四、無(wú)菌動(dòng)物技術(shù)

無(wú)菌動(dòng)物在自然界并不存，必須用人為的方法養(yǎng)育而成。一般將臨產(chǎn)前的健康動(dòng)物用麻醉藥品或拉斷頸椎處死后，立即浸泡在37℃滅菌液中，送進(jìn)無(wú)菌室(或無(wú)菌隔離器)，按無(wú)菌手術(shù)進(jìn)行剖腹，切除帶胎子宮(子宮內(nèi)首先應(yīng)無(wú)菌)，將其浸入消毒液里并立即輸送到另一只隔離器中，切開(kāi)子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍(電刀切斷)后，放入隔離器內(nèi)人工喂乳或用其他品系的無(wú)菌雌鼠作保姆代養(yǎng)。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養(yǎng)。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。另外，象禽類(lèi)、魚(yú)類(lèi)、昆蟲(chóng)類(lèi)等，因是在卵中無(wú)菌的前提下作出的，故用藥物將卵周?chē)鷾缇笠迫霚缇綦x器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動(dòng)物，一般在出生后就能自力采食，故較易育成。

無(wú)菌動(dòng)物的理論基礎(chǔ)和實(shí)踐依據(jù)在于胎盤(pán)屏障和屏障觀(guān)念，根據(jù)這個(gè)基礎(chǔ)開(kāi)展了無(wú)菌動(dòng)物工作。在無(wú)菌條件下取仔，一切操作在無(wú)菌隔離器內(nèi)進(jìn)行。

(一)哺乳類(lèi)無(wú)菌動(dòng)物技術(shù)

小動(dòng)物作子宮切除術(shù)(Hysterectomy)；大動(dòng)物做子宮切開(kāi)術(shù)(Hysterotomy)獲得幼仔。子宮切開(kāi)對(duì)兔子可用三次，但易污染，不如子宮切除術(shù)取仔安全。大動(dòng)物主要從經(jīng)濟(jì)角度考慮，采用子宮切開(kāi)取仔術(shù)。取仔程序如下：

1.腹部剃毛或用硫化鈉脫毛劑脫毛。

脫毛劑配制：

硫化鋇 50克

濕潤(rùn)劑 4克

甘油 10克

水 50毫升

作成類(lèi)糊狀用以脫毛。

2.處死妊娠雌鼠。一般不用化學(xué)藥品處死，以兔影響胎鼠。如用化學(xué)藥品時(shí)，應(yīng)使劑量對(duì)胎體無(wú)影響時(shí)方可使用。一般對(duì)小鼠用斷頸髓處死。較大的動(dòng)物如豚鼠用氟烷(Halothane Oxygen)吸入麻醉，不用乙醚麻醉。

3.處死的雌鼠浸泡于37℃滅菌液中2分鐘。滅菌液配制：

福爾馬林 20%

季銨 5%

芐烷氨水 75%

4.將妊娠鼠固定住，并于腹部粘上滅菌膠布。

5.剖腹。

6.取出子宮：

⑴將子宮放入滅菌液中，之后將盛子宮的小筐遞到另一隔離器中取胎鼠。這樣，在隔離器中有充分的時(shí)間檢查其是否污染。

⑵如將子宮直接在無(wú)特定病原體條件下取胎和飼養(yǎng)則有危險(xiǎn)，可能受染而無(wú)機(jī)會(huì)觀(guān)察。

7.用剪刀剪開(kāi)子宮壁，取出胎鼠，輕按以幫助呼吸，不立即斷臍，待呼吸正常時(shí)再用電刀切斷臍帶。

8.分開(kāi)胎盤(pán)，將取出的幼仔放到代乳母鼠身邊，把代乳母鼠的幼仔取出與剖腹產(chǎn)取出的幼鼠接觸，使之有同樣的氣味，便于代養(yǎng)。

9.剖腹取胎的時(shí)限。

⑴小鼠、大?。?-10分鐘；

⑵豚鼠：5分鐘，因豚鼠耐缺氧能力低弱。

乳汁制備：首先用擠奶機(jī)獲得兔奶，冷凍干燥，經(jīng)γ射線(xiàn)消毒，保存于塑料袋中，貯放在隔離器內(nèi)。需用時(shí)將奶粉加水恢復(fù)干燥前的濃度，不加維生素和其他成份。須注意人工喂養(yǎng)經(jīng)常出現(xiàn)因灌喂入肺而致死。家兔3次/日，后來(lái)發(fā)現(xiàn)1次/日即可。根據(jù)家兔年齡及體重考慮每?jī)扇占恿?次。第1天喂5毫升，可維持1次/日；以后逐漸增加到4-5次/日；第3周時(shí)即可吃飼料。

自1958年以來(lái)，小鼠不用人工喂養(yǎng)。Sabourdy開(kāi)始培育無(wú)菌小鼠時(shí)，每天喂5次，有時(shí)半夜去喂小鼠，實(shí)際上無(wú)此必要。自廣泛使用隔離器后，都靠代乳鼠喂養(yǎng)。Sabourdy還認(rèn)為中國(guó)如開(kāi)始培育無(wú)菌動(dòng)物工作，不必采用人工喂養(yǎng)，因現(xiàn)在各國(guó)有許多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心有無(wú)菌動(dòng)物，運(yùn)輸也方便，可以從他的或別的實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)代乳鼠。

代乳鼠的最適期：在隔離器中交配，約于部腹服胎前1-2天產(chǎn)仔。C3H和C57BL品系為常用的代乳鼠。用作手術(shù)取胎的母鼠最好不是第一胎的。一般用做交配的雄鼠下午時(shí)放入，第二天上午8時(shí)將雄鼠取出。做剖腹產(chǎn)需了解雌鼠的妊娠期。特種鼠的妊娠期取足月的。小鼠性周期為4天多，如用100只雌鼠交配，應(yīng)有25只雌鼠受孕，實(shí)際上若用10%已屬不錯(cuò)。如果10只雌鼠受乳，用Whitten氏反應(yīng)法，100只雌鼠可有30%受孕。

(二)鳥(niǎo)類(lèi)無(wú)菌動(dòng)物技術(shù)

常用鵪鶉，也用雞。研究營(yíng)養(yǎng)用無(wú)菌雞，要選育無(wú)白血病的雞群。飼養(yǎng)無(wú)菌雞比較容易。雛雞出殼即可啄食，不用人工喂飼。關(guān)鍵在于消毒卵殼，因卵殼不平，不易滅菌。首先選外殼干凈的受精卵。按以下程序進(jìn)行：

1.將受精卵放至濕潤(rùn)劑中。

2.再放入2%升汞中浸12分鐘。

3.將浸泡過(guò)的受精卵放入隔離器中孵育。

建立無(wú)白血病雞群無(wú)從母雞選起，用這種雞卵培育無(wú)菌雞。否則僅外殼消毒是消滅不了雞白血病病毒。

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