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第 3 3卷第 1 期 2 0 1 0 年 3月 江 西 植 保 J I ANGXI P L ANT P ROTE CTI ON v o 3 3 ， No 1 Ma E ， 2 O 1 0 茶樹葉面真菌與內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)的比較 張宇玲，李小容，楊 民和 ( 福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福州 3 5 0 1 0 8 ) 摘要 采用常規(guī)真菌分離法對健康茶樹葉片葉面真菌和內(nèi)生真菌進(jìn)行分離，比較了葉面真菌和內(nèi)生真菌的種群和 數(shù)量差異。結(jié)果表明：從茶樹品種黃旦 ( HD)共分離得到葉面真菌2 6 個形態(tài)型，內(nèi)生真菌l 8 個形態(tài)型；從鐵 音 ( T G V )共分離獲得葉面真菌l 6 個形態(tài)型，內(nèi)生真菌l 5 個形態(tài)型：分離所得真菌大多數(shù)為半知菌和予囊菌，少數(shù) 為擔(dān)子菌。 采用稀釋平板法和葉片組織黏附法兩種不同的真菌分離方法，獲得葉面真菌優(yōu)勢種的種類基本一致， 但各種 菌的數(shù)量差異明顯； 對黃旦和鐵觀音兩品種比較， 采用葉片組織黏附法分離所得葉面真菌的數(shù)量沒有差異， 但采用稀釋平板法所獲不同真菌的數(shù)量差異明顯。真菌分離結(jié)果表明在茶樹葉片表面和內(nèi)部組織中生長有顯著不 同的真菌群落。 關(guān)鍵詞；茶樹；葉面真菌；內(nèi)生真菌；分離；群落結(jié)構(gòu) l中圖分 類號= $ 5 7 1 1 ， Q 9 4 8 1 2 2 3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號：1 0 0 6 - 4 2 4 9( 2 0 1 0 ) 0 1 - 0 0 1 8 0 6 ， 植 物葉片棲 居有豐富 真菌群落。人們把附著 于葉面并可以定居和增殖的真菌群體稱為葉面真菌 ( f u 譴a l e p i p h y t e s ) 【I J ； 而將寄生于正常生長植物體 內(nèi)的真菌稱為內(nèi) 生真菌 ( f u n g a l e n d o p h y t e s )2 l 。已 有的絕大多數(shù)研究都將葉面真菌和內(nèi)生真菌獨(dú)立進(jìn) 行。因此，葉面真菌與內(nèi)生真菌雖然生存的微環(huán)境 相距不到 1咖 但人們對它們的種群結(jié)構(gòu)差異和相 互關(guān)系知之甚少 。近年來， 。由于微生態(tài)學(xué)理論和技 術(shù) 的 飛 速l f發(fā) 展 ， 人 們 逐 步 認(rèn) 識 到 植 物 葉 圍 ( p h y l l o s p h e r e ) 微生物的種群和互作關(guān)系比人們預(yù) 料的要更為復(fù)雜而多樣【3 】 。 2 0 世紀(jì)7 0 年代以來，已有一些零星的報道對健 康植物葉片上葉面真菌和內(nèi)生真菌作了比較研究。 日 本 學(xué) 者 Os o n o實(shí) 驗(yàn) 室 對 山 茱 萸(S w i d a c o n t r o v e r s a )、偃伏株木 ( C o r n u s s t o l o n if e r a )和純 齒山毛櫸 ( F a g u s c r e 口 )等植物的葉面真菌和內(nèi) 生真菌進(jìn)行了分離和比較。研究結(jié)果表明，植物葉 面和 內(nèi)部組織生長有明顯不同的真菌群落，真菌的 定植和分布受生長季節(jié)和葉片生育期的影響1 4 。 在 咖啡 ( c o ffe a a r a b i c a )的健康葉片上 ，生長有豐富 的真菌群落， 內(nèi)生真菌和葉片真菌的種群差異明顯， 交叉分布的種類很少：同時還發(fā)現(xiàn) ，內(nèi)生真菌的物 種多樣性比葉面真菌更為豐富；不 同取樣地點(diǎn)的同 種植物的l - f 片中，真菌群落也有差異p J 。 相對于種 i 類豐富、生態(tài)類型復(fù)雜多樣的植物， 這些研究結(jié)果 顯然不足于概述植物葉圍真菌的全貌 - 茶樹 ( C a m e l l ia s i n e n s i s )是一種重要的經(jīng)濟(jì)樹 種 ，有關(guān)茶樹相關(guān)微生物的研究 已經(jīng)積累了一些資 料。在茶園土壤微生物、茶樹生長繁殖與微生物、 微生物與茶葉加工貯藏、微生物與茶樹保護(hù)、微生 物與茶的綜合利用等多方面都有相關(guān)的報道【8 】 。盧 東升等對茶樹內(nèi)生真菌的種類及分布以及對豫南茶 園樹棲真菌、芽及葉棲真菌群落及種群演替。做了大 量調(diào)查 ，并對茶園微生物及其應(yīng)用進(jìn)行了很好的總 結(jié) 1 。 麗華等【 J 。 l 對茶樹 種 、葉片生育期和茶葉 化學(xué)成份對內(nèi)生真菌的影響做過報道。但是 ，同時 分離茶樹葉面真菌與內(nèi)生真 菌，比較、分析它們的 種群結(jié)構(gòu)及其差異，還未見相關(guān)的報道。 本研究對 茶樹葉面真菌與內(nèi)生真菌進(jìn)行分離和鑒定， 以期進(jìn) 一 步了解其種群結(jié)構(gòu)及微生態(tài)關(guān)系。 1 材料與方法 收稿日期：2 0 1 0 O 1 3 1 基金項(xiàng) 目：福建省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目資助 ( B 0 6 2 0 0 0 5 ) 作者簡介：張宇玲 ( I 9 8 5 ) ，_史，安徽亳州人 壩 生，主要從事植物與微生物互作方面的_ T = 作。 通訊作者：楊民和，教授，E - ma i l ：mi n h e 2 1 4 O n u e d u c n 2 0 1 0 年第 1 期 江 西 植 保 1 9 1 1 樣本罘集 從福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院實(shí)驗(yàn)茶園( 福州金山) 采集健康成熟的葉片，茶樹品種為黃旦和鐵觀音， 在茶園這兩品種相鄰種植 。采用五點(diǎn)取樣法 每品 種每點(diǎn)分別取健康成熟葉片1 o H，共5 0 片。成熟葉 片指得是當(dāng)年生長季節(jié)發(fā) 出的，葉色嫩綠、角質(zhì)化 不明顯的展開葉片。樣本編號后，裝入無菌紙袋， 帶回實(shí)驗(yàn)室后立即進(jìn)行真菌的分離 ，或?qū)⒅参飿颖?存放于4 冰箱中備用。 i1 2 葉面真菌 采用兩種方法分離茶樹葉面真菌。分離方法1 ， 葉片組織粘 附法L 3 1 ：將采集的同一品種的茶樹葉片 充分混合 ，然后隨機(jī)取2 0 片，用直徑為0 5 c m的無菌 打孔器取葉片組織塊 ，從每 一葉片隨機(jī)取6 個組織 塊，分別接入補(bǔ)加5 0 m g 鏈霉素的P D A 培養(yǎng)基中， 每直徑為9 c rn l的培養(yǎng)皿中放入6 8 個組織塊 ( 3 4 塊 近軸面朝下)，置于2 8 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h 后 ， 再在無菌條件下將葉片組織塊移出培養(yǎng)皿。將移走 葉片組織塊的培養(yǎng)皿放,X 2 8 C 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 待出現(xiàn)菌落時， 按菌落形態(tài)的不同，挑取少量菌絲 進(jìn)行分離純化。 分離方法2 ， 稀釋平板法： 將采集來 的同一品種的茶樹葉片混合，分別選取形狀大小相 近的茶樹n r 片l o h - ，置于盛有1 0 0 ml 無菌水的三角 瓶內(nèi)， 強(qiáng)力，、反復(fù)振蕩1 5 m i n 后，制得菌懸液，稀 釋 1 0 、I o 0 、l O 0 O 倍3 個不同濃度 ，用無菌吸管吸取 O 2 ml 接種到P D A平板中， 每個濃度梯度設(shè)3 個重復(fù)， 涂抹均勻后置于2 8 C 恒溫箱中培養(yǎng)：待菌落長出后 統(tǒng)計菌落數(shù)并挑取單菌落于P D A 平板上純化培養(yǎng)， 用于菌類 的鑒定。 1 3 內(nèi)生真菌分離 內(nèi)生真菌 的分離參見謝麗華等l l u 】 的方法。待葉 片組織周圍出現(xiàn)菌體時，進(jìn)行分離純化。 1 4 真菌形態(tài)鑒定 由于分離獲得的部分真菌在常規(guī)培養(yǎng)條件下不 產(chǎn)生繁殖體 ，按其在P D A培養(yǎng)基上的生長情況和菌 落形態(tài)劃分為不同的形態(tài)型 ( mo r p h o s p e c i e s )。誘 導(dǎo)產(chǎn)孢 的方法如下：分離純化的真菌移接 U P DA培 養(yǎng)基或經(jīng)高壓滅菌 的茶葉上 ，在2 8 恒溫 、黑暗條 件下培養(yǎng)。至菌絲長滿培養(yǎng)皿后 ，將培養(yǎng)皿取出， 放置于室溫下繼續(xù)培養(yǎng)；或在無菌條件下用接種環(huán) 輕刮菌絲表面，誘導(dǎo)真菌產(chǎn)生孢子。培養(yǎng)期間注意 觀察真菌生長特征，隨時進(jìn)行照相記錄。對在人工 培養(yǎng)條件能產(chǎn)孢的真菌，參照魏景超和陸家云等的 相關(guān)專著，進(jìn)行真菌屬 的初步鑒定 ：選擇優(yōu)勢種真 菌 ( 分離率三 3 0 )采用I T S 序列分析鑒定 。 1 5 優(yōu)勢真菌I T S 序列分析 1 5 1 基因組DN A的提取參照武漢琴等 ( 2 0 0 9 ) 的方法進(jìn)行。 1 5 2 r D N A I T S 的擴(kuò)增與序 列測定n r DN A I T S 區(qū)用引物I T S 4 ： 5 - T C C T C C G C T T AT T G AT AT G C 3 和I T S 5 ：5 - G GAA GT AA AAGT C G T AA C AAG G 3 ， 按程序： 9 5 預(yù)變性5 mi n ；接以9 5 3 0 s ， 5 6 3 0 S ， 7 2 3 0 s ，3 0 個 循環(huán) ；最后7 2 保溫7 mi n 進(jìn)行P C R 擴(kuò)增。引物 由上海生 生物1 l f _I 程有限公 司合成。擴(kuò) 增 的 反 應(yīng) 體 系(2 5 g 1 ) ： 超 純 水 1 6 7 5 g l ， 1 0 x Bu f f e r 2 5 g l ， 2 mmo l L d NT P 2 5 g l ， 1 0 g mo l L I TS 4 l p , l ，1 0 1 t mo l L I T S 5 1 g t ，T a q 酶0 2 5 g l ，模板1 l 。 P C R 產(chǎn)物經(jīng)凝膠回收、純化后送上海生工生物工程 有限公司測序 。 1 5 3 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建 以每個菌株的I T S 和 5 8 S 序列作為靶序列 ，在Ge n B a n k 中用B L AS T 程序 搜索同源序列，挑選與菌株序列相近的參考序列用 于系統(tǒng)發(fā)育分析 。利用B i o e d i t 軟件 編輯，C l u s t a l x 軟件將序列匹配排列，p h y l i p 3 6 7 構(gòu)建I T S 系統(tǒng)樹 ， 選用鄰接法 ( Ne i b o r j o i n i n g )分析，每次搜索進(jìn) 行隨機(jī)1 0 0 0 次重復(fù) ，獲得的 自展檢驗(yàn) ( b o o t s t r a p ) 數(shù)值標(biāo)記在分支上。 1 6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 葉面真菌和內(nèi)生真菌的分離率按以下公式進(jìn)行： 分 。 相對分離率( ) 某真菌 的菌落數(shù) 稀釋平板上真菌菌落總 數(shù) 數(shù)據(jù)的顯著性分析采用t 檢驗(yàn) ： 假設(shè)。 x 1 0 0 雙樣本等方差 2 結(jié)果與分析 2 1 茶樹葉面真菌與 內(nèi)生真菌多樣性 采用常規(guī)葉部真菌分離方法 ，依據(jù)P D A培養(yǎng)基 上菌落形態(tài)的差異 ，從茶樹 品種黃旦葉片上分離得 到葉面真菌共2 6 種形態(tài)型，其中1 5 種在P D A培養(yǎng)基 上能產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生繁殖體 ； 內(nèi)生真菌1 8 種形態(tài)型 ， 2 O 江 西 植 保 2 0 1 0年第 1 期 其 中6 種在P D A培養(yǎng)基上能產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生繁殖 體，葉面真菌與內(nèi)生真菌檢 出率分別為1 0 0 和 8 7 5 2 ， 其中分離率大于3 的共1 8 種形態(tài)型。 從茶 樹品種鐵觀音葉片分離到葉面真菌1 6 種形態(tài)型，其 中1 0 種在P D A培養(yǎng)基上 能產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生繁殖體： 內(nèi)生真菌1 5 種形態(tài)型 ，其 中7 種在P D A培養(yǎng)基上能 產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生繁殖體 ，葉面真菌與內(nèi)生真菌檢 出 率分別為1 0 0 H 9 4 2 7 ，其中分離率大于3 的共 l 2 種形態(tài)型。人工培養(yǎng)條件下能產(chǎn)生繁殖體的真菌 包括擬盤多毛孢屬 ( P e s t a l o t i o p s i s s p p )、芽枝霉屬 ( C l a d o s p o r i u m s p )、短梗霉屬 ( A u r e o b a s i d i u m s p , ) 、 青霉屬 ( P e n i c i l l i u m s p p ) 、 曲霉屬 ( A s p e r g i l l u s s p )、鐮 刀菌屬 ( F u s a r i u m s p )、球座 菌屬 ( Gu i g n a r d i a s p )、刺盤孢屬 ( C o l l e t o t r i c h u m s p p ) 的真菌。本研究中，同時分離獲得一些人工培養(yǎng)條 件下不產(chǎn)孢或難于產(chǎn)孢的、未鑒定的真菌。 2 2 優(yōu)勢真菌鑒定 對分離率大于3 0 的6 種茶樹葉圍真菌，在形 態(tài)學(xué)觀察的基礎(chǔ)上 ， 進(jìn)一步分析其I T S 序列， 采用鄰 接法 ( N e i b o r j o i n i n g ) 構(gòu)建N J 樹， 進(jìn)行初步的鑒 定。結(jié)果表明：菌株B l 為P e s t a l o t i o p s is t h e a e ，菌株 B 2 為C l a d o s p o H u m c l a d o s p o r i o i d e s( Ge n 3 a n k 序 列 號：F J 2 1 6 4 5 3 ) ，菌株B 4 為B o t r y o s p h a e r i a r h o d i n a (Ge n Ba n k序 列 號 ： F J 2 1 6 4 5 4)， 菌 株 B 8為 A u mo b a s i d i u m p u l l u l a n s (G e n B a n k序 列 號 ： F J 2 1 6 4 5 5) ，菌株 n s y 一 1 2為Gu i g n a r d i a ma n g l e r a e ( Ge n B a n k 序列號 ：E U 6 7 1 0 7 7 ) ，菌株N1 3 確定為 Co l l e t o t r i c h u m s p 。 2 3 兩種方法分離葉面真菌比較 采用兩種分離方法均分離到4 種相同的優(yōu)勢種 葉面真菌。但從分離所得的真菌總數(shù)上，稀釋平板 法所得葉面真菌種類 ( 形態(tài)型)少于葉片組織黏附 法所獲得的真菌：在茶樹品種黃旦上，采用稀釋平 板法分離到葉面真菌1 5 種形態(tài)型，而采用葉片組織 黏附法獲得2 6 種形態(tài)型；在鐵觀音上，采用稀釋平 板法分離到葉面真菌l 2 種形態(tài)型，而采用葉片組織 黏附法獲得 l 6 種形態(tài)型。采用葉片黏附法獲得的4 種優(yōu)勢真菌在茶樹品種黃旦、鐵觀音中的分離率無 顯著差異 ( p O O 1 )，但采用稀釋平板法分離獲得 的P e s t a l o t i o p s i s t h e a e 、 C l a d o s p o r i u m c l a d o s p o r i o i d e s 、 Au r e o b a s i d i u m p u l l u l a n s 在黃旦利鐵 觀音 中的相對 分離率存在顯著 差異 ( p 0 O 1 )， B o t r y o s p h a e r i a r h o d i n a 無顯著差異 ( p = O 3 3 ) ( 表1 ) 。 同時，采用不同分離方法，真菌數(shù)量也大不相同， 如采用葉片黏附法，P e s t a l o t i o p s i s t h e a e 在黃 旦和鐵 觀音中的分離率分別為9 0 5 7 和9 6 7 4 ： 而采用稀 釋平板法，相對分離率分別只有7 4 7 和3 1 1 1 ； 其它3 種真菌的數(shù)量也存在明顯的差異 ( 表1 )。因 此，采用不同的葉片表面真菌分離方法 ，檢 出真菌 的種類和數(shù)量，均表現(xiàn)出明顯的籌異。 表1 葉面真菌兩種不同分離方法結(jié)果比較 Ta b l e 1 Co mp a r i s o n o f f u n g a l e p i p h y t e s wi t h t wo i s o l a t i o n m e t h o d s p 0 0 1 ：” P 6 4 1 0 )；內(nèi)生真 菌中，G u i g n a r d ia m a n g if e r a e和 C o l l e t o t r i c h u m s p 可以部分重疊，有2 2 3 3 3 5 6 7 的C o l l e w m h u m 和G u ig n a r d ia 噼 從同一組織塊中同時長 出。而P e s t a l o t i o p s i s t h e a e則一般單獨(dú)長 出 ( 表2 )。 表2 茶葉葉面真菌與內(nèi)生真菌優(yōu)勢種比較 T a b l e 2 E p i p h y t e s v s e n d o p h y t e s i n t h e s i x ma j o r f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m t e a l e a v e s 3 討 論 結(jié)果顯示，采用不同的分離方法用于分析真菌 的種群數(shù)量和結(jié)構(gòu)，能顯著地改變分離結(jié)果。葉片 洗滌后稀釋平板分離法對那些以孢子粘附在葉面上 的真菌計數(shù)較為準(zhǔn)確 ，但 以菌絲粘 附的真菌則難以 洗下 。而在培養(yǎng)基上黏附一定時間后移走葉片組織 塊 ，卻能分離到更多種類的葉面真菌。從葉片組織 黏附法的分離結(jié)果看，移去茶葉組織塊 ，培養(yǎng)2 d 后 即可見 茶擬盤多毛孢 的菌絲 大量生長 。因此 ，在 P D A培養(yǎng)基上，茶擬盤多毛孢具有更強(qiáng)的生長能 力。對照于稀釋平板法的結(jié)果 ( 表 1 )，可見茶擬盤 多毛孢在茶葉表面的數(shù)量并不比芽枝狀枝孢霉和出 芽短梗霉更多，但因生長能力強(qiáng) ，加上組織黏附法 對葉面的真菌沒有稀釋作用，因而生長迅速的真菌 易造成對生長慢的真菌的抑制作用。除少數(shù)情況外 【 J ，大多數(shù)研究者采用稀釋平板法分離葉面真菌。 本研究的結(jié)果表明，采用兩種方法分離、分析植物 葉面真菌，各有優(yōu)點(diǎn)。但由于這些方法均依賴于培 養(yǎng)基的篩選作用， 因而也存在明顯的缺陷。 采用P C R 擴(kuò)增和變性梯度膠電泳技術(shù) ( D G G E ) ， Y a n g等I ll2 J 在植物葉片表面洗滌液中檢測到豐富的微生物群 落 ， 其中許多種類在人工培養(yǎng)基上難于分離。因此， 結(jié)合應(yīng)用人工分離和分子生物學(xué)技術(shù)，能更為全面 地反映自然條件下茶樹葉圍真菌群落結(jié)構(gòu)的真實(shí)情 況 。 研究結(jié)果表明，茶樹葉圍維持有豐富的真菌物 種多樣性：茶葉表面和內(nèi)部組織中，生長有完全不 同的真菌群落。黃旦葉面真菌與內(nèi)生真菌的種類 ( p 0 0 1 )與數(shù)量 ( p 0 0 5 )均存在顯著不同，在 黃旦f t r 片中葉面真菌的物種多樣性 ( 2 6 種形態(tài)型) 遠(yuǎn)大于內(nèi)生真菌物種多樣性 ( 1 8 種形態(tài)型)；而在 鐵觀音中，葉面真菌的物種多樣性 ( 1 6 種)與內(nèi)生 真菌物種多樣性 ( 1 5 種 )差異不大 ( p = O 5 5 )，但 各種真菌的數(shù)量存在顯著差異 ( p 0 0 1 ) ( 表 1 ，表 2 )。在茶樹葉圍占優(yōu)勢的6 種真菌中，芽枝狀枝孢 霉、出芽短梗霉和柑桔葡萄座腔菌只存在于茶葉的 表面 ；而芒果球座菌和刺盤孢菌只生活與茶葉組織 內(nèi)。茶擬盤多毛孢既可生活于茶葉組織 內(nèi)，也可生 活于茶葉表面 ( 表2 )：但茶擬盤多毛孢在茶葉表面 占據(jù)優(yōu)勢， 在茶葉內(nèi)部組織中則分布很少 ( 3 ) 。 S a n t a ma r i a B a y ma n L 3 J 對咖M n -I 。 面真菌與 內(nèi)生真 菌進(jìn)行了研究，共分離得到內(nèi)生真菌6 6 種 ，葉面真 菌6 3 種，其中僅4 種為葉面真菌與內(nèi)生真菌所共有 ； 在葉面真菌中，B o t r y o s p h a e r i a s p S H P e s t a l o t i a s p 是 優(yōu)勢種真菌 ；而在 內(nèi)生真菌 中，X y l a r ia s p 、 C o l l e r o t r i e h u m s p 和G u i g n a r d i a s p 是優(yōu)勢 種真 菌。在 山茱萸 ( S w i d a c o n o v e r s a )、純齒山毛櫸 ( F a g u s c r e n a t a )和偃伏株術(shù) ( C o mu s s t o l o n if e r a ) 的葉部真菌研究中， 也得 出相似的結(jié)果【4 7 1 。 Os o n o i i 2 2 江 西 植 保 _ r 2 0 1：0 年 第 1 期 從山茶 ( C a m e l l ia j a p o n i c a ) 葉片中分離得到真菌共 7 9 種，其中葉面真菌5 2 種，內(nèi)生真菌4 4 種，1 7 種為 葉面真菌與 內(nèi)生真菌所共有 ：P e s t a l o t i o p s i s s p 、 C l a d o s p o r i u m c l a d o s p o r i o i d e s ， C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s 、 A u r e o b a s i d i u m p u l l u l a n s 等真菌作為 優(yōu) 勢種葉面真菌存在 ，而G e n i c u l o s p r i u m s p ， C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s和 C a c u t a t u m 則是 內(nèi)生 真 菌 中的 優(yōu) 勢種 ：在 優(yōu) 勢 種 中 ，只 有 c o l i e to t r ic h u m g l o e o s p o r i o id e s為葉面真菌和內(nèi)生 真菌種群所共有。和本研究的結(jié)果相比較，雖然同 為山茶屬植物 ，茶樹和山茶葉面真菌的種群組成較 為相似，但內(nèi)生真菌的種群組成則很不同。以上分 析表明，在植物葉圍，不同物種之間優(yōu)勢種葉面真 菌和 內(nèi)生真菌的種類可能有不同：但在同一物種葉 片上，葉面真菌與內(nèi)生真菌種群的組成均存在顯著 的差異 。前人研究還顯示，雖然植物葉圍真菌的物 種多樣性非常豐富， 但優(yōu)勢種真菌只是少數(shù)幾種【 1 1 。本研究的結(jié)果支持這一結(jié)論。 研究結(jié)果還顯示，在茶樹葉嗣的優(yōu)勢真菌中， 除茶擬盤多毛孢可 以明確為茶樹葉部的病原菌，在 一 定條件下可導(dǎo)致茶樹輪斑病外 ，本研究分離獲得 的其它葉圍真菌，特別是優(yōu)勢種真菌，在茶樹中均 未有作為病原菌的記錄【 l 引 。這些真菌可能在維持茶 樹葉圍微生態(tài)平衡和病蟲害控制等方面發(fā)揮重要的 作用 。當(dāng)然 ，有 些真 菌也可 能 是茶樹 的非 寄主 ( n o n h o s t ) 寄生物 ， 在一定條件下能導(dǎo)致其它植物 的病害。如芒果球座菌，是熱帶和亞熱帶植物葉部 的常見 內(nèi)生真菌 ，寄主范圍非常廣泛，但偶爾也能 導(dǎo)致植物 的病 】 。像人體和動物腸道微生態(tài)系一 樣 ，植物葉圍微生態(tài)系中微生物的種群結(jié)構(gòu)和數(shù)量 平衡 ，可能也會對植物健康產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。 參考文獻(xiàn)： 1 】施雯，張漢波葉面微環(huán)境和微生物群落微生物學(xué)通 報， 2 0 0 7 ， 3 4 ( 4 ) ： 7 6 1 7 6 4 【 2 】P e t r i n i O F u n g a l e n d o p h y t e s o f t r e e l e a v e s I n ： A n d r e ws j H，Hi r a n o S S e d s M i c r o b i a l E c o l o g y o f Le a v e s Ne w Yo r k ： S p r i n g e r Ve r l a g ， 1 9 91 ，1 7 9 - 1 9 7 【 3 】 S a n t a ma n a J ， B a y ma n P F u n g a l e p i p h y t e s a n d e r i d o p h y t e s o f c o f f e e l e a v e s ( C o ffe a a r a b i c a ) Mi c r o b i a l E c o I b g y ， 2 0 0 5 5 d ： 1 8 【 4 】 O s o n o T ， Mo r i A C o l o n i z a t i o n o f J a p a n e s e b e e c h l e a v e s b y p h y l l o s p h e r e f u n g i My c o s c i e n c e ， 2 0 0 3 ， 4 4： 4 3 7 - 4 4 1 5 】 O s o n o T ， Mo r i A Di s t r i b u t i o n o f p h y l l o s p h e r e f u n g i w i t h i n t h e c a n o p y o f g i a n t d o g wo o d My c o s c i e n c e ，2 0 0 4 4 5 ： l 61 1 6 8 6 】 O s o n o T ， B h a tt a B K 。 T a k e d a H P h y l lo s p h e r e t h n g i o n l i v i n g a n d d e c o mp o s i n g l e a v e s o f g i a n t d o g wo o d 2 0 0 4 ， My c o s c i e n c e ， 4 5 ： 3 5 4 1 【 7 】Os o n o T E n d o p h y t i c a n d e p i p h y t i c p h y l l o s p h e r e f u n g i o f r e d - o s i e r d o g w o o d ( C o r n u s s t o l o n r o ) i n B r i t i s h ：Co l u mb i a My c o s c i e n c e ， 2 0 0 7 ， 4 8： 4 7 5 2 【 8 】趙芹 茶微生物研究現(xiàn)狀茶I 1。 l ， 1 9 9 9 ， 2 5 ( 1 ) ： 1 8 - 1 9 9 】盧東升茶園微生物與茶園病害微生態(tài)控制北京：中 國農(nóng)業(yè) 出版社 2 0 0 6 【 l 0 】謝麗華，徐焰平，王國紅，等茶樹品種、 n t 生育期和 茶葉化學(xué)成份對內(nèi)生真菌的影n 向 菌物研究， 2 0 0 6 ， 4 ( 3 ) ： 3 5 , 4 1 【 l 1 】武漢琴，蘇經(jīng)遷，謝I1月英，等茶樹內(nèi)生術(shù)霉種的茶定 及其 在植物 體內(nèi) 的定殖 菌 物學(xué)報 ，主 0 0 9 ，2 8 ( 3 ) ： 3 4 3 4 8 【 1 2 】 Ya n g C H ，C r o w i e y D E ， B o r n e m a n 【 J ， 口 ， Mi c r o b i a l p h y l l o a p h e r e p 6 p u l a t i o n a r e mo r e e o mp l X t h a n p r e v i o u s l y r e a l i z e d P r o c Na t l Ac a d S c i US A ； 2 0 0 1 ， 9 8 ( 7 ) ： 3 8 8 9 3 8 9 4 ， 【 1 3 】 Os o n o T E n d o p h y t i c a n d e p i p h y t i c p h y l l o s p h e r e f u n g i o f C a m e l l i a j a p o n i c a ：s e a s o a a l a n d l e a f a g e - d e p e n d e n t v a r i a t i o n s My c o l o g i a , 2 0 0 8 ， l o 0 ( 3 ) ： 3 8 7 - 3 9 1 【 1 4 】陳雪芬中國常見茶樹病害見：中國農(nóng)業(yè)百科傘書編 輯部編著中國農(nóng)業(yè)百科全書 茶業(yè)卷北京： 農(nóng)業(yè) 出 版社， 1 9 8 8 3 3 4 【 1 5 】B a a y a n R P ，B o n a n t s P J M，Ve r k l e y G l e ，a 1 No n p a t h o g e n i c i s o l a t e s o f t h e c i t r u s b l a c k p O t f u n g u s ， Gu i g n a r d i a c i t r i c a r p a ， i d e n t i fi e d a s a c o s mo p o l i t a n e n d o p h y t e o f w o o d y p l a n t s ， G ma n g l a e【 P h y l l o s t i c t a c a p i t a l e n s i s ) P h y t o p a t h o l o g y ， 2 0 0 2 ， 9 2 ( 5 ) ： 4 6 4 4 7 7 ( 下接第 2 4頁 ) 2 0 1 0年第 1 期 江 西 植 保 2 4 2 結(jié)果與分析 2 1 安全性 試驗(yàn)過程中， 各處理對水蕹菜未產(chǎn)生藥害癥狀， 安全性較好。 2 2 防治效果 試驗(yàn)結(jié)果表明：苜核 蘇云菌 S C對水蕹菜鱗翅 日害蟲具有顯著的防治效果。藥后 7 d ，苜核 蘇云 菌 S C 5 0 0 倍液、7 5 0倍液，4 0 辛硫磷 E C 7 5 0倍 液 3個處理的葉片被害率分別為 2 3 3 、3 0 0 、 3 6 7 ， 防治效果均在 8 0 以上， 極顯著高 于苜核 蘇 云菌 S C l 5 0 0處理的防效。約后 1 5 d ，苜核 蘇云菌 S C 5 0 0倍液、7 5 0倍液 2個處理的丌 1 片被害率為 4 6 7 、5 3 3 ，防治效果為 9 4 0 4 、9 3 1 9 ，極 顯著高于苜核 蘇云菌 S C 1 5 0 0 處理的防效利對照藥 劑 4 0 辛硫磷 E C 7 5 0倍液處理的防效。詳見表 1 。 表 1 苜核蘇云菌 S C防治水蕹菜鱗翅 目 害蟲田問藥效試驗(yàn)結(jié)果 差異顯著性測定采用“ DMR T 法。同列中凡相同字母者表示在同一水平上差異不顯著 3 小結(jié)與討論 苜核 蘇云菌 S C 是一種新型殺蟲劑，其速殺性 好 、持效期長、殺蟲譜廣，在生產(chǎn)中具有廣泛的推 廣應(yīng)用前景 。推薦使用劑量為 5 0 0 7 5 0倍液 ，用藥 時間掌握在鱗翅 目害蟲低齡幼蟲盛發(fā)期。 往使J j 時， 按每壺水 1 5 k g 加入苜核 蘇云菌 S C制劑 2 0 3 O ral ( 即配制成 5 0 0 7 5 0倍液 ) ，稀釋 時先剛 1 左 的水稀釋成母液后，再稀釋攪拌均勻后噴霧。施藥 宜在陰天全天或晴天下午 4時后進(jìn)行， 以提高防效。 ( 上接第 2 2頁) Co mp a r a t i v e An a l y s i s o f Ep i p h y t i c a n d En d o p h y t i e Ph y l l o s p h e r e Fu n g i o f Ca me ra s i n e n s i s ZHANG Yu Li n g ， LI Xi a o Ro ng ， YANG M i n He ( C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s ， F u j i a n N o r ma l Un i v e r s i t y ， F u z h o u 3 5 0 1 0 8 ， C h i n a ) Ab s t r a c t ：I n t h e p r e s e n t s t u d y ，f u n g a l e p i p h y t e s a n d e n d o p h y t e s we r e i s o l a t e d f r o m h e a l t h y l e a v e s o f Ca me l l i a s i n

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網(wǎng)址: 茶樹葉面真菌與內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)的比較 http://m.u1s5d6.cn/newsview852589.html