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油菜蜂蜜中黃酮定量、定性分析及指紋圖譜初步建立

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2024年12月20日 04:21

油菜蜂蜜中黃酮定量、定性分析及指紋圖譜初步建立

【摘要】： 蜂蜜是一種營養(yǎng)豐富的食品和保健品,主要由蜜蜂采集植物蜜腺分泌的汁液釀成。其中包含的蜜源植物的次級代謝產(chǎn)物——黃酮類化合物被用來表征蜂蜜的地理、植物來源屬性、鑒別真?zhèn)蔚确矫娴难芯恳呀?jīng)引起廣泛關(guān)注。本論文選取油菜蜂蜜為原料,對油菜蜂蜜黃酮的提取、總量測定、分離、定性和定量分析、黃酮指紋圖譜的建立以及與油菜蜂花粉所含黃酮間的內(nèi)在聯(lián)系等方面作了較系統(tǒng)的研究,主要研究內(nèi)容和實驗結(jié)果如下：1.在比較AlCl3法和Al(NO3)3法測定蜂蜜中黃酮含量結(jié)果后,選定AlCl3顯色法測定蜂蜜黃酮提取液中總黃酮含量。該方法測定結(jié)果與HPLC法測定結(jié)果偏差只有0.063,優(yōu)于Al(NO3)3顯色法,Al(NO3)3顯色法與HPLC法的結(jié)果偏差為1.006。2.通過對XAD-2、AB-8、DM-130、D3520、NKA-9和Polyamide這六種不同極性樹脂的靜態(tài)吸附、解吸以及動力學(xué)實驗的考察,結(jié)合準一級動力學(xué)方程,粒內(nèi)擴散模型以及吸附等溫曲線,最終篩選出最佳的樹脂為Amberlite XAD-2。其平衡吸附量是39.70±0.55mg/g；解吸率為98.87±0.52%；粒內(nèi)擴散是Amberlite XAD-2樹脂吸附蜂蜜中黃酮類化合物速度的主要控制因素；最佳的實驗吸附溫度為25℃。3.采用柱層析動態(tài)學(xué)吸附實驗,確定了XAD-2樹脂提取、分離蜂蜜黃酮的工藝條件：上樣蜂蜜量與樹脂量的比為1.2：1；上樣液pH=2；90%的甲醇為洗脫溶劑,并采用3倍柱床體積的甲醇量,在此條件下,加標回收率為82.8%,因此該條件能夠比較好的將蜂蜜中的黃酮分離、提取。4.蜂蜜黃酮的HPLC最優(yōu)分析條件為：采用0.3%甲酸水溶液為流動相A,純甲醇為流動相B,使用Waters Symmetry C18色譜柱,在柱溫30℃,流速1mL/min條件下,以梯度洗脫的方式進行分析,7種黃酮標樣達到基線分離,蜂蜜樣品中15種黃酮物質(zhì)被分離；且經(jīng)方法學(xué)考察其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的相對標準偏差都控制在5%內(nèi)。5.采用HPLC-MS/MS對油菜蜂蜜中黃酮類化合物進行分離鑒定,通過對目標化合物的MS以及MS/MS碎片離子結(jié)構(gòu)解析,并結(jié)合黃酮標品信息,共鑒定出23種酚類物質(zhì),包括5種酚酸,17種黃酮類化合物；其中,白楊黃酮(267nm,314nm；UV),5,7-二羥基雙氫黃酮(243nm,295nm；UV),短葉松素(290nm；UV),芹菜素(267nm,339nm; UV),5,7-二甲氧基雙氫黃酮(243nm,328nm；UV),3',4',5,7-四羥基-6-甲氧基黃酮(256nm,355nm；UV)是第一次在油菜蜂蜜中鑒定出來的黃酮類物質(zhì),這為確定油菜蜂蜜黃酮標記物提供根據(jù)。6.以54個不同產(chǎn)地和批號的油菜蜂蜜為研究對象,進行定量分析和指紋圖譜研究。54批油菜蜂蜜樣品總黃酮含量范圍為0.989～6.477mg/100g,相差很大；其中山奈酚和槲皮素的含量在已知黃酮類物質(zhì)中所占比例較大。指紋圖譜研究獲得29個共有指紋峰,其中以25號峰作為參照峰(山奈酚),經(jīng)聚類分析和相似度分析,可將54批蜂蜜樣品分為4類。其中,27號G049湖北隨州樣品不僅總黃酮含量最低,而且被單獨分為一類,可能樣品本身摻雜有其他物質(zhì)。經(jīng)主成分分析,也將54批樣品分為四類,其中7號和12號樣品各單獨為一類。分析結(jié)果與聚類分析和相似度分析結(jié)果雖有差異,但是與聚類分析結(jié)果的匹配度可達到81.48%。隨后運用HPLC分析標準蜜、市售蜂蜜和混合蜂蜜(25%標品蜜+75%市售蜜),只發(fā)現(xiàn)10個共有峰,且市售蜂蜜和混合蜂蜜經(jīng)與54個批次蜂蜜樣品一起進行聚類和相似度分析時被單獨分為一類,差異于標準品蜂蜜。7.通過二次旋轉(zhuǎn)正交試驗優(yōu)化了超聲波輔助提取油菜蜂花粉中黃酮類物質(zhì)的工藝,得到油菜蜂花粉中黃酮類化合物的最佳提取條件：乙醇體積分分數(shù)76%、料液比1：30、超聲時間33min,超聲波溫度51℃。理論最優(yōu)提取條件下總黃酮得率為2.12%,實際黃酮類物質(zhì)得率為1.89%(n=3),實測得率達到理論預(yù)測值89.15%。8.油菜蜂花粉中黃酮類化合物提取酸解液,經(jīng)HPLC-DAD以及HPLC/MS分析可能含有9種黃酮類苷元。可以確定的黃酮類物質(zhì)依次是：槲皮素、山奈酚、異鼠李素和柚皮素。油菜蜂花粉與油菜蜂蜜中黃酮類物質(zhì)進行對比中發(fā)現(xiàn),兩者之間有聯(lián)系也有差異。如：兩者間有共有的物質(zhì)槲皮素、山奈酚和異鼠李素；除了這三種物質(zhì)外,蜂蜜有的黃酮物質(zhì)短葉松素、生松素等,油菜蜂花粉中沒有；而蜂蜜花粉中含有的柚皮素,蜂蜜中卻沒有發(fā)現(xiàn)?？赡苁且驗榉浠ǚ劢?jīng)過蜂蜜的采摘、酶解等一系列作用和過程后,黃酮類化合物發(fā)生了衍生作用從而生成了其他的物質(zhì)。本課題的研究為油菜蜂蜜的鑒別真?zhèn)魏妥匪莸乩怼⒎N屬來源提供了重要的理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。

【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011