嬰幼兒食品中低聚半乳糖含量的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及乳制品檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及嬰幼兒食品中低聚半乳糖含量的檢 測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 低聚半乳糖不能被人體上消化道消化吸收，可以直接進(jìn)入大腸，具有低能量、促進(jìn) 腸道雙歧桿菌的增殖、改善礦物質(zhì)元素的吸收、防止骨質(zhì)減少、改善脂質(zhì)代謝、預(yù)防和治療 便秘、低致齲齒性、生成營養(yǎng)物質(zhì)、改善營養(yǎng)狀況、提高免疫力、增強(qiáng)抗腫瘤和抗衰老的功 能。我國衛(wèi)生部已經(jīng)批準(zhǔn)低聚半乳糖為新資源食品，并且允許添加在嬰幼兒食品、乳制品、 飲料、焙烤食品和糖果中，食用量每天不超過15克。
[0003] 由于低聚半乳糖是人體腸道中雙歧桿菌、嗜酸乳酸桿菌等有益菌極好的營養(yǎng)源和 有效的增殖因子，可以改善人體腸道的消化吸收功能，所以，嬰幼兒食品中常常添加低聚半 乳糖這一營養(yǎng)成分。
[0004] 生產(chǎn)廠家在生產(chǎn)嬰幼兒食品的過程中，將低聚半乳糖原料按照一定的比例添加至 原料中制得嬰幼兒食品成品。在出廠檢驗時，為了確保成品中低聚半乳糖的含量符合添加 要求，需要對其含量進(jìn)行檢測，符合低聚半乳糖添加標(biāo)準(zhǔn)的方可作為成品進(jìn)行銷售。因此， 嬰幼兒食品中低聚半乳糖含量的檢測結(jié)果是否準(zhǔn)確至關(guān)重要。
[0005] 公布號為CN104655771A的專利公開了一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢 測方法，用熱的磷酸鹽緩沖液從待測樣品中提取低聚半乳糖和乳糖，用半乳糖苷酶將提 取液中的低聚半乳糖水解，離心，取上清液過微孔濾膜，氮氣吹干或低溫真空干燥后，BSTFA 衍生，用丙酮定容。采用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法分別測定提取原液中游離的半乳糖和乳糖，和酶 解分解液中低聚半乳糖和乳糖釋放出的半乳糖總量，用酶解分解液后的半乳糖含量減去提 取原液的半乳糖含量和乳糖酶解產(chǎn)生的半乳糖含量，計算出樣品中低聚半乳糖的含量。
[0006] 上述檢測方法的步驟復(fù)雜容易產(chǎn)生較大誤差，且β-半乳糖苷酶自帶少量乳糖，在 酶解時被水解，在檢測體系中引入外來乳糖，影響檢測準(zhǔn)確度。
[0007] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種適用于生產(chǎn)廠家在出廠前對嬰幼兒食品中添加的低 聚半乳糖含量進(jìn)行檢測方法。該檢測方法針對現(xiàn)有檢測方法中因采用酶解而在檢測體系中 引入外來乳糖，導(dǎo)致檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度無法保證且步驟復(fù)易產(chǎn)生較大誤差的缺陷，選擇與 嬰幼兒食品中添加的低聚半乳糖的品牌號相同的低聚半乳糖作為標(biāo)準(zhǔn)物添加至樣品中配 成加標(biāo)液，與樣品液經(jīng)過相同的處理后得到色譜峰，將兩者的色譜峰進(jìn)行對比，篩選出用于 定量的特異峰，以此計算得到嬰幼兒食品中低聚半乳糖的含量。由于本發(fā)明提供的檢測方 法是直接通過確定低聚半乳糖的色譜峰而進(jìn)行定量計算，不通過檢測乳糖的含量來推算出 低聚半乳糖的含量，從而無需使用酶對檢測樣品進(jìn)行酶解，也就不存在因酶水解而在檢測 體系中引入外來乳糖的問題，保證了檢測結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性。而且，本發(fā)明提供的檢測方法步驟 簡單，無需復(fù)雜的操作，最大程度地減少了檢測過程中的不確定因素帶來的誤差。
[0009] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0010] -種嬰幼兒食品中低聚半乳糖含量的檢測方法，包括如下步驟：
[0011] (1)采用與樣品中添加的低聚半乳糖的品牌號相同的低聚半乳糖作為標(biāo)準(zhǔn)物，配 制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液；
[0012] (2)稱取兩份相同質(zhì)量的樣品，一份加入所述標(biāo)準(zhǔn)物，加水溶解后配成加標(biāo)液，另 一份直接加水配成相同體積的樣品液，將所述加標(biāo)液和所述樣品液經(jīng)預(yù)處理后連同所述工 作液依次加至離子色譜儀中進(jìn)行梯度洗脫，并分別得到色譜圖；
[0013] (3)將所述加標(biāo)液和所述樣品液的色譜圖進(jìn)行對比后篩選出用于定量的特異峰， 擬合得到所述工作液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)樣品液色譜圖中特異峰的峰面積找出所述標(biāo)準(zhǔn)曲 線上對應(yīng)的濃度，得到嬰幼兒食品中低聚半乳糖含量。
[0014] 本發(fā)明提供的檢測方法的檢測原理如下：
[0015] 選擇與嬰幼兒食品中添加的低聚半乳糖的品牌號相同的低聚半乳糖作為標(biāo)準(zhǔn)物， 配制成不同濃度的工作液。由于所用的標(biāo)準(zhǔn)物與嬰幼兒食品中的低聚半乳糖出自同一生產(chǎn) 廠家，確保標(biāo)準(zhǔn)物在色譜檢測過程中和嬰幼兒食品中的低聚半乳糖具有相同的色譜行為和 響應(yīng)特性。
[0016] 其次，在樣品液中添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)物作為加標(biāo)液，將加標(biāo)液和樣品液經(jīng)過相同 的處理后進(jìn)樣至離子色譜儀中進(jìn)行檢測。由于加標(biāo)液中的樣品質(zhì)量和樣品液中的樣品質(zhì)量 相同，且加標(biāo)液和樣品液均經(jīng)過相同的處理，從而使得兩者的色譜圖在相同保留時間處具 有峰形相同的色譜峰，這一色譜峰既包含低聚半乳糖的色譜峰也包含食品中其它組分的色 譜峰，但由于加標(biāo)液中低聚半乳糖的含量大于樣品液，而其他組分的含量均相同，因此，加 標(biāo)液中低聚半乳糖生成的色譜峰雖然和樣品液中的低聚半乳糖生成的色譜峰具有相同的 保留時間和峰形，但前者的峰高一定大于后者，即前者的峰面積一定大于后者。因此，可通 過對比篩選出食品中低聚半乳糖生成的特異峰，將其用作定量計算。根據(jù)不同濃度工作液 的特異峰的峰面積得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，后根據(jù)所述樣品液中特異峰的峰面積，找出所述標(biāo)準(zhǔn)曲 線上對應(yīng)的濃度，得到所述樣品液中低聚半乳糖的濃度，計算得到嬰幼兒食品中低聚半乳 糖含量。
[0017] 由上述內(nèi)容可以看出，本發(fā)明提供的檢測方法是直接通過確定低聚半乳糖的色譜 峰而進(jìn)行定量計算的，由于不通過檢測乳糖的含量來推算出低聚半乳糖的含量，從而無需 使用酶對檢測樣品進(jìn)行酶解，也就不存在因酶水解而在檢測體系中引入外來乳糖的問題， 保證了檢測結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性。
[0018] 本發(fā)明提供的檢測方法步驟簡單，無需復(fù)雜的操作，最大程度地減少了檢測過程 中的不確定因素帶來的誤差。
[0019] 而且，本發(fā)明的檢測方法中利用的離子色譜儀直接得到峰面積、擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線， 得到樣品液中低聚半乳糖的濃度，不但方便快捷，而且計算機(jī)操作也進(jìn)一步保證了結(jié)果的 準(zhǔn)確性。
[0020] 利用離子色譜儀進(jìn)行檢測過程中，多種因素均會對色譜圖產(chǎn)生影響。為了保證加 標(biāo)液和樣品液中的低聚半乳糖產(chǎn)生的色譜峰峰形好，不拖尾，優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度 洗脫的步驟中，所用的流動相包括超純水、2 4 Ο - 2 5 0 m m ο 1 / L N a Ο Η溶液、Ο · 9 -1 · 0 m ο 1 / 1^〇13邙0他溶液加100-110111111〇1/1恥0!1溶液組成的混合溶液和90-100_〇1/1〇13〇)0恥溶 液。
[0021] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度洗脫的步驟中，洗脫時間為60~65min，流動 相的流速為〇. 40~0.45mL/min，且所述超純水的體積分?jǐn)?shù)為0-58%，所述NaOH溶液的體積 分?jǐn)?shù)為0-100 %，所述混合溶液的體積分?jǐn)?shù)為0-100 %，所述CH3C00Na溶液的體積分?jǐn)?shù)為0-45% 〇
[0022] 其梯度洗脫的具體條件如下表所示，在離子色譜檢測過程中，可根據(jù)下表設(shè)置離 子色譜儀流動相的各個參數(shù)。
[0023] 表1離子色譜儀流動相的參數(shù)設(shè)置表
[0024]
[0025]基于同樣的考慮，優(yōu)選地，步驟（2)中，所述離子色譜儀的分析柱為3mmX 150mm Dionex CarboPac PA20,保護(hù)柱為3mmX30mm Dionex CarboPac PA20。
[0026] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述分析柱的柱溫為30_35°C。
[0027] 優(yōu)選地，

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