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左旋多巴(L

來源:泰然健康網 時間:2024年12月28日 20:50

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1、生物酶催化生產L-多巴簡介一、L-多巴簡介左旋多巴(3,4-dihydroxyphenyl-L-ananine,簡稱L-DOPA)的化學名稱為3,4-二羥基苯基丙氨酸,其結構式為:作為一種重要的生物活性物質,L-DOPA是從L-酪氨酸到兒茶酚或黑色素的生化代謝途徑過程中的重要中間產物。L-DOPA的衍生物—多巴胺是一種重要的神經遞質,由于多巴胺不能透過血腦屏障進入腦組織,所以不能通過補充多巴胺來治療帕金森氏病,而L-DOPA可以通過血腦屏障,并在腦組織中脫羧形成多巴胺,從而使腦組織中多巴胺含量增加而達到治療的

2、目的。Birkmayer于1961年用左旋多巴治療PD獲得明顯療效。由羅氏公司開發(fā),其制劑美多巴于1973年7月在瑞士首次上市。迄今為止,仍是治療帕金森病最有效的藥物之一。L-DOPA還可用來治療弱視;利用酪氨酸酶將L-酪氨酸轉化,經L-DOPA形成黑色素,可用于毛發(fā)染色;此外,人們還發(fā)現(xiàn)L-DOPA有抗衰老的功效。二、L-多巴的合成方法1911年,CasimirFunk在實驗室中第一次成功合成D,L-DOPA。1913年,MarcusGuggenheim從蠶豆豆莢中第一次分離提取到天然存在于植物體內的L-D

3、OPA。目前,L-DOPA主要通過從植物中提取、化學法合成以及微生物酶法轉化等方法生產獲得。雖然貓豆等植物中存在的多巴都是左旋的,提取過程中免去了與手性異構體D-DOPA的拆分工藝,并且L-DOPA的提取得率也相應得到了一些提高,但由于受到原料來源少、產量小的限制,因而生產成本較高,從植物中提取L-DOPA難以大規(guī)模生產,遠不能滿足市場需求。上世紀70年代初,國外化學法合成L-DOPA的年產量已達150噸,但由化學法所合成出來的產物是D-型和L-型的混合物,而D-DOPA會引起人體毒性反應,因此應用于醫(yī)學臨床

4、之前必須通過控制旋光度的方法來減少D-DOPA的影響。解決此問題的最好辦法是使D-型和L-型多巴完全分開,但D-型和L-型多巴的拆分非常困難。與從植物中提取及化學合成相比,微生物酶法生物合成L-DOPA,具有生產周期短、可連續(xù)大批量生產等優(yōu)點。2005年世界L-DOPA年產量為250噸左右,其中大部分是通過微生物酶法生物合成的。一、本項目技術介紹酪氨酸酚裂解酶,又名β-酪氨酸酶,以PLP為輔酶,TPL可以催化L-酪氨酸發(fā)生β-消去反應生成苯酚、丙酮酸和氨。由于這個反應是可逆的,將鄰苯二酚代替苯酚后,可由鄰苯二

5、酚、丙酮酸和氨可在TPL催化下生成L-DOPA。本項目技術將編碼TPL的基因片段轉入大腸桿菌中進行高密度發(fā)酵表達,從而獲得大量酪氨酸酚裂解酶。以鄰苯二酚、丙酮酸和氨為底物,經TPL催化反應生成L-多巴。目前本項目技術指標發(fā)酵24h左右濕菌重100g/L左右,生物轉化反應20h左右,產物濃度50g/L左右。工程菌的構建和發(fā)酵、轉化工藝均還在優(yōu)化中,技術指標仍有提升空間。一、成本估算指標:轉化反應投菌量為6%,產物濃度50g/L,轉化率90%,純化收率80%。發(fā)酵菌體濕重(粗酶)為120kg/t左右。1t發(fā)酵液成

6、本(包括原料、人工及能耗)為2400元左右。表11T轉化反應液成本估算試劑單價(元/Kg)用量(Kg)總價(元)鄰苯二酚27.531.02853.05丙酮酸5024.811240.5硫酸銨1.037.2337.23濕菌體20601200合計3330.78L-多巴40如上表,最后得到40kg產品,成本約為83.27元/kg(包括發(fā)酵全部成本、轉化反應原料成本),其余包括分離純化成本及能耗、人工等成本也按83.27元/kg計算,即L-多巴的生產成本估算為166.54元/kg。

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