要組成部分。它是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的主干學(xué)科之一，它的服務(wù)質(zhì)量直接關(guān)系到整個(gè)醫(yī)療水平的提高和疾病防治的效果。

臨床生物化學(xué)發(fā)展過程

臨床生物化學(xué)追溯其發(fā)展過程，它是與許多相關(guān)學(xué)科（包括化學(xué)、生理學(xué)、藥物學(xué)、病理學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等等）相互聯(lián)系、相互滲透的結(jié)果。

在臨床生物化學(xué)學(xué)科發(fā)展史上，有幾次技術(shù)上和概念方面的重大突破，促使了本學(xué)科的進(jìn)步和發(fā)展。

臨床生物化學(xué)名詞由來

“臨床化學(xué)”一詞是在第二次世界大戰(zhàn)后、本世紀(jì)50年代開始較廣泛地使用的。19世紀(jì)以前只是有一些化學(xué)家、生理學(xué)家和臨床醫(yī)生研究人體在健康與疾病時(shí)的化學(xué)組分的變化，包括血液及尿中蛋白質(zhì)、糖及無機(jī)物等物質(zhì)。1918年，Lichtwitz首先采用“臨床化學(xué)”作為教科書名公開出版。1931年，Peter及VanSlyke又出版了兩卷以《臨床化學(xué)》為名的專著，第一次概括了這一領(lǐng)域的主要內(nèi)容，它標(biāo)志著這一學(xué)科的初步形成。

體液生物化學(xué)組分的分析應(yīng)用

及“細(xì)胞內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定”概念

19世紀(jì)以來就有一系列關(guān)于健康與疾病時(shí)體液生物化學(xué)組成的研究。它包括Berzelius、Liebig、Simon、BenceJones、Folin以及中國早期生物化學(xué)家吳憲等人的杰出工作。1926年，WaiterGannon使用了“homeostasis”（內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定）一詞，取代和發(fā)展了ClaudeBernard的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境恒定的概念，這對(duì)推動(dòng)臨床生物化學(xué)的發(fā)展起著深遠(yuǎn)的影響，在過去50年中成為實(shí)驗(yàn)性研究的指導(dǎo)思想。至今臨床生物化學(xué)中相當(dāng)部分的工作就是細(xì)胞外液（即Bernard提出的內(nèi)環(huán)境）的臨床生化。由VanSlyke等人開創(chuàng)的體液水、電解質(zhì)與酸堿平衡這一領(lǐng)域中的理論與實(shí)踐在臨床診斷和治療中所起作用就是一個(gè)具有代表性范例。

在臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用

比色法和光度法對(duì)促進(jìn)這一領(lǐng)域中工作的質(zhì)和量方面的變化起了根本性推動(dòng)作用。19世紀(jì)和20世紀(jì)初，血液及尿中成分多采用傳統(tǒng)的重量分析和容量分析法（滴定法），其靈敏度不高，標(biāo)本用量多，耗費(fèi)時(shí)間長，方法繁瑣，限制了它在臨床上的廣泛應(yīng)用。20世紀(jì)初，特別是從1904年Folin用比色法測定肌酐開始，建立了一系列血液生物化學(xué)成分測定的比色分析法。Duboseq第一個(gè)設(shè)計(jì)了目測比色法。值得提到的是，1924年中國北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院建立了由吳憲教授主持的生物化學(xué)系，成為當(dāng)時(shí)中國醫(yī)學(xué)生物化學(xué)教學(xué)與研究的中心。該系除了講授基礎(chǔ)生物化學(xué)外，還開設(shè)了血尿分析法、酶學(xué)、血液分析等進(jìn)修課程，培養(yǎng)了中國第一批生物化學(xué)家和臨床生物化學(xué)工作者；在血液分析、血濾液制備以及改建和發(fā)展新的比色分析法等方面作了一系列工作，并報(bào)告了中國正常成人血液化學(xué)成分的正常參考值。本世紀(jì)30年代后，由于光電比色計(jì)的應(yīng)用，臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的分析才發(fā)生了根本性的改觀。光度計(jì)和分光光度法在現(xiàn)代臨床生物化學(xué)分析中仍占有突出的地位。

測定作為細(xì)胞與組織損傷的重要指標(biāo)

本世紀(jì)50年代后，應(yīng)用血清酶活力測定作為監(jiān)測細(xì)胞、器官損害及腫瘤生長的指標(biāo)，使臨床生物化學(xué)的工作又增加了新的內(nèi)容。它已發(fā)展成診斷酶學(xué)這一分支。1908年Wohlgemuth首先提出，以檢測尿中淀粉活力作為急性胰腺炎的診斷指標(biāo)。以后又有血清堿性磷酸酶和脂酶的測定，但由于當(dāng)時(shí)方法學(xué)存在的困難，應(yīng)用進(jìn)展緩慢。1954年Ladue、Worblewski、Karmen等人先后發(fā)現(xiàn)血清乳酸脫氫酶及轉(zhuǎn)氨酶在不少疾病時(shí)增高，此后血清酶在診斷上的應(yīng)用和研究非?；钴S。方法學(xué)上又有了很大發(fā)展，同工酶的概念和檢測以及酶譜分析，都大大地增加了診斷的特異性和靈敏度。

治療性藥物監(jiān)測

由于病人對(duì)治療藥物的反應(yīng)和代謝存在著個(gè)體差異，隨著新的、有效的微量檢測藥物血濃度技術(shù)的發(fā)展，以及藥代動(dòng)力學(xué)知識(shí)的進(jìn)展，治療性藥物監(jiān)測工作在現(xiàn)代化醫(yī)院中占有的比重日益增加。在有些大醫(yī)院中，它的工作量已達(dá)整個(gè)臨床生物化學(xué)工作的1/3左右。在中國，治療性藥物監(jiān)測的工作也正在開展，并已受到重視。這對(duì)促使臨床醫(yī)生更有效、合理地使用藥物，提高療效，減少藥物的副作用，了解藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化與代謝規(guī)律等方面都具有重要意義。

（六）超微量的儀器分析、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、放射性同位素等技術(shù)在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中的

臨床生物化學(xué)應(yīng)用

這些新技術(shù)的應(yīng)用使臨床生物化學(xué)工作內(nèi)容有可能日益擴(kuò)大深入。對(duì)于體內(nèi)一些微量蛋白質(zhì)、多肽等生物活性物質(zhì)的測定，基因（核酸片段）的分析，微量元素的分析，以及它們?cè)诙喾N疾病中的變化，為臨床醫(yī)學(xué)提供了極有價(jià)值的數(shù)據(jù)。

數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

由于臨床生物化學(xué)工作內(nèi)容迅速擴(kuò)大，促進(jìn)了分析儀器的機(jī)械化和自動(dòng)化，1957年Skeggs等首先在臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中引用了連續(xù)流動(dòng)式分析裝置(continuousflowanalysis)，1964年后使用多通道分析儀(multichannelanalyzer)和離心式分析儀(centrifugalanalyzer,1969)，加上微處理機(jī)的使用，使臨床化學(xué)工作大大改進(jìn)了分析的質(zhì)和量，提供了檢測大批標(biāo)本的工作程序，改進(jìn)了對(duì)結(jié)果的處理和作用，設(shè)計(jì)出各種組合報(bào)告(profilereporting)。例如將蛋白質(zhì)、血清酶、電解質(zhì)和血?dú)獾榷喾N項(xiàng)目配套分析結(jié)果，經(jīng)過處理（分析、結(jié)合），使數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為更高層次的報(bào)告。為了解某一器官的功能概貌，可組合一系列相關(guān)試驗(yàn)，經(jīng)綜合、分析作出評(píng)價(jià)。在肝功能、腎功能、心肌損害、腫瘤標(biāo)志、血脂分析以及內(nèi)分泌功能檢測方面的成套試驗(yàn)(profiletests)已被廣泛地使用。

學(xué)會(huì)和出版刊物

由于臨床生物化學(xué)已發(fā)展為一個(gè)得到確認(rèn)的學(xué)科和專業(yè)，在不少國家都已成立了專門的全國性學(xué)會(huì)，并有它自己的十分活躍的、有成果的國際性學(xué)會(huì)。國際純化學(xué)與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會(huì)(IUPAC)設(shè)有臨床化學(xué)專業(yè)委員會(huì)(CommissionofClinicalChemistry,DivisionofBIOLOGicalChemistry,InternationalUnionofPureandAppliedChemistry),成立于1952年。此外，國際性的臨床化學(xué)協(xié)會(huì)(InternationalFederationofClinicalChemistry,IFCC)亦組織大量學(xué)術(shù)活動(dòng)，并設(shè)有教育委員會(huì)，制定一系列有關(guān)培訓(xùn)人才和政策性的文件。在某些國家由于歷史的和現(xiàn)實(shí)的條件，學(xué)會(huì)的活動(dòng)可能與其它臨床實(shí)驗(yàn)室學(xué)科和生物化學(xué)學(xué)會(huì)合并進(jìn)行。中國臨床生物化學(xué)的學(xué)術(shù)活動(dòng)有兩個(gè)主要方面，一是屬于中華醫(yī)學(xué)會(huì)下設(shè)的臨床檢驗(yàn)學(xué)會(huì)的臨床生物化學(xué)專業(yè)委員會(huì)，一是屬于中國生物化學(xué)學(xué)會(huì)下屬的醫(yī)學(xué)的生物化學(xué)專業(yè)委員會(huì)。國際性的專業(yè)出版刊物和雜志有：《臨床化學(xué)雜志》(ClinicalChemistry,美國)、《臨床化學(xué)學(xué)報(bào)》(ClinicalChemistryActa,荷蘭)、《臨床生物化學(xué)年鑒》(AnnualsofClinicalBiochemistry,英國)以及《臨床生物化學(xué)評(píng)論》(ClinicalBiochemistryReviews,加拿大)等有較大的影響。中國出版的《國外醫(yī)學(xué)-臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)》（始于1980年）是全國性的情報(bào)刊物。其它有關(guān)臨床生物化學(xué)為主要內(nèi)容的國內(nèi)外文獻(xiàn)雜志刊物種類日益增多，可供參考。

臨床生物化學(xué)研究作用

臨床生物化學(xué)作用與地位

由于臨床生物化學(xué)在醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐方面的重要性，醫(yī)學(xué)生在學(xué)習(xí)基礎(chǔ)課和臨床課中都應(yīng)充分結(jié)合有關(guān)的臨床生物化學(xué)知識(shí)。多數(shù)院校是從講授基礎(chǔ)生化開始的。一般說，基礎(chǔ)生物化學(xué)大部分是取材于動(dòng)物和正常人的，在深度上也可以包括病理的材料。臨床生物化學(xué)的教學(xué)計(jì)劃在各個(gè)國家則有很大的不同，就是在一個(gè)國家內(nèi)，由于本課程的組織者的認(rèn)識(shí)深淺不同，也存在著較大的差異。但是，從各國的醫(yī)學(xué)教育改革及內(nèi)容來看，在所有國家，在整個(gè)醫(yī)學(xué)教育過程中，接觸臨床生物化學(xué)知識(shí)的比重正在不斷增長。不少大學(xué)在后期教育中開設(shè)了有關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)室科學(xué)的課程或相應(yīng)的講座，或開展床邊專題討論，有不少課程是為研究生開設(shè)的。應(yīng)當(dāng)積極地為醫(yī)學(xué)生、醫(yī)學(xué)研究及臨床醫(yī)生提供能有效地利用實(shí)驗(yàn)室來進(jìn)行日常醫(yī)療活動(dòng)的條件。對(duì)于非實(shí)驗(yàn)室臨床專家來說，要求他們通曉詳盡的方法學(xué)是不現(xiàn)實(shí)的，但他們對(duì)于檢測方法的原理及所得分析結(jié)果的限度和評(píng)價(jià)有所理解是十分必要的?，F(xiàn)在，不少教學(xué)醫(yī)院在為醫(yī)學(xué)生和研究生開設(shè)臨床生化課程的同時(shí)，亦為臨床醫(yī)生們提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)中心，提供一定的經(jīng)費(fèi)、投資設(shè)備，以促進(jìn)臨床與實(shí)驗(yàn)室的合作，這對(duì)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的進(jìn)步起著十分有益的作用。

臨床生物化學(xué)面臨的任務(wù)

臨床生物化學(xué)室工作內(nèi)容的不斷增長，急需培養(yǎng)專門人才和建立工作質(zhì)量控制程序、中國有關(guān)調(diào)查資料表明，如何切實(shí)加強(qiáng)和提高實(shí)驗(yàn)室的分析質(zhì)量是刻不容緩的。因此制定提高各級(jí)檢驗(yàn)人員素質(zhì)的相應(yīng)的教育培訓(xùn)計(jì)劃和考核法規(guī)，實(shí)行質(zhì)量控制等制度都是很關(guān)鍵的措施。具體內(nèi)容應(yīng)包括培養(yǎng)具有領(lǐng)導(dǎo)和監(jiān)管臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作能力的各級(jí)領(lǐng)導(dǎo)人才和熟練的技術(shù)干部；及時(shí)引進(jìn)和開發(fā)可靠性更高的新方法；協(xié)助對(duì)分析數(shù)據(jù)的處理，積極參與臨床有關(guān)咨詢；與臨床醫(yī)生密切合作，對(duì)臨床生物化學(xué)的理論原理和技術(shù)應(yīng)用不斷進(jìn)行總結(jié)和研討。

分析手段的現(xiàn)代化、自動(dòng)化以及微處理機(jī)的使用，是現(xiàn)代生化實(shí)驗(yàn)室的重要組成。能否合理地選用儀器，取決于日常工作量、使用人員素質(zhì)以及對(duì)使用效益和經(jīng)濟(jì)水平等有關(guān)因素的充分了解。制定各項(xiàng)測定項(xiàng)目最適用的分析方法，是一個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作的極其重要的環(huán)節(jié)，它要求充分考慮到方法的精密度、準(zhǔn)確性以及實(shí)用性。為保證這一目的，在較大醫(yī)院的臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)部門，有必要組織一定力量進(jìn)行有關(guān)方法學(xué)的開發(fā)工作，經(jīng)常研討新的方法學(xué)及自動(dòng)化設(shè)置，經(jīng)過試用，逐步推廣于常規(guī)工作。

人們?cè)絹碓揭庾R(shí)到，對(duì)疾病本質(zhì)和過程的透徹理解，在很大程度上需要有關(guān)生物化學(xué)分析的確切信息。臨床醫(yī)生正面臨著應(yīng)付實(shí)驗(yàn)室?guī)泶罅糠治鰯?shù)據(jù)的新課題。因此臨床生物化學(xué)工作者有必要在這方面和醫(yī)生合作，進(jìn)行更多的“翻譯”、“加工”，將生物化學(xué)分析結(jié)果的信息轉(zhuǎn)化為更高層次的醫(yī)學(xué)語言，從而為醫(yī)學(xué)科學(xué)和臨床診療的提高服務(wù)。

臨床生物化學(xué)研究方法

臨床生物化學(xué)在方法建立的原理確定后，尚需根據(jù)其原理來選擇合適的條件，以保證所建的方法可靠。下面以光度法為例介紹其條件選擇的主要環(huán)節(jié)。顏色反應(yīng)是光度分析的基礎(chǔ)，因此，用作光度測定的顏色反應(yīng)至少要具備以下幾條：反應(yīng)有較高的特異性，從而干擾?。环磻?yīng)產(chǎn)生的有色物質(zhì)吸光系數(shù)要大，大者靈敏度高；有色產(chǎn)物的離解度要小，小則穩(wěn)定；此外，還要求有色產(chǎn)物有恒定的組成成分，使產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定。由于影響顏色反應(yīng)的因素很多，如溫度、pH、試劑濃度、反應(yīng)的時(shí)間等等。這些因素在建立新方法時(shí)都要逐項(xiàng)試驗(yàn)，確定最佳實(shí)驗(yàn)條件。

選擇合適的吸收光譜

實(shí)際上就是測定顏色反應(yīng)產(chǎn)生的光吸收曲線。方法是在整個(gè)可見光區(qū)（400-700nm）以10nm（在接近最大吸收波長范圍還應(yīng)再細(xì)分）間隔。分為十幾個(gè)點(diǎn)測定其在不同波長時(shí)的吸光度，然后以吸光度為縱坐標(biāo)，波長為橫坐標(biāo)繪成光吸收曲線。在條件許可的情況下，應(yīng)采用雙光束分光光度計(jì)在可見光區(qū)進(jìn)行波長掃描，結(jié)果較為可靠。同時(shí)，還應(yīng)以同法分別測定其空白液和標(biāo)準(zhǔn)物顏色產(chǎn)物的吸收曲線。測定光吸收曲線的目的是找出最大吸收波長，作為光度法波長選擇的依據(jù)。因?yàn)樵谧畲笪詹ㄩL測定，可獲得最大靈敏度，且能更符合比耳定律。然而在實(shí)際使用中，不能單純考慮靈敏度高，還要考慮在測定濃度范圍能否符合比耳定律，并能在光度計(jì)準(zhǔn)確區(qū)域內(nèi)（吸光度0.2-0.85之間）讀出讀數(shù)。有時(shí)由于測定的最大吸收波長并不是所要測定物質(zhì)的特性吸收波長，即同時(shí)存在具有相似最大吸收的干擾物質(zhì)，為了保證實(shí)驗(yàn)的特異性，常改用特有而非最大吸收波長進(jìn)行測定。例如用磷鉬酸測定血糖，選用波長420nm，溶液對(duì)此波長的吸收比其它波長光線的吸收都低，其目的是使參考值有一個(gè)較低的吸收，這樣可允許在相同情況下對(duì)高出參考值的血糖也能得到準(zhǔn)確的讀數(shù)。因?yàn)樵谶@項(xiàng)測定中，高血糖是常見的變化方向。

測定方法適用的濃度范圍

根據(jù)光吸收定律，溶液的吸光度應(yīng)與溶液的濃度成正比。但由于有色物質(zhì)的電離、水解、締合等原因當(dāng)溶液稀釋或增濃時(shí)，有色物質(zhì)顏色的深淺并不按比例降低或增高，因而也就不符合光吸收定律。測定方法適用的濃度范圍是指分析的濃度范圍在直線線性段，濃度與吸光度之比為一常數(shù)，此時(shí)直線上任何一點(diǎn)的斜率tanθ相等，即：

tanθ=A1/C1=A2/C2=A3/C3=……=An/Cn=K

此處K即為校正常數(shù)，可用于結(jié)果計(jì)算。

通常稀溶液都是符合比耳定律的，但在濃度過高和過低時(shí)往往都不呈直線，說明低濃度部分亦有儀器的靈敏度和方法的檢測能力限制，所以，具體的測定就宜選擇在直線段濃度范圍內(nèi)進(jìn)行。以此還可用于確定標(biāo)本的用量，使具有臨床意義的標(biāo)本測定結(jié)果都落在直線范圍內(nèi)。

觀察影響顏色反應(yīng)的因素

影響顏色反應(yīng)的主要因素有：溶液pH的影響、雜質(zhì)的影響、反應(yīng)的溫度和時(shí)間、以及顏色的穩(wěn)定性等。這些都是光度法測定誤差的主要來源。都需要通過實(shí)驗(yàn)來觀察并控制在一個(gè)適宜的范圍內(nèi)。從而保證方法的準(zhǔn)確性和精密性。

溶液pH的影響有些溶液的顏色對(duì)pH值的改變非常靈敏。例如白蛋白在pH4左右可與溴甲酚綠結(jié)合后由黃色變成綠色，綠色的深淺與白蛋白濃度成正比，但是溴甲酚綠本身是一種pH指示劑，當(dāng)pH5.4時(shí)即由黃色轉(zhuǎn)變成綠色，在pH3.8時(shí)又由綠色變?yōu)辄S色。在白蛋白與溴甲酚綠結(jié)合顏色反應(yīng)中，如pH控制不好就很容易出現(xiàn)誤差，又如每種酶都有各自的最適pH，酶促反應(yīng)中，只有在其最適pH時(shí)才能發(fā)揮充分的催化活性。因此，在建立方法時(shí)可在不同pH值條件下（其它條件不變）令其反應(yīng)，以觀察顏色反應(yīng)的吸光度變化，從而選擇合適的pH值范圍來保證顏色反應(yīng)，以求較高的靈敏度和較好的線性。有時(shí)還需用相應(yīng)的pH緩沖液來維持反應(yīng)的pH，以利顏色反應(yīng)的正常進(jìn)行。

雜質(zhì)的影響由于臨床生化標(biāo)本中除含待測物質(zhì)外，還含有許多非測定物質(zhì)，成分十分復(fù)雜，它們有的可與有色產(chǎn)物作用，使產(chǎn)生的顏色逐漸退去，有的與待測物質(zhì)相類似，也能緩慢地與顯色試劑生成有色化合物或沉淀，有的本身是有色的等，都會(huì)影響被測物溶液的顏色。試驗(yàn)方法是將各種可疑物質(zhì)的純?nèi)芤鹤鳂?biāo)本單獨(dú)進(jìn)行測定，如產(chǎn)生顏色反應(yīng)，這說明該方法的特異性不高。如果將待測物質(zhì)混入可疑物質(zhì)作標(biāo)本測定，改變了被測物質(zhì)與試劑間的反應(yīng)，這是干擾。為此就需要進(jìn)一步改進(jìn)方法，或設(shè)立標(biāo)本空白，或?qū)?biāo)本作適當(dāng)處理，除去干擾物，或加入合適的干擾物掩蔽劑等，以提高方法的特異性。

反應(yīng)的溫度和時(shí)間有些有色物質(zhì)能迅速反應(yīng)生成，另一些有色物質(zhì)須經(jīng)過相當(dāng)長時(shí)間后反應(yīng)才能完全。提高反應(yīng)的溫度可以加速化學(xué)反應(yīng)，縮短反應(yīng)的時(shí)間。因此，如果在不恰當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間內(nèi)進(jìn)行比色，將會(huì)造成相當(dāng)大的誤差。這可以在不同的溫度下（如設(shè)定25℃，30℃，37℃）令其反應(yīng)，通過檢測吸光度來觀察各自反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)間（一般達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，隨后測定的吸光度不再變化），以選定適宜臨床應(yīng)用的反應(yīng)最佳溫度和時(shí)間。

穩(wěn)定性試驗(yàn)待測物質(zhì)經(jīng)顯色反應(yīng)產(chǎn)生的有色物穩(wěn)定與否，關(guān)系到測定結(jié)果的可靠性。某些有色物質(zhì)雖然生成很快，但卻不太穩(wěn)定，放置后色澤會(huì)逐步消退或起變化，有些干擾物雖不能與被測物質(zhì)同時(shí)發(fā)生顏色反應(yīng)，但當(dāng)放置一段時(shí)間后也能緩慢地與試劑顯色，使溶液顏色加深。因此，在方法建立的同時(shí)作穩(wěn)定性試驗(yàn)很有必要。試驗(yàn)的方法是用被測標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白溶液按方法要求進(jìn)行顯色反應(yīng)后，即刻及室溫放置不同時(shí)間，分別測定其吸光度，根據(jù)其吸光度的變化確定方法穩(wěn)定的時(shí)間范圍。一般要求有色溶液能穩(wěn)定二小時(shí)以上就能滿足臨床應(yīng)用的需要。必要時(shí)還要加以注明。

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