一種大黃的貯藏方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種大黃的貯藏方法，步驟如下：(1)前處理：取大黃，采用60Co輻照處理或者間歇冷凍處理；(2)貯藏：將步驟(1)處理后的大黃用編織袋或者塑料袋包裝，以生石灰或者丙三醇作為對(duì)抗劑，常溫或低溫下密封避光貯藏。本發(fā)明大黃貯藏方法可以長(zhǎng)時(shí)間有效維持大黃的品質(zhì)和藥效，應(yīng)用前景優(yōu)良。
【專利說(shuō)明】
一種大黃的貯藏方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種大黃的貯藏方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大黃為寥科植物掌葉大黃Rheum palmatum L·、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖。由于大黃在藏 期間易產(chǎn)生蟲(chóng)蛀、發(fā)霉、變色等變質(zhì)現(xiàn)象，從而嚴(yán)重影響了此類藥材的品質(zhì)和藥效，其含羥 基蒽醌類、鞣質(zhì)等不穩(wěn)定成分是導(dǎo)致易變質(zhì)的原因之一。
[0003] 孫立艷，"正交試驗(yàn)優(yōu)選飲片大黃儲(chǔ)存條件"，北方藥學(xué)2016年第13卷第3期研究了 溫度、濕度和飲片厚度與大黃酸的關(guān)系，但是實(shí)驗(yàn)的時(shí)間僅僅4h，仍然無(wú)法解決長(zhǎng)期維持大 黃有效成分含量穩(wěn)定的問(wèn)題。
[0004] 急需提供一種大黃的貯藏方法，解決其貯藏保質(zhì)問(wèn)題，推進(jìn)大黃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種大黃的貯藏方法。
[0006] 種大黃的貯藏方法，步驟如下：
[0007] (1)前處理:取大黃，采用6()C〇輻照處理或者間歇冷凍處理；
[0008] (2)貯藏:將步驟（1)處理后的大黃用編織袋或者塑料袋包裝，以生石灰或者丙三 醇作為對(duì)抗劑，常溫或低溫下密封避光貯藏。
[0009] 步驟(1)中，所述6()Co福照處理的福照劑量8kGy，福照時(shí)間30min。
[0010] 步驟（1)中，所述間歇冷凍處理的方法是：將大黃在-20°c冷藏7天，取出放置7天 后，再在-20 °C冷凍7天，如此反復(fù)3次，即可。
[0011] 步驟(2)中，每1千克大黃使用200g生石灰作為對(duì)抗劑。
[0012]步驟(2)中，每1千克大黃使用200ml作為對(duì)抗劑。
[0013] 對(duì)抗劑:對(duì)抗劑是指防止藥材發(fā)生蟲(chóng)、霉變質(zhì)等現(xiàn)象的一種物質(zhì)。
[0014] 步驟(2)中，常溫是指10~30Γ。
[0015] 步驟⑵中，低溫是指6°C。
[0016] 采用本發(fā)明方法貯藏大黃，大黃的干重、浸出物含量、蒽醌的含量在長(zhǎng)達(dá)2年的時(shí) 間內(nèi)無(wú)明顯變化，說(shuō)明本發(fā)明方法可以長(zhǎng)時(shí)間有效維持大黃有效成分含量的穩(wěn)定，保證大 黃的品質(zhì)和藥效，應(yīng)用前景優(yōu)良。
[0017] 下面通過(guò)【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但是并不是對(duì)本發(fā)明的限 制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述 基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1大黃貯藏期間干燥失重比較圖
[0019] 圖2大黃貯藏期間浸出物含量比較圖
[0020] 圖3大黃貯藏期間五種蒽醌總含量比較圖 [0021 ]圖4大黃素對(duì)照品波長(zhǎng)掃描圖
[0022]圖5大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[0023] 圖6大黃貯藏期間總蒽醌含量比較圖
【具體實(shí)施方式】
[0024] 實(shí)施例1:本發(fā)明大黃貯藏養(yǎng)護(hù)方法
[0025] 一、實(shí)驗(yàn)研究
[0026] 1.供試樣品
[0027] 大黃藥材:采購(gòu)于綿陽(yáng)市平武縣平通鎮(zhèn)新遠(yuǎn)村麻子嶺藥農(nóng)家，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué) 盧先明教授鑒定為藥用大黃Rheum officinale Baill的干燥根及根莖。
[0028] 2.儀器與試劑
[0029] 2.1儀器
[0030] 萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartor ius BP121 s )，十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó) Sartorius BP211D)，真空干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，DZG-6090型），紫外分光光 度計(jì)（日本島津UV-1600型），Agilentl100 高效液相色譜儀，超聲波清洗器(昆山市超聲儀器 有限公司，KQ5200E型），電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司，YP601N)，循環(huán)水式真空栗 (鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，SHZ-D(m)型），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠，RE-5210)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司，202-2型），微波爐(Galanz P70D20TJ-D3)，水浴恒溫振蕩器(金壇市醫(yī)療儀器廠，SHZ-88)，微型植物試樣粉碎機(jī)(北京中興偉業(yè)儀 器有限公司，F(xiàn)Z102)，電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，DZKW-4型），遠(yuǎn)紅外輻 射干燥箱（上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，766-2型），海爾DB255-LT/100LT臥式低溫設(shè)備冷 柜:青島海爾股份有限公司等。
[0031] 2.2試劑與試藥
[0032] 大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110756);大黃酸對(duì)照品（批號(hào)：110757);大黃素甲醚對(duì)照品 (批號(hào)：110758);大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：110796);蘆薈大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110795)，均購(gòu)自 國(guó)家藥品生物制品檢驗(yàn)所;云南白藥(云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào):Z53020798);色譜 乙腈（色譜純，F(xiàn)risher);色譜甲醇（色譜純;Frisher scientific);甲醇（分析純成都科龍 化工試劑廠）；硫酸(分析純，成都科龍化工試劑廠）；鹽酸(分析純成都科龍化工試劑廠）；磷 酸(分析純成都科龍化工試劑廠，批號(hào)= 20080207);三氯甲烷(分析純成都科龍?jiān)噭S，批 號(hào):20080216);無(wú)水乙醇(分析純成都科龍?jiān)噭S，批號(hào)：20070321); 95%乙醇(分析純成都 科龍?jiān)噭S，批號(hào)：20080420);醋酸鎂（分析純成都科龍?jiān)噭S，批號(hào)：20070321);氧化鈣 (生石灰）（分析純上海奉賢奉城試劑廠，070521);丙三醇：（甘油）（分析純成都科龍?jiān)噭S， 批號(hào):20070803);白酒(重慶江津牌60°高粱酒，重慶江津酒廠有限公司）等。
[0033] 3.貯藏養(yǎng)護(hù)篩選方法的設(shè)計(jì)
[0034] 3.1貯藏養(yǎng)護(hù)分組
[0035]本試驗(yàn)以養(yǎng)護(hù)前處理、包裝材料、對(duì)抗劑、貯藏溫度為考察因素，設(shè)計(jì)4因素3水平9 組試驗(yàn)(見(jiàn)表1、表2);以藥材外觀質(zhì)量，水分(或干燥失重）、浸出物、有效成分含量作為考察 指標(biāo)，確定1C藏方法對(duì)大黃的影響。
[0036] 表1大黃貯藏養(yǎng)護(hù)方法的因素及其水平
[0037]
[0038] 表2大黃貯藏養(yǎng)護(hù)方法設(shè)計(jì)的試驗(yàn)L9(34)
[0041]以上9組試驗(yàn)均在避光密封(干燥器內(nèi)）條件下進(jìn)行。同時(shí)設(shè)空白組(生產(chǎn)上常用方 法:常溫條件下麻袋包裝貯藏)作為對(duì)照(第10組）。另外，大黃中含有多種蒽醌類化合物，具 有光致變性。因此，根據(jù)其變色主要影響因素，進(jìn)行變色因素考察:在優(yōu)選固定以上四個(gè)因 素的前提下，單獨(dú)考查光照(避光、不避光)與空氣(密封、不密封)因素，增加三組(第11~13 組）。結(jié)合以上，共計(jì)13組不同貯藏養(yǎng)護(hù)方法見(jiàn)表3。
[0042]表3大黃貯藏養(yǎng)護(hù)方法設(shè)計(jì)試驗(yàn)分組表
[0043]
[0044] 3.2貯藏養(yǎng)護(hù)方法操作
[0045] 3.2.1養(yǎng)護(hù)前處理
[0046] 將大黃藥材分13組，每組1.5kg，然后將各組藥材進(jìn)行養(yǎng)護(hù)前處理。具體見(jiàn)表3。
[0047] 6()C〇輻照:將藥材送至四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)核技術(shù)研究所輻照中心鈷60輻 照室進(jìn)行輻照處理，輻照劑量8kGy(約為95萬(wàn)倫琴），輻照時(shí)間30min。
[0048] 間歇冷凍:將藥材在-20 °C的冷柜中冷藏7天，取出放置7天后，再在-20 °C冷凍7天， 如此往復(fù)3次，完成間歇冷凍處理。
[0049] 微波處理:經(jīng)過(guò)預(yù)試，藥材在解凍1分鐘和低火30秒微波處理后無(wú)明顯變化，低火 lmin后有焦香味。因此采用低火30秒2次處理藥材。
[0050] 3.2.2包裝
[0051] 將處理后的藥材按表3,分別用編織袋、麻袋、塑料袋分裝。
[0052] 3.2.3對(duì)抗同貯方法
[0053]本試驗(yàn)采用生石灰、白酒和丙三醇作為對(duì)抗劑，分別與前處理后的藥材同貯(置干 燥器內(nèi)，對(duì)抗劑放于干燥器底部）。每組相應(yīng)對(duì)抗劑投放量分別為:生石灰300g，白酒300ml， 丙三醇 300ml。1 · 5kg
[0054] 3.2.4溫度條件
[0055] 常溫：中藥庫(kù)房?jī)?nèi)（夏季最高30°C，冬季最低10°C)
[0056] 陰涼條件:地下室內(nèi)（全年溫度低于20°C)
[0057] 低溫條件:冰柜內(nèi)（溫度設(shè)置為6°C )
[0058] 3.2.5光照
[0059]避光條件:木柜子內(nèi)
[0060]不避光條件:木柜子外（自然放置于中藥庫(kù)房?jī)?nèi)）
[0061 ] 3.2.6空氣
[0062]密封條件:置玻璃干燥器內(nèi)
[0063]不密封條件:不置干燥器內(nèi)（避光組置木柜內(nèi)；不避光組自然放置于中藥庫(kù)房?jī)?nèi)） [0064]各貯藏環(huán)境詳見(jiàn)附圖3。
[0065] 4貯藏期間外觀質(zhì)量觀測(cè)
[0066] 4.1觀測(cè)方法
[0067] 觀察大黃藥材的色澤，氣味，蟲(chóng)蛀，吸潮，霉變五項(xiàng)外觀質(zhì)量指標(biāo)的變化程度，以分 數(shù)評(píng)定，每項(xiàng)滿分2分，貯藏前數(shù)據(jù)五項(xiàng)均為滿分，共10分。觀察日期從2008年4月13日起到 2010年4月15日。色澤通過(guò)使用RAL K7色標(biāo)卡測(cè)定顏色范圍后進(jìn)行評(píng)分(見(jiàn)附圖4)，評(píng)分標(biāo) 準(zhǔn)見(jiàn)表4;氣味變淡或有異味者，扣1分；吸潮程度根據(jù)水分含量測(cè)定評(píng)分，超過(guò)中國(guó)藥典 2005年版相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定者，扣2分;蟲(chóng)蛀和霉變?cè)u(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5、表6。
[0068] 表4色澤變化評(píng)分表
[0070] 表5蟲(chóng)蛀程度評(píng)分表
[0074] 4.2觀測(cè)結(jié)果
[0075]大黃貯藏兩年前后情況如表7。
[0076]表7大黃外觀質(zhì)量觀測(cè)結(jié)果
[0079]由表7可知：大黃1、3、5三組貯藏兩年前后外觀無(wú)明顯變化，保存較好;6、7、8三組 除有少量蟲(chóng)蛀外，外觀亦無(wú)明顯變化;2、4、9三組均有吸潮、色澤變深、白酒氣味重的現(xiàn)象； 11、12、13三組均有不同程度的變色、氣味變淡、蟲(chóng)蛀霉變現(xiàn)象，其中，11組(避光不密封)在 僅有空氣影響下較12組蟲(chóng)蛀程度嚴(yán)重，12組(密封不避光）在僅有光照影響下較11組的變 色、霉變程度嚴(yán)重，13組(不避光不密封)在光線和空氣共同影響下，其蟲(chóng)蛀程度最為嚴(yán)重； 10組(空白組)色澤變深、氣味變淡、蟲(chóng)蛀霉變現(xiàn)象均最嚴(yán)重，外觀與貯藏前有明顯差異。 [00 80]結(jié)果表明：10組（空白組)存放兩年前后外觀性狀差異最大，說(shuō)明不對(duì)大黃做任何 處理將無(wú)法保證其長(zhǎng)時(shí)間保持良好的外觀質(zhì)量;2、4、9三組與白酒同貯，吸潮嚴(yán)重，色澤加 深，且白酒氣味濃于藥材本身氣味，說(shuō)明大黃藥材與白酒同貯后外觀性狀變化較大，白酒不 宜作為大黃貯藏的對(duì)抗劑；10~13四組均有不同程度的變色、變味、蟲(chóng)蛀、霉變，說(shuō)明光線與 空氣對(duì)大黃藥材的外觀性狀影響均較大；1、3、5、6、7、8六組中除6、7、8三組有少量蟲(chóng)蛀外， 其余外觀均無(wú)明顯變化，說(shuō)明大黃藥材在密封、避光條件下貯藏兩年內(nèi)外觀性狀保持完好。 [0081 ] 5大黃干燥失重含量比較
[0082]照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄KG干燥失重測(cè)定法項(xiàng)下測(cè)定。取供大黃粗粉，混 合均勻，取約lg，置與供試品同樣條件下干燥至恒重的扁形稱量瓶中，精密稱定，在105°c干 燥6小時(shí)至恒重。由減失的重量和取樣量計(jì)算大黃的干燥失重。結(jié)果見(jiàn)表8、圖1。
[0083]表8大黃貯藏期間干燥失重含量比較(n = 2)
[0086] 由表8和圖1可知：大黃2、4、9三組在貯藏兩年中干燥失重均高于貯藏前；10組（空 白組)貯藏8個(gè)月內(nèi)干燥失重高于貯藏前，而貯藏12~24個(gè)月低于貯藏前；1、6、11、12、13五 組在貯藏兩年期間干燥失重?zé)o明顯變化，與貯藏前數(shù)據(jù)接近;3、5、7、8四組干燥失重貯藏兩 年內(nèi)均低于1C藏前數(shù)據(jù)。
[0087] 結(jié)果表明：與白酒同貯的2、4、9號(hào)三組大黃藥材均吸潮，貯藏期間干燥失重明顯增 加，且均超過(guò)了中國(guó)藥典2005年版大黃項(xiàng)下規(guī)定的干燥失重量(不得過(guò)15.0%)，說(shuō)明白酒 不宜作為大黃貯藏的對(duì)抗劑；空白組貯藏8個(gè)月內(nèi)有吸潮現(xiàn)象，且干燥失重量超過(guò)了規(guī)定 值，而貯藏12~24個(gè)月期間，其干燥失重量逐漸減少到規(guī)定范圍內(nèi)并保持一定水平，說(shuō)明大 黃藥材在貯藏期間有吸潮現(xiàn)象;與生石灰同貯的多組大黃藥材干燥失重在貯藏期間無(wú)明顯 變化，說(shuō)明大黃與生石灰同貯對(duì)其干燥失重保持較好;與丙三醇同貯的幾組大黃藥材干燥 失重在貯藏期間均減少到一定水平并恒定，說(shuō)明丙三醇作為對(duì)抗劑會(huì)減少大黃的干燥失 重。
[0088] 6大黃浸出物含量比較
[0089] 照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄X A水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定。
[0090] 取大黃粗粉約4g，精密稱定，置250ml錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，稱定重量， 靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞， 再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25ml，置已干燥至 恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于150°C干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密 稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量（％ )。結(jié)果見(jiàn)表9。
[0091]表9大黃貯藏期間浸出物含量比較(n = 2)
[0094] 由表9和圖2可知:大黃1組在貯藏兩年中浸出物含量略高于貯藏前;3、5、6、8、11、 12、13七組(均為常溫，3、5組與丙三醇同貯，6、8、11、12、13組與生石灰同貯)在貯藏兩年期 間浸出物含量無(wú)明顯變化，與貯藏前數(shù)據(jù)接近;2、4、7、9、10五組(2、4、9組與白酒同貯;2、7 組陰涼下貯藏)浸出物含量貯藏兩年內(nèi)均低于貯藏前數(shù)據(jù)，其中第10組浸出物含量最低，但 均在中國(guó)藥典2005版大黃項(xiàng)下浸出物的規(guī)定值(不得少于25%[1])范圍內(nèi)。
[0095] 結(jié)果表明：自然條件下放置的空白組大黃的浸出物含量在貯藏兩年內(nèi)均低于其他 組，說(shuō)明大黃在貯藏期間浸出物有逐漸減少的趨勢(shì);常溫下與生石灰同貯及與丙三醇同貯 的大黃組在貯藏兩年期間浸出物含量無(wú)明顯變化，說(shuō)明大黃與丙三醇或生石灰同貯可保持 浸出物含量穩(wěn)定;與白酒同貯的大黃組浸出物含量在貯藏兩年內(nèi)均低于貯藏前，說(shuō)明白酒 對(duì)大黃浸出物無(wú)明顯影響。
[0096] 7.貯藏期間化學(xué)成分含量測(cè)定
[0097] 7.1游離蒽醌含量比較
[0098] 照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定。
[0099] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1%磷 酸溶液(85:15)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0100] 對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對(duì)照品、大黃酸對(duì)照品、大黃素對(duì)照品、大 黃酚對(duì)照品、大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每lml含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃 素、大黃酚各80yg，大黃素甲醚40yg的溶液;分別精密量取上述對(duì)照品溶液各2ml，混勻，即 得(每lml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16yg，含大黃素甲醚8yg)。
[0101] 供試品溶液的制備取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約〇.l5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量， 搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加8 %鹽酸溶液10ml，超聲處理2分 鐘，再加三氯甲烷l〇ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并 入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液， 減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取 續(xù)濾液，即得。
[0102] 測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè) 定，即得。計(jì)算蘆薈大黃素(C 15H1Q〇5)、大黃酸(C15H8〇 6)、大黃素(C15H1Q〇5)、大黃酚(C15H 10〇4) 和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量，結(jié)果見(jiàn)表10。
[0103] 表10大黃貯藏期間五種蒽醌總含量比較(n = 2)
[0104]
[0105] 由表10和圖3可知:大黃5、11兩組在貯藏兩年期間五種蒽醌總含量均高于貯藏前； 2、3、9、12、13 (2、3、12、13經(jīng)6()C〇輻照處理)五組貯藏12個(gè)月內(nèi)五種蒽醌總含量與貯藏前接 近，貯藏16~24個(gè)月高于貯藏前;4、6、7、8、10(4、6間歇冷凍，7、8微波處理，6、8生石灰同貯， 4、8低溫貯藏，6、7陰涼貯藏)五組在貯藏兩年期間五種蒽醌總含量無(wú)明顯變化，與貯藏前數(shù) 據(jù)接近；1組五種蒽醌總含量貯藏兩年內(nèi)均低于貯藏前數(shù)據(jù)。各組的五種蒽醌總量均在中國(guó) 藥典2005版大黃項(xiàng)下的規(guī)定值(不少于1.5%)范圍內(nèi)。
[0106] 結(jié)果表明：空白組大黃在貯藏兩年內(nèi)五種蒽醌總量變化不明顯，說(shuō)明大黃貯藏兩 年內(nèi)五種蒽醌總含量趨于穩(wěn)定;經(jīng)6()C 〇輻照處理的多組大黃在貯藏一年內(nèi)五種蒽醌總含量 趨于穩(wěn)定，但貯藏一年半到兩年間蒽醌總含量增加，說(shuō)明6()C 〇輻照處理對(duì)貯藏期間大黃的五 種蒽醌總含量有影響；其他方法貯藏的大黃五種蒽醌總量在貯藏兩年內(nèi)無(wú)明顯變化，說(shuō)明 其他方法對(duì)大黃的五種蒽醌總含量無(wú)明顯影響。
[0107] 7.2總蒽醌含量測(cè)定
[0108] 7.2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
[0109] 取大黃素對(duì)照品適量，用1 %醋酸鎂甲醇溶液溶解，在400~600nm波長(zhǎng)掃描，大黃 素在508nm處有最大吸收，故選508nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。如圖4 〇 [0110] 7.2.2對(duì)照品溶液的制備
[0111] 精密稱取大黃素對(duì)照品（105 °C干燥至恒重）約5mg，置50ml量瓶中加甲醇40ml溶解 后，加甲醇至刻度。精密吸取上述溶液lml，置10ml量瓶中，加1%醋酸鎂甲醇溶液至刻度，作 為對(duì)照品溶液。
[0112] 7.2.3供試品溶液的制備
[0113] 供試品經(jīng)過(guò)干燥、粉碎，過(guò)60目篩，粉末經(jīng)恒溫干燥24h后，精密稱取約0.5g置50ml 量瓶中，加甲醇約40ml，超聲提取30min，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10ml置 100ml圓底燒瓶中，揮干甲醇并加入2.5mol/L硫酸約20ml，回流lh。稍冷，加入氯仿30ml，繼 續(xù)回流lh[58]。停止加熱，冷卻至室溫后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗內(nèi)，用約10ml氯仿分三次洗滌燒 瓶并萃取，小心分取氯仿層至50ml量瓶中，加氯仿至刻度。精密量取氯仿提取液5ml，置10ml 容量瓶中，蒸去氯仿，殘?jiān)? %醋酸鎂甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。以1%醋酸鎂甲 醇溶液為空白，在λ = 508ηπι處測(cè)定吸光度。
[0114] 7.2.4線性關(guān)系考察
[0115] 精密稱取大黃素對(duì)照品（105°C干燥至恒重）約5mg，置50ml量瓶中，加甲醇40ml溶 解后，加甲醇至刻度。精密吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6、2.01111，分別置于101111量瓶中，加 1 %醋酸鎂甲醇溶液至刻度，以1 %醋酸鎂甲醇溶液為空白，分別測(cè)定溶液在λ = 508nm處的 吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y = 〇. 〇35x-0.0006，r2 = 0.9995,線性范圍：3.840~19.2(^8/11114 = 0.9997。結(jié)果表明，大黃素在3.840 ~19.20yg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)圖5。
[0116] 7.2.5精密度試驗(yàn)
[0117] 分別取2.7.1.2.2項(xiàng)對(duì)照品溶液，2.7.1.2.3項(xiàng)供試品溶液，各重復(fù)測(cè)定5次，測(cè)得 的吸光值1?0分別為0.16%、0.05%(11 = 5)。結(jié)果見(jiàn)表11。
[0118] 表11儀器精密度考察結(jié)果
[0120] 7.2.6重現(xiàn)性試驗(yàn)
[0121 ]取同一批供試品5份，按供試品溶液的制備方法制備，依法測(cè)定，測(cè)得的吸光值RSD 為1.0%(n = 5)。結(jié)果見(jiàn)表12。
[0122]表12總蒽醌重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
[0124] 7.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0125] 精密稱取大黃素對(duì)照品和大黃適量，按對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備方法制 備，每間隔20min測(cè)定吸光度，共測(cè)6次，大黃素和大黃樣品的RSD測(cè)定結(jié)果分別為1.42%和 0.97%，表明1 %醋酸鎂甲醇溶液顯色在2h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見(jiàn)表13。
[0126] 表13總蒽醌穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0127]
[0128] 7.2.8加樣回收率試驗(yàn)
[0129] 精密稱取5份大黃粉末約0.5g，分別制成供試品溶液，置于10ml容量瓶中，分別加 入適量大黃素對(duì)照品甲醇溶液(〇.222mg/ml)，按供試品制備項(xiàng)下方法測(cè)定回收率，測(cè)得平 均回收率為99.83%，RSD = 1.19%(n = 6)。結(jié)果見(jiàn)表14。
[0130] 表14總蒽醌加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
[0131]
[0132] 7.2.9樣品總蒽醌含量測(cè)定
[0133] 按照上述條件與方法測(cè)定大黃樣品中總蒽醌含量，結(jié)果見(jiàn)表15。
[0134] 表15大黃貯藏期間總蒽醌含量比較(n = 2)
[0135]
[0136]
[0137] 由表15和圖6可知:4、5、9、12(4、5組為間歇冷凍處理，4、9組與白酒同貯，5、9、12組 在常溫下貯藏）四組在貯藏兩年期間總蒽醌含量變化不明顯，與貯藏前數(shù)據(jù)接近;1、2、6、7、 8、11、10、13八組貯藏20個(gè)月內(nèi)總蒽醌含量接近貯藏前數(shù)據(jù)，而貯藏20~24個(gè)月間高于貯藏 前;3組在貯藏兩年期間總蒽醌含量最低。
[0138] 結(jié)果表明：10號(hào)空白組大黃的總蒽醌含量在貯藏20個(gè)月內(nèi)無(wú)明顯變化，貯藏20~ 24個(gè)月則增高，說(shuō)明大黃隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，其總蒽醌含量有增加的趨勢(shì);多數(shù)通過(guò)間歇 冷凍處理、與白酒同貯并在常溫下貯藏的大黃多組在貯藏兩年期間總蒽醌含量無(wú)明顯變 化，說(shuō)明間歇冷凍法和白酒對(duì)抗劑對(duì)大黃貯藏期間總蒽醌含量變化有影響；其他組的大黃 總蒽醌變化趨勢(shì)同空白組，說(shuō)明其他貯藏養(yǎng)護(hù)方法對(duì)大黃貯藏期間總蒽醌含量變化無(wú)明顯 影響。
[0139] 8大黃貯藏養(yǎng)護(hù)方法試驗(yàn)分析
[0140] 大黃貯藏養(yǎng)護(hù)方法試驗(yàn)的4因素3水平見(jiàn)2.3.1貯藏養(yǎng)護(hù)分組中的表1。試驗(yàn)指標(biāo)為 貯藏兩年后干燥失重w( % )、浸出物含量x( % )、五種蒽醌總含量y( % )和總蒽醌含量z( % )， 與貯藏前數(shù)據(jù)越接近越好。綜合評(píng)分(U)計(jì)算公式：
[0141] Ui = 112 · 85-wi | *5 % +1 44 · 42-xi | *5 % + | 2 · 28-yi | *45 % +1 2 · 22-zi | *45 %
[0142] (i = l，2,…，9)。分值越高說(shuō)明與貯藏前數(shù)據(jù)差別越大，因此以分值低為好。選用 L9(34)，進(jìn)行9次試驗(yàn)，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果見(jiàn)表16。
[0143] 表16大黃貯藏養(yǎng)護(hù)的試驗(yàn)
[0146]由表16可知：在本發(fā)明范圍內(nèi)，即采用6()C〇輻照或者間歇冷凍處理進(jìn)行前處理，編 織袋或者塑料袋包裝，與生石灰或者丙三醇同貯(試驗(yàn)號(hào)1、3、6)，常溫或低溫下密封避光貯 藏，可以有效保持大黃的有效成分，其中，最優(yōu)選用間歇冷凍法前處理，塑料袋包裝，與丙三 醇同貯，常溫下密封避光貯藏(試驗(yàn)號(hào)6);而采用本發(fā)明范圍以外的其他條件時(shí)，則無(wú)法有 效保持大黃的有效成分。
[0147]綜上，采用本發(fā)明方法貯藏大黃，大黃的干重、浸出物含量、蒽醌的含量無(wú)明顯變 化，說(shuō)明本發(fā)明方法可以長(zhǎng)時(shí)間有效維持大黃有效成分含量的穩(wěn)定，保證大黃的藥效，應(yīng)用 前景優(yōu)良。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種大黃的貯藏方法，其特征在于:步驟如下： (1) 前處理:取大黃，采用6t3C0輻照處理或者間歇冷凍處理； (2) 貯藏：將步驟（1)處理后的大黃用編織袋或者塑料袋包裝，以生石灰或者丙三醇作 為對(duì)抗劑，常溫或低溫下密封避光貯藏。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的貯藏方法，其特征在于:步驟（1)中，所述6t3Co輻照處理的輻照 劑量8kGy，福照時(shí)間30min。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的貯藏方法，其特征在于:步驟(1)中，所述間歇冷凍處理的方法 是:將大黃在_20°C冷藏7天，取出放置7天后，再在-20°C冷凍7天，如此反復(fù)3次，即可。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的貯藏方法，其特征在于:步驟(2)中，每1千克大黃使用200g生 石灰作為對(duì)抗劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的貯藏方法，其特征在于:步驟(2)中，每1千克大黃使用200ml作 為對(duì)抗劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的貯藏方法，其特征在于:步驟(2)中，常溫是指10~30°C。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的貯藏方法，其特征在于:步驟(2)中，低溫是指6 °C。
【文檔編號(hào)】A61K36/708GK105902628SQ201610346173
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年5月23日
【發(fā)明人】蘭志瓊, 盧先明, 王亞云, 孫雪梅, 蔣桂華, 鄧晶晶, 連艷, 艾青青, 鄭立
【申請(qǐng)人】成都中醫(yī)藥大學(xué)

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