四、無菌動物技術(shù)

無菌動物在自然界并不存，必須用人為的方法養(yǎng)育而成。一般將臨產(chǎn)前的健康動物用麻醉藥品或拉斷頸椎處死后，立即浸泡在37℃滅菌液中，送進無菌室(或無菌隔離器)，按無菌手術(shù)進行剖腹，切除帶胎子宮(子宮內(nèi)首先應(yīng)無菌)，將其浸入消毒液里并立即輸送到另一只隔離器中，切開子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍(電刀切斷)后，放入隔離器內(nèi)人工喂乳或用其他品系的無菌雌鼠作保姆代養(yǎng)。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養(yǎng)。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。另外，象禽類、魚類、昆蟲類等，因是在卵中無菌的前提下作出的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入滅菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動物，一般在出生后就能自力采食，故較易育成。

無菌動物的理論基礎(chǔ)和實踐依據(jù)在于胎盤屏障和屏障觀念，根據(jù)這個基礎(chǔ)開展了無菌動物工作。在無菌條件下取仔，一切操作在無菌隔離器內(nèi)進行。

(一)哺乳類無菌動物技術(shù)

小動物作子宮切除術(shù)(Hysterectomy)；大動物做子宮切開術(shù)(Hysterotomy)獲得幼仔。子宮切開對兔子可用三次，但易污染，不如子宮切除術(shù)取仔安全。大動物主要從經(jīng)濟角度考慮，采用子宮切開取仔術(shù)。取仔程序如下：

1.腹部剃毛或用硫化鈉脫毛劑脫毛。

脫毛劑配制：

硫化鋇 50克

濕潤劑 4克

甘油 10克

水 50毫升

作成類糊狀用以脫毛。

2.處死妊娠雌鼠。一般不用化學(xué)藥品處死，以兔影響胎鼠。如用化學(xué)藥品時，應(yīng)使劑量對胎體無影響時方可使用。一般對小鼠用斷頸髓處死。較大的動物如豚鼠用氟烷(Halothane Oxygen)吸入麻醉，不用乙醚麻醉。

3.處死的雌鼠浸泡于37℃滅菌液中2分鐘。滅菌液配制：

福爾馬林 20%

季銨 5%

芐烷氨水 75%

4.將妊娠鼠固定住，并于腹部粘上滅菌膠布。

5.剖腹。

6.取出子宮：

⑴將子宮放入滅菌液中，之后將盛子宮的小筐遞到另一隔離器中取胎鼠。這樣，在隔離器中有充分的時間檢查其是否污染。

⑵如將子宮直接在無特定病原體條件下取胎和飼養(yǎng)則有危險，可能受染而無機會觀察。

7.用剪刀剪開子宮壁，取出胎鼠，輕按以幫助呼吸，不立即斷臍，待呼吸正常時再用電刀切斷臍帶。

8.分開胎盤，將取出的幼仔放到代乳母鼠身邊，把代乳母鼠的幼仔取出與剖腹產(chǎn)取出的幼鼠接觸，使之有同樣的氣味，便于代養(yǎng)。

9.剖腹取胎的時限。

⑴小鼠、大?。?-10分鐘；

⑵豚鼠：5分鐘，因豚鼠耐缺氧能力低弱。

乳汁制備：首先用擠奶機獲得兔奶，冷凍干燥，經(jīng)γ射線消毒，保存于塑料袋中，貯放在隔離器內(nèi)。需用時將奶粉加水恢復(fù)干燥前的濃度，不加維生素和其他成份。須注意人工喂養(yǎng)經(jīng)常出現(xiàn)因灌喂入肺而致死。家兔3次/日，后來發(fā)現(xiàn)1次/日即可。根據(jù)家兔年齡及體重考慮每兩日加量1次。第1天喂5毫升，可維持1次/日；以后逐漸增加到4-5次/日；第3周時即可吃飼料。

自1958年以來，小鼠不用人工喂養(yǎng)。Sabourdy開始培育無菌小鼠時，每天喂5次，有時半夜去喂小鼠，實際上無此必要。自廣泛使用隔離器后，都靠代乳鼠喂養(yǎng)。Sabourdy還認為中國如開始培育無菌動物工作，不必采用人工喂養(yǎng)，因現(xiàn)在各國有許多實驗動物中心有無菌動物，運輸也方便，可以從他的或別的實驗室引進代乳鼠。

代乳鼠的最適期：在隔離器中交配，約于部腹服胎前1-2天產(chǎn)仔。C3H和C57BL品系為常用的代乳鼠。用作手術(shù)取胎的母鼠最好不是第一胎的。一般用做交配的雄鼠下午時放入，第二天上午8時將雄鼠取出。做剖腹產(chǎn)需了解雌鼠的妊娠期。特種鼠的妊娠期取足月的。小鼠性周期為4天多，如用100只雌鼠交配，應(yīng)有25只雌鼠受孕，實際上若用10%已屬不錯。如果10只雌鼠受乳，用Whitten氏反應(yīng)法，100只雌鼠可有30%受孕。

(二)鳥類無菌動物技術(shù)

常用鵪鶉，也用雞。研究營養(yǎng)用無菌雞，要選育無白血病的雞群。飼養(yǎng)無菌雞比較容易。雛雞出殼即可啄食，不用人工喂飼。關(guān)鍵在于消毒卵殼，因卵殼不平，不易滅菌。首先選外殼干凈的受精卵。按以下程序進行：

1.將受精卵放至濕潤劑中。

2.再放入2%升汞中浸12分鐘。

3.將浸泡過的受精卵放入隔離器中孵育。

建立無白血病雞群無從母雞選起，用這種雞卵培育無菌雞。否則僅外殼消毒是消滅不了雞白血病病毒。

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