血漿、血清和腦脊液等生物體液中存在的生物標(biāo)志物已成為神經(jīng)退行性疾病的臨床診斷和預(yù)后不可或缺的一部分。例如，Aβ42/40或總/磷酸化tau蛋白比例變化可預(yù)測(cè)阿爾茲海默癥患者的病程發(fā)展，神經(jīng)絲蛋白輕鏈（NfL）水平的變化也成為了各種神經(jīng)退行性疾病的廣泛生物標(biāo)志物。然而這些神經(jīng)細(xì)胞因子含量相對(duì)較低，若沒有好的檢測(cè)技術(shù)，很容易由于檢測(cè)靈敏問題出現(xiàn)不理想的結(jié)果。為此，我們?yōu)槟砹?022年9月份發(fā)表的3篇（Lancet Neurol、JAMA Oncology、Alzheimer's & Dementia）高水平文獻(xiàn)，解析其研究思路及技術(shù)手段，希望對(duì)我們神經(jīng)領(lǐng)域的科研工作者們有所幫助。

案例1：血漿t-tau、Nfl可作為嗅覺缺失和腦老化標(biāo)志物

2022年9月，山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院杜怡峰教授團(tuán)隊(duì)在國(guó)際癡呆研究頂級(jí)期刊Alzheimer's & Dementia（IF=16.655）雜志發(fā)表題為“Anosmia, mild cognitive impairment, and biomarkers of brain aging in older adults”的研究成果，發(fā)現(xiàn)血漿t-tau、NfL 可作為嗅覺缺失和腦老化標(biāo)志物。

為了評(píng)估血漿t-tau、Nfl水平與嗅覺缺失和腦老化的相關(guān)性，研究納入4214例樣本，其中1102例輕度認(rèn)知障礙（mild cognitive impairment，MCI），931例遺忘型MCI（amnestic MCI），171例非遺忘型MCI（non-amnestic MCI）。在子樣本中，使用simoa技術(shù)測(cè)定1054例樣本血漿Aβ40，Aβ42，t-tau，Nfl水平（華盈生物提供技術(shù)支持）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，嗅覺障礙與 MCI、遺忘型 MCI 和非遺忘型 MCI 的可能性增加顯著相關(guān)。在子樣本中，嗅覺喪失與較高的血漿總tau和NfL濃度、較小的海馬和內(nèi)嗅皮層體積以及較大的腦白質(zhì)病變（WMH）體積顯著相關(guān)，并且與較低的 AD 特征皮層厚度顯著相關(guān)。

案例2：血清UCH-L1和t-tau可用于顱腦損傷患者的預(yù)后

2022年9月，Lancet Neurol（IF=59.935）發(fā)表一篇顱腦損傷預(yù)后標(biāo)志物的文章，研究者開展了一項(xiàng)觀察性隊(duì)列分析，即CENTER-TBI（Collaborative European Neurotrauma Effectiveness Research in Traumatic Brain Injury，歐洲神經(jīng)創(chuàng)傷治療效果合作研究—顱腦損傷）研究，以確定血清生物標(biāo)志物對(duì)于顱腦損傷后功能結(jié)局的預(yù)后意義。

CENTER-TBI研究測(cè)定了6種血清生物標(biāo)志物：S100鈣結(jié)合蛋白B [S100B]、神經(jīng)元特異性烯醇化酶[S100B]、膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白[GFAP]、泛素羧基末端水解酶L1 [UCH-L1]、神經(jīng)絲蛋白輕鏈[NfL]和總tau蛋白[total-tau]（注：其中的GFAP、UCH-L1、NfL、total-tau采用Simoa技術(shù)檢測(cè)）。在4509例患者中，研究者獲得了2283例患者的血清生物標(biāo)志物數(shù)值和6個(gè)月時(shí)的擴(kuò)展版格拉斯哥結(jié)局量表（GOSE，Glasgow Outcome Scale-Extended）評(píng)分。較高的6種生物標(biāo)志物水平與不良預(yù)后相關(guān)。UCH-L1和t-tau對(duì)于死亡的預(yù)測(cè)能力最高，與單獨(dú)應(yīng)用UCH-L1相比，聯(lián)合應(yīng)用GFAP和UCH-L1未能提高鑒別能力。

案例3：血清NfL蛋白水平與CAR-T細(xì)胞治療后神經(jīng)毒性的嚴(yán)重程度相關(guān)

2022年9月，圣路易斯華盛頓大學(xué)路易斯醫(yī)學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì)在JAMA Oncology（IF=33.006）上發(fā)表題為“Assessment of Pretreatment and Posttreatment Evolution of Neurofilament Light Chain Levels in Patients Who Develop Immune Effector Cell–Associated Neurotoxicity Syndrome”的研究成果，發(fā)現(xiàn)根據(jù)基線NfL水平可對(duì)患者發(fā)生免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征（ICANS）進(jìn)行預(yù)測(cè)。

為了評(píng)估血清NfL水平與ICANS嚴(yán)重程度的相關(guān)性，研究納入2個(gè)CAR T細(xì)胞治療中心的接受CD19定向CART細(xì)胞治療的96名患者，并以22名健康年齡匹配的血清樣本作為對(duì)照，使用Simoa技術(shù)測(cè)定血清NfL蛋白水平，測(cè)量時(shí)間點(diǎn)為CAR-T細(xì)胞治療后ICANS達(dá)到最大值的5天前（NfL-pre）和第1天（NfL-post）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未發(fā)生ICANS的患者相比，出現(xiàn)ICANS患者的基線血漿NfL水平較高（87.6 pg/mL vs 29.4 pg/mL，P < 0.001）。基線NfL水平與ICANS的嚴(yán)重程度相關(guān)。根據(jù)基線NfL水平對(duì)患者發(fā)生ICANS情況進(jìn)行預(yù)測(cè)，其準(zhǔn)確度高達(dá)96%。

總結(jié)與討論

Simoa（Single-molecule Array）技術(shù)的出現(xiàn)將蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)直接帶入到單分子、數(shù)字化檢測(cè)時(shí)代，它的靈敏度比ELISA提高出1000倍以上，成為fg級(jí)超低豐度蛋白質(zhì)檢測(cè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)技術(shù)?；诔叩撵`敏度，Simoa可對(duì)極少量腦脊液樣本進(jìn)行檢測(cè)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病標(biāo)志物微量級(jí)別變化的準(zhǔn)確定量。另外，還能夠?qū)崿F(xiàn)外周血中神經(jīng)系統(tǒng)疾病標(biāo)志物的準(zhǔn)確檢測(cè)，改變了腦損傷和神經(jīng)退行性疾病的診斷方式，為疾病早期診斷提供了新的方法和可能。目前已發(fā)文1200多篇，其中在神經(jīng)領(lǐng)域的應(yīng)用位居第一。

在此華盈生物特別推薦Neurology 4-Plex E (N4PE) 試劑盒，可同時(shí)檢測(cè)血漿和腦脊液中的四種生物標(biāo)志物：Aβ40 、Aβ42 、GFAP和NfL，每種生物標(biāo)記物已被證明對(duì)神經(jīng)變性和腦損傷的研究具有重要意義，并可用于監(jiān)測(cè)神經(jīng)疾病藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的有效性。

華盈生物在細(xì)胞因子研究中站在客戶的角度通盤思考，建立了由固相細(xì)胞因子廣篩抗體芯片、Luminex液相細(xì)胞因子芯片、Simoa超靈敏fg級(jí)細(xì)胞因子芯片和isoPlexis單細(xì)胞細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)為代表的“1+1+1+1”細(xì)胞因子系統(tǒng)篩選檢測(cè)體系，全方位解決細(xì)胞因子檢測(cè)的科學(xué)難點(diǎn)問題。

● 固相細(xì)胞因子廣篩抗體芯片，尤其適用于樣本數(shù)量較少，但需要進(jìn)行大量細(xì)胞因子篩選和定量檢測(cè)的研究類型。

● Luminex液相細(xì)胞因子芯片，可以實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)細(xì)胞因子在大批量樣本中的同步檢測(cè)和準(zhǔn)確定量。

● Simoa 超低豐度細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)，靈敏度比ELISA提高1000倍，成為fg級(jí)超低豐度蛋白質(zhì)檢測(cè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)技術(shù)。

● IsoPlexis單細(xì)胞細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)，可捕獲蛋白細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，進(jìn)而對(duì)細(xì)胞進(jìn)行亞類分析，解決了單細(xì)胞和功能蛋白組兩個(gè)層面的研究需求。

華盈生物建立的四大細(xì)胞因子篩選和檢測(cè)平臺(tái)，可有效解決不同研究階段對(duì)細(xì)胞因子篩選和檢測(cè)的需求，為科研人員提供從蛋白質(zhì)系統(tǒng)篩選、重點(diǎn)檢測(cè)/驗(yàn)證、早期監(jiān)控等一整套的研究方案。

相關(guān)文獻(xiàn)

[1] Helmrich IRAR, Czeiter E, Amrein K, et al. Incremental prognostic value of acute serum biomarkers for functional outcome after traumatic brain injury (CENTER-TBI): an observational cohort study. Lancet Neurol. 2022 Sep;21(9):792-802.

[2] Butt OH, Zhou AY, Caimi PF, et al. Assessment of Pretreatment and Posttreatment Evolution of Neurofilament Light Chain Levels in Patients Who Develop Immune Effector Cell-Associated Neurotoxicity Syndrome. JAMA Oncol. 2022 Sep 1:e223738.

[3] Dong, Y, Li, Y, Liu, K, et al. Anosmia, mild cognitive impairment, and biomarkers of brain aging in older adults. Alzheimer's Dement. 2022 Sep 15. 1- 13.返回搜狐，查看更多