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茶葉有效成分分離制備技術(shù)茶氨酸的的提取純化目錄壹貳概述茶氨酸的提取純化壹概述一、概述茶氨酸(L-theanine)系統(tǒng)命名為：N-乙基-L-谷氨酰胺(N-ethyl-L-glutamine)，是1950年酒戶彌二郎博士在研究玉露茶鮮爽滋味成分的過程中，從新梢中分離鑒定岀的不參與組成蛋白質(zhì)的一種氨基酸，為茶葉的特征氨基酸。它在綠茶中占游離氨基酸的40%?60%，是茶葉中含量最多的氨基酸，在高級(jí)綠茶、新茶中含量豐富，占干茶含量的1%?2%。其結(jié)構(gòu)式(陳宗道等，1999)：貳茶氨酸的提取純化二、茶氨酸的提取純化提取茶氨酸特殊試劑沉淀法是采用某些有機(jī)或無機(jī)物與相應(yīng)氨基酸形成不溶性衍生物的一種分離方法。茶氨酸與堿式碳酸銅生成淡紫色柱狀銅鹽，利用此性質(zhì)可將茶氨酸分離。因茶葉中存在的游離氨基酸為水溶性的，選用熱水浸提。用醋酸鉛沉淀去除茶湯中的蛋白質(zhì)、多酚類和部分色素。通H2S去除過剩的鉛，用氯仿萃取去除咖啡堿。茶湯中茶氨酸經(jīng)堿式碳酸銅成鹽后，過濾除去其他組分。茶氨酸銅鹽經(jīng)稀硫酸溶解、加入H2S和適量Ba(ＯH)2抽濾去濾渣、濃縮、精制后得天然茶氨酸純品。但是此法收率較低，引入雜質(zhì)重金屬離子Pb2+、Cu2+，得用硫化氫除Pb2+、Cu2+，而硫化氫制氣比較麻煩，還要加入Ba(ＯH)2沉淀硫酸根離子，工序較多。茶氨酸銅鹽在稀硫酸中溶解度不大，為使銅鹽溶解，加入稀硫酸量相當(dāng)大，這樣造成除銅鹽硫酸根時(shí)，形成大量硫酸銳沉淀，且造成茶氨酸損失。（一）用特殊試劑沉淀法二、茶氨酸的提取純化（二）離子交換法提取茶氨酸用茶末6倍量的熱水于60°C下浸提3h，過濾，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH為3.5，加入1%的殼聚糖溶液絮凝去雜后，用非極性大孔吸附樹脂脫色及除去大分子物質(zhì)，過濾濃縮，濃縮液調(diào)節(jié)至中性后加熱至70°C，攪拌下加入堿式碳酸銅，得紫色沉淀物。沉淀用1mol/LH2SO4溶解得茶氨酸、硫酸銅混合液，通入足量的H2S氣體以去除銅離子，加入適量Ba(OH)2沉淀硫酸根離子，抽濾得茶氨酸溶液，經(jīng)減壓濃縮，真空干燥，得茶氨酸粗品，無水乙醇重結(jié)晶干燥得白色針狀結(jié)晶。二、茶氨酸的提取純化（三）從茶多酚工業(yè)廢液中提取茶氨酸茶氨酸茶多酚生產(chǎn)企業(yè)的工業(yè)廢液中含有約2%的茶氨酸，如能利用工業(yè)廢液為原料提取純化茶氨酸，不僅產(chǎn)品成本相對(duì)較低，而且可以很好地解決茶多酚生產(chǎn)廠家工業(yè)廢液的出路問題，具有較好的應(yīng)用前景。以茶多酚工業(yè)廢液為原料提取純化茶氨酸的工藝流程如下：二、茶氨酸的提取純化（三）從茶多酚工業(yè)廢液中提取茶氨酸在燒杯中加入一定濃度的茶多酚工業(yè)廢液，用1mol/L稀鹽酸調(diào)節(jié)pH。在攪拌下緩慢加入絮凝劑，使其完全混合均勻，然后慢速攪拌養(yǎng)絮，直至絮凝反應(yīng)結(jié)束。具體方法：取10mL吸附材料于三角瓶中，加入待處理液50mL，水浴搖床中平衡2h，過濾分離去除吸附劑，取清液。1.絮凝2.吸附二、茶氨酸的提取純化（三）從茶多酚工業(yè)廢液中提取茶氨酸具體方法：3.離子交換靜態(tài)交換實(shí)驗(yàn)：在燒杯中分別加入已用不同pH的檸檬酸緩沖液平衡過的樹脂20g及原料液100mL，恒溫水浴搖床中平衡2h，吸附平衡后過濾分離樹脂與清液。動(dòng)態(tài)交換實(shí)驗(yàn)：轉(zhuǎn)H+型的732樹脂裝柱(20mmX200mm)后用緩沖液平衡，樣液調(diào)pH后上柱吸附，觀察不同濃度樣液和不同流速下樹脂滲漏、飽和的情況。流出液分段收集。二、茶氨酸的提取純化（三）從茶多酚工業(yè)廢液中提取茶氨酸具體方法：4.結(jié)晶結(jié)晶取粗茶氨酸(經(jīng)陽(yáng)離子交換工藝)少量配成80%(m/V)的水溶液，添加數(shù)倍體積無水乙醇，0°CT冷藏24h析晶。經(jīng)過以上工藝可得到純度達(dá)90%的茶氨酸產(chǎn)品，得率為0.8%。此茶氨酸提取純化的工藝較簡(jiǎn)單，設(shè)備要求不高，且利用茶多酚工業(yè)廢液作為原料進(jìn)行生產(chǎn)，成本相對(duì)較低，因而具有較好的應(yīng)用與開發(fā)前景。二、茶氨酸的提取純化（四）茶樹細(xì)胞培養(yǎng)提取茶氨酸法茶樹細(xì)胞培養(yǎng)完成后，將細(xì)胞凍干后磨碎成粉，用70%的乙醇

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