專利名稱：一種快速制備轉(zhuǎn)糖基β－半乳糖苷酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的制備方法，尤其涉及一種可用于生產(chǎn)低聚半乳糖的β-半乳糖苷酶的快速制備方法。
背景技術(shù)：
低聚半乳糖是母乳中的天然組分之一，其最重要最根本的生理功能源于它對雙歧桿菌的增殖作用。由于低聚半乳糖具有很好的熱穩(wěn)定性和耐酸性，其保健作用引起了人們的極大關(guān)注。目前，低聚半乳糖的生產(chǎn)主要通過微生物酶法合成，即通過β-半乳糖苷酶或乳糖酶以乳糖為底物轉(zhuǎn)糖基合成。方法可以分為兩類一是利用純化酶進(jìn)行反應(yīng)，即在乳糖溶液中用純化或部分純化酶進(jìn)行反應(yīng)合成，該法對環(huán)境污染少，不確定的因素少，但酶的純化過程比較繁瑣，耗時耗力，酶蛋白得率低；二是利用微生物完整細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，方法有三種用甲苯處理過的細(xì)胞生產(chǎn)低聚半乳糖，但甲苯的殘留會對產(chǎn)品造成污染；或直接用細(xì)胞生產(chǎn)低聚半乳糖，但反應(yīng)時間長(3天)，而且產(chǎn)量低；或采用細(xì)胞發(fā)酵的方法，即將細(xì)胞接種于乳糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得低聚半乳糖，但反應(yīng)時間長(3天)，而且發(fā)酵液中有大量的微生物代謝產(chǎn)物及殘留的培養(yǎng)基成分，不利于低聚半乳糖的分離純化。因此，尋求一種快速有效的β-半乳糖苷酶制備方法，建立簡單有效的轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)體系，不僅可以簡化工業(yè)化生產(chǎn)低聚半乳糖的工藝，還能大大節(jié)約成本。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的快速制備方法，利用本發(fā)明的方法制得的β-半乳糖苷酶可高效生產(chǎn)低聚半乳糖，并且本發(fā)明的方法適用于多種胞內(nèi)轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶產(chǎn)生菌。
本發(fā)明涉及的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，由下述步驟組成(1)菌株選擇選擇胞內(nèi)轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶產(chǎn)生菌；(2)菌種活化將上述選擇的菌種之一，接種于新鮮斜面培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)1～2次，活化條件細(xì)菌35～40℃培養(yǎng)16～24小時，真菌于26～30℃培養(yǎng)48～72小時；其中所述細(xì)菌用斜面培養(yǎng)基配方為乳糖10±2g/L，蛋白胨542g/L，酵母粉10±2g/L，NaCl3±2g/L，瓊脂20±2g/L，pH 7.0～7.5；所述真菌用斜面培養(yǎng)基配方為土豆汁(土豆200±2g/L)，乳糖10±2g/L，瓊脂20±2g/L，自然pH；(3)菌種培養(yǎng)及產(chǎn)酶將上述活化菌接種于產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液中，細(xì)菌于35～40℃搖床培養(yǎng)16～20小時；真菌于26～30℃搖床培養(yǎng)40～50小時，搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，然后以相同培養(yǎng)液、相同條件繼續(xù)轉(zhuǎn)接再擴(kuò)大培養(yǎng)，直至擴(kuò)大培養(yǎng)至所需菌量；上述產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方依據(jù)選擇菌株而定，其組分一般至少含有乳糖10～20g/L，蛋白胨5±2g/L，酵母粉10±2g/L；(若菌株產(chǎn)生的轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶為誘導(dǎo)酶，則培養(yǎng)基中必須加入乳糖)(4)收集菌細(xì)胞待上述培養(yǎng)達(dá)到所需菌量后，以12,000轉(zhuǎn)/分離心1～5分鐘，收集產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液中的細(xì)菌或單細(xì)胞酵母；霉菌用濾紙抽濾獲得菌細(xì)胞；(5)洗滌將上述收集的菌細(xì)胞，以w/v＝mg/μL計(jì)，按菌細(xì)胞∶緩沖液＝1∶5的比例，將菌細(xì)胞懸浮于緩沖液中，混勻后，離心，傾去上清液；(6)制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液將上述離心后收集的菌細(xì)胞，以w/v＝mg/μL計(jì)，按菌細(xì)胞∶緩沖液＝1∶1的比例，將菌細(xì)胞重懸于上述緩沖液中，于-20℃以下溫度完全冷凍后，再置室溫解凍，共凍融2～5次，如此菌細(xì)胞懸液即為β-半乳糖苷酶粗酶液；(7)應(yīng)用粗酶液生產(chǎn)低聚半乳糖將上述粗酶液以體積比計(jì)，按粗酶液∶乳糖溶液＝1∶3的比例混合，于40～60℃進(jìn)行轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)4～10小時，其中乳糖溶液濃度為30％重量體積百分比，溶劑是上述緩沖液，待反應(yīng)完畢后，12,000轉(zhuǎn)/分離心1～5分鐘，上清液即含有轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)產(chǎn)物低聚半乳糖；(8)低聚半乳糖定量分析取步驟(7)制得的上清液，以高效液相色譜(HPLC)和薄層掃描定量分析低聚半乳糖得率。
具體方法是取步驟(7)制得的上清液用0.2μm的濾膜過濾后，用上述緩沖液稀釋成重量體積百分比為5％的反應(yīng)產(chǎn)物溶液，以高效液相色譜(High Performance LiquidChromatography，HPLC)定量分析低聚半乳糖得率；取步驟(7)制得的上清液在薄層層析板上點(diǎn)樣后，在展層劑(正丁醇∶乙醇∶水＝5∶3∶2)中展開，霧噴顯色劑(20％硫酸溶液+0.5％的3，5-二羥基甲苯)，于120℃烘烤10分鐘，糖斑點(diǎn)顯色后，進(jìn)行薄層掃描定量分析低聚半乳糖得率。
其中，上述胞內(nèi)轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶產(chǎn)生菌優(yōu)選陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)B5CGMCC 1401、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)ATCC 31382、米曲霉(Aspergillusoryzae)ATCC 20423、擬熱帶假絲酵母(Candidapseudotropicalis)ATCC 46764、簡青霉(Penicillium simplicissimum)ATCC 90288之一。
其中，上述菌種活化條件優(yōu)選是細(xì)菌37℃培養(yǎng)18～20小時，真菌于28℃培養(yǎng)48～60小時。
其中，上述細(xì)菌用斜面培養(yǎng)基配方優(yōu)選為乳糖10/L，蛋白胨5g/L，酵母粉10g/L，NaCl 3g/L，瓊脂20g/L，pH 7.2～7.5。
其中，上述真菌用斜面培養(yǎng)基配方優(yōu)選為土豆200g/L，乳糖10g/L，瓊脂20g/L，自然pH。
其中，上述步驟(3)所述菌種培養(yǎng)及產(chǎn)酶條件優(yōu)選是細(xì)菌于37℃搖床培養(yǎng)16～18小時；真菌于28℃搖床培養(yǎng)40～48小時。
其中，上述緩沖液優(yōu)選是pH 5.4的50mmol/L醋酸鈉緩沖液、pH 6.5～7.5的50mmol/L磷酸鉀緩沖液之一。
在本發(fā)明的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法中，采用凍融菌細(xì)胞處理工藝，不完全破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但增加了細(xì)胞膜通透性，有效提高了酶的產(chǎn)出率，同時也提高了酶的作用效果，由于本發(fā)明方法制備的是β-半乳糖苷酶粗酶液，因此，酶的制備簡便、快速，既簡化了工業(yè)化生產(chǎn)中繁雜的純化工藝，又節(jié)約了成本，其所制備的β-半乳糖苷酶粗酶液又不失純化酶的效果，具有廣闊的工業(yè)應(yīng)用前景；并且利用本發(fā)明方法制備的β-半乳糖苷酶粗酶液產(chǎn)量高，作用強(qiáng)，反應(yīng)快，同時本發(fā)明的方法還克服了現(xiàn)有技術(shù)中有毒有機(jī)溶液對產(chǎn)品的污染；制備的β-半乳糖苷酶粗酶液可以直接用于乳品工業(yè)中乳糖的水解及其它轉(zhuǎn)半乳糖基反應(yīng)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1制備陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)B5CGMCC 1401轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液將陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)B5CGMCC No.1401(于2005年6月30日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏編號為CGMCC No.1401)接種至新鮮斜面培養(yǎng)基活化后，接一環(huán)到50mL產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液，于37℃搖床培養(yǎng)16小時，搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，或培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接入500mL相同產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后，12,000轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，收獲陰溝腸桿菌細(xì)胞。
上述斜面培養(yǎng)基配方乳糖10g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉10g/L，NaCl 3g/L，瓊脂20g/L，pH 7.5；上述產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方乳糖10g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉10g/L，NaCl 3g/L，pH 7.5。
取50mg上述制備的陰溝腸桿菌細(xì)胞，加250μL、pH 7.0的50mmol/L磷酸鉀緩沖液洗滌一次，陰溝腸桿菌細(xì)胞再重懸浮于50μL相同的緩沖液，-20℃以下完全冷凍后，再置室溫解凍，再重復(fù)凍融1次，所得懸液即為β-半乳糖苷酶粗酶液。
應(yīng)用β-半乳糖苷酶粗酶液生產(chǎn)低聚半乳糖取100μL上述粗酶液，加入300μL、pH 7.0磷酸鉀緩沖液配制的30％(w/v)乳糖溶液，于50℃水浴搖床反應(yīng)4小時，12,000轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，上清即含轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物——低聚半乳糖。
對上述產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜分析和薄層掃描分析，低聚半乳糖得率約為54.5％。
上述HPLC分析所用設(shè)備及條件島津(SHIMADZU)高效液相色譜儀；島津RID-10A示差檢測器；BIO-RAD Aminex HPX-42C柱(300mm×7.8mm)；流動相為三蒸水，流速為0.2mL/min，柱溫80℃；結(jié)果分析軟件為Class-VP6.0。轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物用0.2μm濾膜過濾后，稀釋成5％(w/v)的糖溶液，進(jìn)樣分析。
上述薄層掃描分析所用設(shè)備及條件島津(SHIMADZU)CS-9301雙波長飛點(diǎn)薄層掃描儀；檢測波長為550nm。取0.5uL轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物在薄層層析板(Silica gel60，No.553，Merck)上點(diǎn)樣后，在展層劑(正丁醇∶乙醇∶水＝5∶3∶2)中展開，霧噴顯色劑(20％硫酸溶液+0.5％的3，5-二羥基甲苯)，于120℃烘烤10分鐘，糖斑點(diǎn)顯色后，進(jìn)行掃描分析。
實(shí)施例2制備環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)ATCC 31382轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)ATCC 31382菌種經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化后，接一環(huán)到50mL產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液中，于37℃搖床培養(yǎng)18小時，搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，或培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接入500mL相同產(chǎn)酶培養(yǎng)液擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后，12,000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘獲得菌細(xì)胞。
上述斜面培養(yǎng)基配方同實(shí)施例1。
上述產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方乳糖10g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉10g/L，CaCl20.11g/L，MnSO40.001g/L，MgSO4·7H2O 0.3g/L，KH2PO40.05g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.03g/L，pH 7.0。
取50mg上述制備的菌細(xì)胞，加250μL pH7.5的50mmol/L磷酸鉀緩沖液洗滌一次，菌細(xì)胞再重懸浮于50μL相同緩沖液中，于-20℃以下溫度完全冷凍后，置室溫解凍，再重復(fù)凍融2次，所得懸液即為β-半乳糖苷酶粗酶液。
應(yīng)用β-半乳糖苷酶粗酶液生產(chǎn)低聚半乳糖取100μL粗酶液，加入300μL pH7磷酸鉀緩沖液配制的30％(w/v)乳糖溶液，60℃反應(yīng)6小時，12,000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，上清即為轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物。
對上述產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜分析和薄層掃描分析，低聚半乳糖得率為42.7％。
上述HPLC分析和薄層掃描分析所用設(shè)備及條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例3制備米曲霉(Aspergillus oryzae)ATCC 20423轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液米曲霉(Aspergillus oryzae)ATCC 20423菌種經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化后，接一環(huán)孢子到50mL產(chǎn)酶培養(yǎng)液中，于28℃搖床培養(yǎng)40小時，搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，或培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接入500mL相同產(chǎn)酶培養(yǎng)液擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后，用濾紙(雙圈牌101快速定性濾紙)抽濾獲得菌細(xì)胞。
上述斜面培養(yǎng)基配方土豆汁(土豆200g/L)，乳糖10g/L，瓊脂20g/L，自然pH；上述產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方乳糖10g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉10g/L，NaCl 3g/L，pH 6.5。
取50mg菌細(xì)胞，加250μL pH5.4的50mmol/L醋酸鈉緩沖液洗滌一次，菌細(xì)胞再重懸浮于50μL相同緩沖液中，于-20℃以下溫度完全冷凍后，置室溫解凍，再重復(fù)凍融4次，所得懸液即為β-半乳糖苷酶粗酶液。
取100μL粗酶液，加入300μL pH5.4醋酸鉀緩沖液配制的30％(w/v)乳糖溶液，55℃反應(yīng)8小時，12,000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，上清即為轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物。
對上述產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜分析和薄層掃描分析，低聚半乳糖得率為34.3％。
上述HPLC分析和薄層掃描分析所用設(shè)備及條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例4制備擬熱帶假絲酵母(Candida pseudotropicalis)ATCC 46764轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液擬熱帶假絲酵母(Candida pseudotropicalis)ATCC 46764菌種經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化后，接一環(huán)到50mL產(chǎn)酶培養(yǎng)液，于28℃搖床培養(yǎng)48小時，搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，再轉(zhuǎn)接入500mL相同培養(yǎng)液中以相同條件培養(yǎng)。12,000轉(zhuǎn)/分離心4分鐘獲得菌細(xì)胞。
上述斜面培養(yǎng)基配方同實(shí)施例3；上述產(chǎn)酶培養(yǎng)基配方葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 3g/L，自然pH。
取50mg菌細(xì)胞，加250μL pH 7.2的50mmol/L磷酸鉀緩沖液洗滌一次，菌細(xì)胞再重懸浮于50μL相同緩沖液中，于-20℃以下溫度完全冷凍后，再置室溫解凍，再重復(fù)凍融3次，所得懸液即為β-半乳糖苷酶粗酶液。
取100μL粗酶液，加入300μL pH 7.2磷酸鉀緩沖液配制的30％(w/v)乳糖溶液，40℃反應(yīng)8小時，12,000轉(zhuǎn)/分離心4分鐘，上清即為轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物。
對上述產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜分析和薄層掃描分析，低聚半乳糖得率為33.5％。
上述HPLC分析和薄層掃描分析所用設(shè)備及條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例5制備簡青霉(Penicillium simplicissimum)ATCC 90288轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液按實(shí)施例3方法培養(yǎng)簡青霉(Penicillium simplicissimum)ATCC 90288，獲得菌細(xì)胞，制得β-半乳糖苷酶粗酶液，取100μL粗酶液，加入300μL pH6.5的磷酸鉀緩沖液配制的30％(w/v)乳糖溶液，50℃反應(yīng)7小時，12,000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，按實(shí)施例1方法進(jìn)行結(jié)果分析，低聚半乳糖得率為40.9％。
權(quán)利要求
1.一種快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，由下述步驟組成(1)菌株選擇選擇胞內(nèi)轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶產(chǎn)生菌；(2)菌種活化將上述選擇的菌種之一，接種于新鮮斜面培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)1～2次，活化條件細(xì)菌35～40℃培養(yǎng)16～24小時，真菌于26～30℃培養(yǎng)48～72小時；其中所述細(xì)菌用斜面培養(yǎng)基配方為乳糖10±2g/L，蛋白胨5±2g/L，酵母粉10±2g/L，NaCl3±2g/L，瓊脂20±2g/L，pH 7.0～7.5；所述真菌用斜面培養(yǎng)基配方為土豆200±2g/L，乳糖10±2g/L，瓊脂20±2g/L，自然pH；(3)菌種培養(yǎng)及產(chǎn)酶將上述活化菌接種于產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液中，細(xì)菌于35～40℃搖床培養(yǎng)16～20小時；真菌于26～30℃搖床培養(yǎng)40～50小時，搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，然后以相同培養(yǎng)液、相同條件繼續(xù)轉(zhuǎn)接再培養(yǎng)，直至擴(kuò)大培養(yǎng)至所需菌量；上述產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方依據(jù)選擇菌株而定，其組分中一般至少含有乳糖10～20g/L，蛋白胨5±2g/L，酵母粉10±2g/L；(4)收集菌細(xì)胞待上述培養(yǎng)達(dá)到所需菌量后，以12,000轉(zhuǎn)/分離心1～5分鐘，收集產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液中的細(xì)菌或單細(xì)胞酵母；霉菌用濾紙抽濾獲得菌細(xì)胞；(5)洗滌將上述收集的菌細(xì)胞，以w/v＝mg/μL計(jì)，按菌細(xì)胞∶緩沖液＝1∶5的比例，將菌細(xì)胞懸浮于緩沖液中，混勻后，離心，傾去上清液；(6)制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶粗酶液將上述離心后收集的菌細(xì)胞，以w/v＝mg/μL計(jì)，按菌細(xì)胞∶緩沖液＝1∶1的比例，將菌細(xì)胞重懸于上述緩沖液中，于-20℃以下溫度完全冷凍后，再置室溫解凍，共凍融2～5次，如此菌細(xì)胞懸液即為β-半乳糖苷酶粗酶液；(7)應(yīng)用粗酶液生產(chǎn)低聚半乳糖將上述粗酶液以體積比計(jì)，按粗酶液∶乳糖溶液＝1∶3的比例混合，于40～60℃進(jìn)行轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)4～10小時，其中乳糖溶液濃度為30％重量體積百分比，溶劑是上述緩沖液，待反應(yīng)完畢后，12,000轉(zhuǎn)/分離心1～5分鐘，上清液即含有轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)產(chǎn)物低聚半乳糖；(8)低聚半乳糖定量分析取步驟(7)制得的上清液，以高效液相色譜(HPLC)和薄層掃描定量分析低聚半乳糖得率。
2.如權(quán)利要求1所述的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，其特征是，所述胞內(nèi)轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶產(chǎn)生菌選陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)B5CGMCC 1401、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)ATCC 31382、米曲霉(Aspergillus oryzae)ATCC 20423、擬熱帶假絲酵母(Candida pseudotropicalis)ATCC 46764、簡青霉(Penicilliumsimplicissimum)ATCC 90288之一。
3.如權(quán)利要求1所述的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，其特征是，所述菌種活化條件是細(xì)菌37℃培養(yǎng)18～20小時，真菌于28℃培養(yǎng)48～60小時。
4.如權(quán)利要求1所述的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，其特征是，所述細(xì)菌用斜面培養(yǎng)基配方為乳糖10/L，蛋白胨5g/L，酵母粉10g/L，NaCl 3g/L，瓊脂20g/L，pH 7.2～7.5。
5.如權(quán)利要求1所述的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，其特征是，所述真菌用斜面培養(yǎng)基配方為土豆200g/L，乳糖10g/L，瓊脂20g/L，自然pH。
6.如權(quán)利要求1所述的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，其特征是，步驟(3)所述菌種培養(yǎng)及產(chǎn)酶條件是細(xì)菌于37℃搖床培養(yǎng)16～18小時；真菌于28℃搖床培養(yǎng)40～48小時。
7.如權(quán)利要求1所述的快速制備轉(zhuǎn)糖基β-半乳糖苷酶的方法，其特征是，所述緩沖液是pH 5.4的50mmol/L醋酸鈉緩沖液或pH6.5～7.5的50mmol/L磷酸鉀緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速制備轉(zhuǎn)糖基β－半乳糖苷酶的方法，由(1)菌株選擇(2)菌種活化(3)菌種培養(yǎng)及產(chǎn)酶(4)收集菌細(xì)胞(5)洗滌(6)凍融制備轉(zhuǎn)糖基β－半乳糖苷酶粗酶液(7)應(yīng)用粗酶液生產(chǎn)低聚半乳糖(8)低聚半乳糖定量分析等步驟組成。本發(fā)明的方法簡便、快速，成本低，制備的β－半乳糖苷酶粗酶液產(chǎn)量高，作用強(qiáng)，反應(yīng)快，同時還避免了有毒有機(jī)溶液的污染；粗酶液可以直接用于乳品工業(yè)中乳糖的水解及其它轉(zhuǎn)半乳糖基反應(yīng)。
文檔編號C12N9/38GK1737132SQ20051004409
公開日2006年2月22日 申請日期2005年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月21日
發(fā)明者肖敏, 盧麗麗 申請人:山東大學(xué)

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