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西紅花酸用于調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)的制作方法

來(lái)源：泰然健康網(wǎng) 時(shí)間：2024年12月15日 02:58

本發(fā)明涉及西紅花酸的新用途，尤其涉及西紅花酸在制藥領(lǐng)域中的用途，確切的說(shuō)是在制備腸道菌群調(diào)節(jié)的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

西紅花，為鳶尾科植物番紅花(crocussativusl.)花柱的上部及柱頭，別名洎夫蘭、番紅花、番梔子蕊、撒馥蘭、撒法郎、藏紅花等。在2018年，西紅花被列入了“新浙八味”，故開(kāi)發(fā)其作用具有重大意義。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為藏紅花味甘微酸，性平，入心、肝經(jīng)，有活血化瘀，散郁開(kāi)結(jié)之功效，可用于治療憂思郁結(jié)，胸膈痞悶，吐血，傷寒發(fā)熱，驚悸恍惚等癥狀。在我國(guó)，以番紅花之名始見(jiàn)于《品匯精要》：“主寬胸膈，開(kāi)胃進(jìn)飲食，久服滋下元，悅顏色，及治傷寒發(fā)狂”?！毒V目》中已有番紅花，“氣味甘、平、無(wú)毒，主治心氣憂郁、郁悶不散、活血，久服令人心喜，治驚悸。”在伊朗傳統(tǒng)藥用食物中，認(rèn)為西紅花可以作為抑郁病人的藥用食物，也有實(shí)驗(yàn)證明此觀點(diǎn)。

抑郁癥是世界上常見(jiàn)的一種神經(jīng)精神疾病。據(jù)估計(jì)，在每年80萬(wàn)例自殺者中，有50％是由于抑郁癥引起的，因此，重度抑郁癥患者的自殺問(wèn)題已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題；

抑郁癥是一種常見(jiàn)的精神疾病，目前已有多種抗抑郁藥物被廣泛使用，包括ssris、三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥、5-羥色胺-去甲腎上腺素再攝取抑制劑和單胺氧化酶抑制劑。然而，目前使用的大多數(shù)抗抑郁藥物的療效不超過(guò)40-50％，而且由于副作用，包括性功能障礙、頭痛、嘔吐和失眠，仍然不能令人滿(mǎn)意。因此，尋找副作用小的抗抑郁藥物是很有價(jià)值的。

西紅花的藥用歷史已有2500年；西紅花素有多種靶向治療的功效，并以活血化瘀的特性而聞名。臨床試驗(yàn)表明，西紅花的抗抑郁作用可與氟西汀、丙咪嗪等藥物抗抑郁作用相媲美，且觀察到的副作用較少。有研究者證明西紅花柱頭提取物可改善抑郁癥，別外一些研究人員也發(fā)現(xiàn)西紅花、西紅花素可調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺軸，降低血清皮質(zhì)酮。在以往的研究中，西紅花的抗抑郁作用被歸因?yàn)槲骷t花醛(safranal)和西紅花苷(crocin)，因?yàn)樗鼈兛梢宰饔糜赿a、5-ht和去甲腎上腺素的再攝取。西紅花素和番紅花素是西紅花的兩種重要成分。已有多種動(dòng)物模型證實(shí)，西紅花、西紅花素可誘導(dǎo)抗抑郁作用，增加海馬區(qū)creb、bdnf、vgf水平。在體外模型中，crocin可通過(guò)下調(diào)bcl-2和上調(diào)bax來(lái)保護(hù)pc12細(xì)胞免受潛在的神經(jīng)毒性作用。而一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，西紅花酸(crocetin)比crocin更有效地治療抑郁癥。因此，本研究的目的是確定番紅花素是否為抗抑郁藥的有效成分及其對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

第一方面，本發(fā)明提供了西紅花酸在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。

第二方面，本發(fā)明還提供了西紅花酸在制備用于調(diào)節(jié)抑郁患者腸道菌群食品、保健品以及藥品中的應(yīng)用；在本發(fā)明一些實(shí)施例中，西紅花酸用于恢復(fù)cog功能；在本發(fā)明一些實(shí)施例中，西紅花酸用于調(diào)整ruminococcaceaeucg-014、turicibacter、romboutsia和alistipes的含量。

第三方面，西紅花酸在制備預(yù)防或治療由腸道菌群紊亂引起的亞健康狀態(tài)和/或疾病藥物中的應(yīng)用；在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述亞健康狀態(tài)選自腸道系統(tǒng)功能紊亂和/或情感障礙；在本發(fā)明另一些實(shí)施例中，所述亞健康狀態(tài)選自由于腸道益生菌，優(yōu)選地乳酸菌含量減少引起的腸道系統(tǒng)功能紊亂和/或情感障礙。

在本發(fā)明另一些實(shí)施方式中，所述疾病選自腸易激綜合癥、抑郁癥、焦慮癥、結(jié)腸炎和結(jié)腸癌中的一種或多種。

第三方面，本發(fā)明還提供了一種包含西紅花酸的藥材在制備用于調(diào)節(jié)抑郁患者腸道菌群食品、保健品以及藥品中的應(yīng)用；在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述的所述藥材為西紅花或者梔子。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明具有幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明西紅花酸能延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的懸尾的不動(dòng)潛伏期，縮短懸尾不動(dòng)時(shí)間，增加血清中creb、da的含量，減少probdnf含量，對(duì)慢性束縛抑郁模型小鼠有治療作用，發(fā)掘了西紅花酸的藥用前景，開(kāi)拓了一個(gè)新的藥用領(lǐng)域；

2.本發(fā)明中的西紅花酸能恢復(fù)抑郁小鼠的海馬組織損傷，使神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)正?；?。為西紅花抗抑郁作用提供研究依據(jù)；

3.本發(fā)明首次研究西紅花酸與腸道菌群的關(guān)系，結(jié)果表明西紅花酸可調(diào)節(jié)腸道菌群的結(jié)構(gòu)，使抑郁小鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)更接近正常組；

4.本發(fā)明的西紅花酸可恢復(fù)部分cog功能；

5.本發(fā)明的西紅花酸采用口服給藥，服用方便，毒副作用小，長(zhǎng)期服藥無(wú)危害；

6.本發(fā)明西紅花酸的原藥資源非常豐富，具有良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益；

7.本發(fā)明的西紅花酸適用于抑郁患者，作用于多個(gè)環(huán)節(jié)，療效確切；

8.本發(fā)明為將西紅花、梔子黃進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成新藥提供了強(qiáng)有力的基礎(chǔ)。

附圖說(shuō)明

圖1小鼠海馬組織的he染色及nissl染色結(jié)果圖；

圖2為小鼠腸道菌群分析圖；

圖3為figure1腸道菌群差異性分析圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步地描述。

實(shí)施例1

稱(chēng)取梔子黃1kg，加入純水至80l，用2mnaoh將溶液的ph調(diào)至12，室溫放置6h后，用1mh2so4將溶液的ph調(diào)至2，置4℃過(guò)夜抽濾，用甲醇：冰乙酸(4:1)對(duì)抽濾后的物質(zhì)重結(jié)晶三次得最終產(chǎn)物-西紅花酸。

試驗(yàn)例：

為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用西紅花酸的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明其抗抑郁及腸道菌群調(diào)節(jié)作用。

西紅花酸的抗抑郁及腸道菌群調(diào)節(jié)作用實(shí)驗(yàn)如下：

1.西紅花酸對(duì)慢性束縛(crs)抑郁小鼠模型的作用研究

⑴材料及試劑：西紅花酸(hplc≥98％)；氟西汀(flu)，禮來(lái)蘇州制藥有限公司；alt，ast試劑盒，購(gòu)自美康生物科技股份有限公司；icr小鼠，雄性，體重，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)：0277988；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：scxk(滬)2012-0002。

2.方法：正常組小鼠60只隨機(jī)分6組，除正常組外，小鼠被限制在一個(gè)50ml的離心管中(直徑為3厘米，長(zhǎng)度為10厘米)，這樣可以防止前后移動(dòng)和限制左右移動(dòng)，但每天6小時(shí)(09:00到15:00)，持續(xù)28天的。每天分別給藥(crocetin-l，20mg/kg；crocetin-m，40mg/kg；crocetin-h，80mg/kg；flu，10mg/kg)在約束期結(jié)束后，按如下順序?qū)π∈筮M(jìn)行了兩種行為測(cè)試：曠場(chǎng)測(cè)試(oft)和懸尾測(cè)試(tst)。小鼠在行為實(shí)驗(yàn)后立即被處死。眼眶取血收集了血液，血清經(jīng)3500rpm離心(美國(guó)thermo公司)分離15min，-80℃保存，待進(jìn)一步檢測(cè)da，creb，probdnf。新鮮糞便立即冷凍于液氮中，并儲(chǔ)存于-80℃進(jìn)行進(jìn)一步分析。

3.結(jié)果：

表1結(jié)果表明首先，結(jié)果顯示crs可導(dǎo)致體重增長(zhǎng)緩慢，并可上調(diào)血清ast、alt和肝臟指數(shù)(肝臟指數(shù)＝肝臟重量/體重)。西紅花酸改善小鼠體重的增長(zhǎng)緩慢(表1)，降低血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(alt)和肝臟指數(shù)，保護(hù)肝臟。

表1西紅花酸對(duì)體重、血清ast、alt和肝臟系數(shù)的影響(n＝8-10)

*p＜0.05,**p＜0.01vscrsgroup；#p＜0.05,##p＜0.01,###p＜0.001vscontrolgroup.

表2結(jié)果表明與對(duì)照組相比，crs小鼠明顯減少了穿線次數(shù)，增加了糞便數(shù)量。然而，用西紅花酸處理的小鼠的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)明顯增加，糞便顆粒數(shù)明顯下降。

表2西紅花酸對(duì)小鼠在曠場(chǎng)中的穿線次數(shù)及糞便數(shù)的影響

注：*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001與模型組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001與模型組相比。

表3結(jié)果顯示慢性束縛應(yīng)激會(huì)縮短懸尾不動(dòng)的潛伏期，延長(zhǎng)懸尾的不動(dòng)時(shí)間，而西紅花酸能顯著性改善這個(gè)現(xiàn)象。

表3西紅花酸對(duì)懸尾不動(dòng)潛伏期、不動(dòng)時(shí)間的影響

注：*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001與模型組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001與模型組相比。

表4結(jié)果顯示慢性束縛應(yīng)激會(huì)減少血清中creb和da的含量，增加probdnf的含量，而西紅花酸能顯著性增加creb和da的含量，減少probdnf的含量。

表4西紅花酸對(duì)creb、da、probdnf含量的影響

注：*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001與模型組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001與模型組相比。

采用h&e染色法觀察小鼠海馬組織形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果表明，正常組腦組織形態(tài)正常，細(xì)胞密度較高。crs組海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)疏松，海馬錐體細(xì)胞層排列紊亂。模型組神經(jīng)元數(shù)目減少，神經(jīng)元染色異常，核凝結(jié)。西紅花酸能明顯減少異常染色神經(jīng)元的數(shù)量。另外，西紅花酸組的腦組織形態(tài)基本正常。

nissl體作為一種神經(jīng)特征結(jié)構(gòu)，其數(shù)目反映了神經(jīng)元的狀態(tài)。生理?xiàng)l件下，nissl體大而豐富，說(shuō)明神經(jīng)元蛋白合成功能強(qiáng)；另一方面，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞受損時(shí)，crs組皮質(zhì)和海馬的nissl體數(shù)量呈淡染，呈稀疏排列。對(duì)照組和crocetin組nissl染色較深，皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元密度較高(圖1)。

為了闡明crocetin處理對(duì)腸道菌群的貢獻(xiàn)，我們收集了12只小鼠的糞便樣本(對(duì)照組、crs組、crocetin-h組；n＝4)。在crocetin組中，ace指數(shù)在門(mén)水平顯著升高(圖2a)，而crs和crocetin對(duì)shannon沒(méi)有影響(圖2b)。根據(jù)pca分析，對(duì)照組和crs組在三維地圖上更加分散，crocetin-h組更接近對(duì)照組(圖2c)。nmds2分析結(jié)果顯示，control組和crs組分別接近兩個(gè)坐標(biāo)，crocetin-h組更接近于control組(圖2d)，如圖2e所示，crs組與對(duì)照組之間的距離高于crocetin組。

另外，在物種上，抑郁改變了pseudolongumpv8-2(p＝0.0349)、parabacteroides(p＝0.0055)、muribaculum(p＝0.0348)、ruminococcaceaeucg-014(p＝0.0004)的豐富度(圖2f)。而crocetin的干預(yù)會(huì)使ruminococcaceaeucg-014的數(shù)量(p＝0.0304；p＝0.0000)與crs組不同，與對(duì)照組相近(圖2g)。此外，crocetin組中turicibacter(p＝0.0234)、romboutsia(p＝0.0397)和alistipes(p＝0.0257)的含量更高。在門(mén)水平上豐度最高的7個(gè)物種的比例依次為：firmicutes,bacteroidetes,actinobacteria,deferribacteres,patescibacteria,proteobacteria,epsilonbacteraeota(圖2h)。

此外，還比較了綱、科、屬水平的差異。結(jié)果顯示，與抑郁癥相關(guān)的最重要的物種包括lactobacillus、norank_f_muribaculaceae、bacteroides、ruminococcaceae-ucg-014(圖3a)。crs組瘤胃球菌ruminococcaceae-ucg-014和lactobacillus的豐度增加(圖3c,3g)，而bacteroides、muribaculaceae、saccharimonadaceae和erysipelotrichaceae的豐度減少(圖3d,3e,3f,3h)。經(jīng)crocetin處理后，瘤胃球菌ucg_014的豐度明顯降低，擬桿菌的豐度明顯升高，乳酸菌的豐度降低，muribaculaceae、saccharimonadaceae、erysipelotrichaceae的豐度升高。另外，crs可以影響dubosisella、rikenellaceae_rc9_gut_group、anaerovorax的豐度，crocetin使腸道菌群的變化逆轉(zhuǎn)至接近對(duì)照組(圖3b)。同時(shí)，我們預(yù)測(cè)了所有組的picrust的功能成分譜，發(fā)現(xiàn)crs組的cog類(lèi)功能被打亂，而crocetin可以恢復(fù)。crocetin的腸道菌群功能特征是碳水化合物運(yùn)輸和代謝、細(xì)胞壁/膜/包膜生物發(fā)生、翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)和生物發(fā)生(圖3i,3j)。同時(shí)，crs組改變最大的信號(hào)通路是轉(zhuǎn)譯后的修改，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換，伴隨蛋白(p＝0.061)，其次是細(xì)胞壁/膜/包膜合成(p＝0.067)和能量產(chǎn)生和轉(zhuǎn)換(p＝0.074)，crs組的這些功能降低。cog功能信息結(jié)果顯示，與crs組相比，crocetin增強(qiáng)了細(xì)胞壁/膜/包膜的生物發(fā)生(p＝0.072)。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明具有幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)：

4.本發(fā)明的西紅花酸可恢復(fù)部分cog功能；

5.本發(fā)明的西紅花酸采用口服給藥，服用方便，毒副作用小，長(zhǎng)期服藥無(wú)危害；

6.本發(fā)明西紅花酸的原藥資源非常豐富，具有良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益；

7.本發(fā)明的西紅花酸適用于抑郁患者，作用于多個(gè)環(huán)節(jié)，療效確切；

8.本發(fā)明為將西紅花、梔子黃進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成新藥提供了強(qiáng)有力的基礎(chǔ)。

實(shí)施例2

西紅花酸為紅色粉末，不溶于水，可加入相應(yīng)輔料，制成片劑、膠囊、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑或制成針劑。

西紅花酸臨床推薦劑量：50-250mg/天，口服，一天3次。

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