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丙酮酸液相檢測(cè)方法

來(lái)源：泰然健康網(wǎng) 時(shí)間：2025年05月18日 16:02

丙酮酸是所有生物細(xì)胞糖代謝的重要中間體，它是一種酸性較弱的有機(jī)酸，分子結(jié)構(gòu)為CH3COCOOH，同時(shí)含有活化酮和羧基基團(tuán)?？勺鳛樵?，應(yīng)用于化學(xué)、制藥、食品、農(nóng)業(yè)、生物等領(lǐng)域。

通過(guò)乙酰CoA和三羧酸循環(huán)，丙酮酸可以實(shí)現(xiàn)糖、脂肪、氨基酸之間的互相轉(zhuǎn)化。丙酮酸是糖酵解途徑的最終產(chǎn)物，在細(xì)胞漿中還原為乳酸為機(jī)體供能，或進(jìn)入線粒體氧化成乙酰CoA，進(jìn)入三羧酸循環(huán)，被氧化成二氧化碳和水，進(jìn)行葡萄糖有氧代謝。容易與氮化物、醛、鹵化物、磷化物等反應(yīng)，參與生物體的糖代謝，以及膠質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)等的合成、代謝等。

檢測(cè)樣本中丙酮酸含量，主要采用高效液相色譜（HPLC）法。基本步驟包括樣品制備、色譜條件設(shè)置、標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品測(cè)定和計(jì)算。

一、樣品準(zhǔn)備

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇適當(dāng)?shù)纳飿颖荆缂?xì)胞提取物、組織勻漿或體液等。對(duì)樣本進(jìn)行必要的預(yù)處理，如離心、過(guò)濾或稀釋，以去除雜質(zhì)并調(diào)整樣本濃度。

二、色譜條件優(yōu)化

在選擇色譜柱時(shí)，需考慮丙酮酸的極性和分子量，選擇適合的色譜柱類型。同時(shí)，優(yōu)化流動(dòng)相組成和流速，以獲得最佳的分離效果和檢測(cè)靈敏度。如采用氨基柱，柱溫30℃，乙腈-磷酸二氫鉀（梯度洗脫）為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)210nm等。

三、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

使用純丙酮酸制備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積或峰高。以丙酮酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線性關(guān)系，以便后續(xù)樣品中丙酮酸含量的準(zhǔn)確計(jì)算。準(zhǔn)確稱取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品，按要求的溶劑，配制5,10,20,50,100,200ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)測(cè)定的色譜峰面積，對(duì)應(yīng)濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程和回收率。