X X 5 2毒奠2 固定化酶法制備低聚半乳糖的工藝研究 摘要 低聚糖類作為功能性食品基料，為目前世界研究熱點，低聚半乳糖是其 中一種，它是由3～10個分子半乳糖和葡萄糖組成的一類寡糖，能高效地促 進(jìn)雙歧桿菌的生長。低聚半乳糖的合成主要是以乳糖為原料，通過B一半乳糖 苷酶的轉(zhuǎn)半乳糖苷反應(yīng)獲得。本文研究了米曲霉B．半乳糖苷酶催化合成低聚 半乳糖的過程，包括酶的制備、酶的固定化、酶促合成及產(chǎn)物分離等，為低 聚半乳糖的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。 對粗酶液進(jìn)行硫酸銨分級沉淀，結(jié)果表明去除雜蛋白的最佳硫酸銨飽和 度為40％；沉淀酶蛋白的最佳硫酸銨飽和度為80％。_B～半乳糖苷酶的最佳 反應(yīng)溫度和最適pH分別為55℃和6．0，該酶具有較好的熱穩(wěn)定性，酶作用于 底物乳糖的米氏常數(shù)Km和最大反應(yīng)速度Vmax分別為23．8mmol／L和23．9 u tool／(L．rain)。 通過對酶固定化方法的篩選，選用海藻酸鈣對酶進(jìn)行包埋并加以戊二醛 交聯(lián)，操作簡單，酶活力回收率高。當(dāng)海藻酸鈉濃度4％、戊二醛濃度0．3％、 酶用量30％時，固定化效果較好；酶固定化以后對熱、pH的耐受范圍變寬， 最佳反應(yīng)溫度與pH沒有改變，酶的貯存穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性較好，固定化后 Km值降低，對底物的親和力增強(qiáng)。 用薄層色譜法檢測低聚半乳糖糖漿，結(jié)果表明以正丙醇：79=85：15為展 開劑、苯胺一二苯胺一磷酸為顯色劑、O．2“∥O．5 u L的點樣量時，分離效果較 好。 通過單因素試驗和L。。(45)正交試驗，確定合成低聚半乳糖的最佳工藝條 通過單因素試驗和L。。(45)正交試驗，確定合成低聚半乳糖的最佳工藝條 件：溫度55 9C、pH6．0、乳糖濃度40％、加酶量40u償(乳糖)、反應(yīng)時間32h， 水解40％的乳糖，低聚半乳糖的產(chǎn)率達(dá)32％。 對001×7樹脂分離低聚半乳糖的參數(shù)進(jìn)行初步研究，結(jié)果表明：溫度為 60℃、進(jìn)樣量為lOmL、洗脫劑流速為3．OmL／min、樹脂床高度600mm時能 有效去除糖漿中的單糖和二糖，低聚半乳糖的含量可達(dá)68％，該法操作簡單、 價廉、分離效果好，是一種很有前途的分離方法，若進(jìn)一步改變柱高度，有望得 到更理想的效果。 關(guān)鍵詞：米曲霉，D一半乳糖苷酶，低聚半乳糖，固定化酶，分離 PRODUCTION PRODUCTION OF GALACTO．OLIGOSACCHARIDES FROM LACTOSE BY D田ⅥoBIL【ZEDB．GALACTOSIDASE ABSTRACT Oligosaccharides as the basic material of functional food is becoming the hot point of study in the world．Galacto—oligosaccharides(GOS)consisting of 3 tolO molecules of galactose and glucose，ale produced from lactose via transgalactosylaction actions of口 一galactosidase and used as a growth—promoting factor of Bifidobacteriant In this paper， preparation of enzyme，immbilization of enzyme，process of enzymatic synthesis and separation of products were studied with the object of designing a industrial process for GOS production by the B·galactosidase fromAspergillus oryzae． Crude enzyme solution Was grade precipitated with ammonia sulfate，showed that 40％saturation degree was the best to remove impurity protein and 80％saturation degree was the best to deposit the enzyme protein．The optimum temperature and pH of D—galactosidase activity were 55。C and pH6．0 respectively，the enzyme activity exhibited thermostability,the Km value and Vmax

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