海洋生物毒素的提取、分離和鑒定 ---------------------以麻痹性貝毒、河豚毒素為例 一、麻痹性貝毒 1、來源 有害赤潮特別是有毒赤潮對人類生命健康和海洋生態(tài)系統(tǒng)的威脅日益嚴(yán)重，已引起人們的廣泛關(guān)注。有毒赤潮藻類可產(chǎn)生多種毒素，這些毒素可通過食物鏈在貝類或魚類等生物體內(nèi)累積放大，當(dāng)人們誤食這些染毒的海產(chǎn)品時，就會發(fā)生中毒死亡，因此，這些毒素又常被稱為貝毒素或魚毒素。 2、作用機理 麻痹性貝毒(paralytic shellfish poisoning, PSP)是一類阻斷神經(jīng)細(xì)胞鈉離子通道，對人體神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生麻痹作用的海洋生物毒素。該毒素對人體毒性極強，且無特效解救藥物，對人類健康影響很大。我國近海多種可食用貝類中均含有麻痹性貝毒，福建省東山縣廣東省大亞灣及臺灣省近年都發(fā)生因食用染毒貝類而引起多人中毒死亡事件! 3、物理化學(xué)性質(zhì) a、通常情況下，PSP毒素化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，但在堿性水溶液中容易發(fā)生分解; b、在強酸性水溶液中，部分毒素容易發(fā)生轉(zhuǎn)化，例如N一磺酞氨甲酞基類毒素在加熱、強酸性條件下會脫掉磺酞基，生成相應(yīng)的胺基甲酸醋類毒素。 c、在pH為2-4，尤其pH=3時毒素最為穩(wěn)定，在一18℃以下能夠較長時間保存; d、麻痹性貝毒本身紫外吸收很弱，且不能產(chǎn)生熒光，但其在堿性條件下氧化再酸化能生成熒光物質(zhì)，這種性質(zhì)成為PSP熒光檢測的主要依據(jù)。 4、提取、分離和檢測技術(shù) ①樣品采集 扇貝采集，樣品采集后現(xiàn)場用水沖凈外殼，并用不銹鋼刀打開，將貝肉、性腺和消化腺分離，用紗布吸除多余水分，然后冰塊保存運至實驗室，- 20 度貯存。 ②提取 貝類PSP的提取方法主要采用AOAC法，該方法簡單描述為: a、在稱重的燒杯中稱取100g均質(zhì)的樣品，加0. lmol/L HCl溶液100mL充分?jǐn)嚢?，檢查pH (pH應(yīng)為2. 0-4. 0，以3最佳)。需要時，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或0. lmol/L NaOH溶液調(diào)整pH，加堿時速度要慢，同時需不斷攪拌，防止局部堿化破壞毒素。 b、將混合物加熱，并徐徐煮沸5min，冷卻至室溫，調(diào)節(jié)pH至 2. 0-4. 0(勿4. 5)。 ③分離 將混合物移至量筒中并稀釋至200mL。將混合物倒回?zé)瑪嚢柚辆|(zhì)狀，使其沉降至上清液呈半透明狀。利用超速離心機，將混合物或上清液以3 000r/min離心5min?；蛘哂脼V紙過濾。 ④鑒定方法 a、小白鼠生物檢測法 PSP的小鼠生物法檢測程序已由美國分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)標(biāo)準(zhǔn)化(AOAC,1990)，并在世界范圍內(nèi)被廣泛接受。雖然小鼠生物法操作簡單、能反應(yīng)樣品總的毒性，但也有很多不足的地方，如只能檢測毒性大小，而無法確定毒素的種類和含量;小鼠的不同品系、批次、大小對毒素的測定的靈敏度有很大的影響;實驗結(jié)果可重復(fù)性、可比性差。 b、高效液相色譜法(HPLC)分析 高效液相色譜法(HPLC)又稱高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜、近代柱色譜等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。 c、細(xì)胞毒性檢測法 根據(jù)離子通道類毒素可以專一性地作用于細(xì)胞膜離子通道的特點建立起來的細(xì)胞毒性檢測技術(shù)，可以快速敏感的檢測毒素。它是利用毒素對細(xì)胞的毒性作用來檢測毒素存在與否以及毒性大小的一種技術(shù)，可以直接體現(xiàn)所測樣品的毒性狀況。 麻痹性貝毒（PSP)可以作用于Na+通道的1位點，阻斷Na+內(nèi)流，當(dāng)在培養(yǎng)的細(xì)胞中加入Na+通道活化劑，細(xì)胞會由于Na+內(nèi)流過多而造成腫脹，甚至死亡，但如果同時加入具Na+通道阻斷作用的毒素PSP, Na+內(nèi)流會因拮抗作用而受到限制，使得細(xì)胞成活，由此可以確定毒素的存在，并根據(jù)細(xì)胞的成活率對毒素進行定量分析。 針對PSP的儀器檢測方法還有液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用，毛細(xì)管電泳法，流動注射法等，但都因靈敏度低或毒素組分分離度差等原因而未能得到廣泛使用。二、河豚毒素 1、河豚簡介 河豚魚(Balloonfish )，屬硬骨魚綱、魷形目。世界上有200多種，可引起中毒的有9種。河豚主要分布在渤海、東海、黃海及江河下游，為近海與河川底層肉食性海產(chǎn)有毒魚類。河豚魚肉質(zhì)細(xì)嫩、鮮美，曾有“拼死吃河豚”之說，吃河豚中毒死亡者，在國內(nèi)外屢見不鮮，就是食用河豚經(jīng)驗比較豐富的日本人，據(jù)說每年中毒死亡者也有幾百人之多。 2、河豚毒素簡介 70年代成功的從河豚魚體內(nèi)有毒部位(卵巢、精巢、肝臟、脾、胃、腸等)分離提純河豚毒素(Tetrodotoxin, TTX)。TTX是一種結(jié)

相關(guān)知識

海洋生物毒素的提取解決方案.ppt
海洋微生物提取物抗病毒活性的體外評價。,Virology Journal
海王牌氨糖軟骨素(海洋生物提取物——海王牌軟骨素，緩解關(guān)節(jié)疼痛)
一種海洋生物香煙濾毒材料的制備方法
一種基于海洋生物提取物的保濕霜的制作方法
海洋生物提取工藝
海洋毒素具有強烈的生理活性，是現(xiàn)代海洋藥物研究的熱點之一，以下不屬于海洋毒素的是
基于海洋生物提取物的美容液及其制備方法.pdf
海洋藥物的提取與分離技術(shù).pptx
海洋生物與礦物提取物創(chuàng)新應(yīng)用亮相西部展

網(wǎng)址: 海洋生物毒素的提取解決方案.ppt http://m.u1s5d6.cn/newsview1862312.html