本技術(shù)涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的涉及一種包含轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白和生長(zhǎng)激素的融合蛋白，及其用途。

背景技術(shù)：

1、目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上生長(zhǎng)激素分為短效型和長(zhǎng)效型，從短效到長(zhǎng)效的迭代實(shí)現(xiàn)更好的治療效果的同時(shí)帶來(lái)也是患者依從性的提高。2014年金賽藥業(yè)推出自主研發(fā)的全球首支聚乙二醇長(zhǎng)效生長(zhǎng)激素，得以將矮小癥患兒的生長(zhǎng)激素注射頻率由每天一次拉至每周一次，從一年365天次注射用藥到52次的改變。至今，國(guó)內(nèi)尚未有第二款長(zhǎng)效生長(zhǎng)激素獲批上市。但是，由于長(zhǎng)效劑型的價(jià)格相對(duì)較高，并未達(dá)到“后來(lái)居上”的效果，短效水針劑仍然是國(guó)內(nèi)的主流方案，據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，2020年第一至第三季度，國(guó)內(nèi)樣本醫(yī)院生長(zhǎng)激素銷售中，普通水針占73％，粉針占26％，長(zhǎng)效水針占1％。同時(shí)據(jù)frost&sullivan報(bào)告顯示，我國(guó)重組生長(zhǎng)激素銷售總額59億元，其中長(zhǎng)效生長(zhǎng)激素銷售額在6億左右。因此，目前長(zhǎng)效劑型并未能走進(jìn)大多數(shù)的生長(zhǎng)激素缺乏的患兒使用，中國(guó)仍有近300萬(wàn)的兒童患有生長(zhǎng)激素缺乏癥。

2、因此，亟需開(kāi)發(fā)更高效且成本更低的長(zhǎng)效制劑，以提高患者依從性和生活質(zhì)量并降低醫(yī)護(hù)成本。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本技術(shù)提供了一種融合蛋白，其包含：轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白，以及生長(zhǎng)激素或其功能活性片段，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白包含能夠結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的多肽、抗體或其抗原結(jié)合片段。本技術(shù)所述的融合蛋白基于轉(zhuǎn)鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合并在細(xì)胞內(nèi)外循環(huán)的過(guò)程實(shí)現(xiàn)半衰期的延長(zhǎng)以及蛋白的最大生物利用度。所述融合蛋白用原核大腸桿菌生產(chǎn)，通過(guò)sec檢測(cè)純度可達(dá)到95％以上，蛋白生產(chǎn)穩(wěn)定，分子量小為37kd。相較于長(zhǎng)春金賽增用peg耦聯(lián)成本更低，蛋白更穩(wěn)定。相較于天境生物tj101雜合fc融合rhgh蛋白，分子量103kd，用哺乳細(xì)胞生產(chǎn)，大腸桿菌生產(chǎn)成本更低。而且，于大腸桿菌生產(chǎn)的rhgh-vhh融合蛋白在細(xì)胞模型上體外活性(ec50 2nm)與天然rhgh(ec50 1nm)相比，ec50下降約為1倍。相較于versartis的vrs-317(xten1-rhgh-xten2)分子量119kd，rhgh的ec50為0.6nm，而vrs-317ec50為6.8nm，下降約10倍，融合蛋白rhgh-vhh的生物學(xué)活性保持的更好，且分子量小免疫原性低。另外從藥代動(dòng)力學(xué)研究分析，rhgh-vhh融合蛋白，給藥150nmol/kg在小鼠體內(nèi)的半衰期為11.5小時(shí)，而目前已上市的novanordisk的sogroya每周一次制劑的在大鼠的50nmol/kg半衰期為5.3小時(shí)，于2021年1月提交bla申請(qǐng)的pfizer mod-4023每周一次制劑分子在大鼠75nmol/kg給藥半衰期為3.7小時(shí)，本技術(shù)的rhgh-vhh融合蛋白在藥代動(dòng)力學(xué)方面為實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)效劑型也展現(xiàn)了較優(yōu)的特性。

2、一方面，本技術(shù)提供了一種融合蛋白，其包含：轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白，以及生長(zhǎng)激素或其功能活性片段，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白包含能夠結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的多肽、抗體或其抗原結(jié)合片段。

3、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白具有下述性質(zhì)中的一種或多種：

4、(1)能夠延長(zhǎng)所述生長(zhǎng)激素的體內(nèi)半衰期；

5、(2)能夠跨越血腦屏障；

6、(3)能夠通過(guò)口服遞送；以及

7、(4)能夠?qū)⑺錾L(zhǎng)激素遞送至表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的細(xì)胞。

8、在某些實(shí)施方式中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白為人轉(zhuǎn)鐵蛋白。

9、在某些實(shí)施方式中，所述抗體選自下組中的一種或多種：?jiǎn)慰寺】贵w、嵌合抗體、人源化抗體和全人源抗體。

10、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合片段包括fab，fab’，fv片段，f(ab’)2，f(ab)2，scfv，vhh，di-scfv和/或dab。

11、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白為vhh。

12、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白包含cdr3，且所述cdr3包含seq id no:3所示的氨基酸序列。

13、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白cdr2，且所述cdr2包含seq id no:2所示的氨基酸序列。

14、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白cdr1，且所述cdr1包含seq id no:1所示的氨基酸序列。

15、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白含vhh，且所述vhh包含seq id no:8所示的氨基酸序列。

16、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的生長(zhǎng)激素或其功能活性片段為人生長(zhǎng)激素或其功能活性片段。

17、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白中的生長(zhǎng)激素或其功能活性片段包含seq idno:10所示的氨基酸序列。

18、在某些實(shí)施方式中，在所述融合蛋白中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白和所述生長(zhǎng)激素或其功能活性片段直接或間接相連。

19、在某些實(shí)施方式中，在所述融合蛋白中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白的n端和所述生長(zhǎng)激素或其功能活性片段的c端直接或間接相連。

20、在某些實(shí)施方式中，在所述融合蛋白中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白的c端和所述生長(zhǎng)激素或其功能活性片段的n端直接或間接相連。

21、在某些實(shí)施方式中，在所述融合蛋白中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白和所述生長(zhǎng)激素或其功能活性片段通過(guò)連接子相連。

22、在某些實(shí)施方式中，在所述融合蛋白中，所述連接子包含seq id no:9所示的氨基酸序列。

23、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白包含seq id no:11所示的氨基酸序列。

24、在某些實(shí)施方式中，所述融合蛋白能夠結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白，且能夠結(jié)合和/或活化生長(zhǎng)激素受體。

25、另一方面，本技術(shù)提供了一種或多種分離的核酸分子，其編碼本技術(shù)所述的融合蛋白。

26、另一方面，本技術(shù)提供了一種載體，其包含本技術(shù)所述的核酸分子。

27、另一方面，本技術(shù)提供了一種細(xì)胞，其包含所述的核酸分子，和/或所述的載體。

28、另一方面，本技術(shù)提供了一種藥物組合物，其包含所述的融合蛋白，所述的核酸分子，所述的載體或所述的細(xì)胞，以及任選地藥學(xué)上可接受的載體。

29、另一方面，本技術(shù)提供了所述的融合蛋白，所述的核酸分子，所述的載體，所述的細(xì)胞，和/或所述的藥物組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防和/或治療疾病和/或病癥。

30、在某些實(shí)施方式中，所述疾病和/或病癥包括生長(zhǎng)激素異常引起的疾病和/或病癥。

31、在某些實(shí)施方式中，所述疾病和/或病癥包括生長(zhǎng)激素缺乏癥。

32、另一方面，本技術(shù)提供了一種預(yù)防和/或治療疾病和/或病癥的方法，其包括向有需要的受試者施用所述的融合蛋白，所述的核酸分子，所述的載體，所述的細(xì)胞，和/或所述的藥物組合物。

33、在某些實(shí)施方式中，所述疾病和/或病癥包括生長(zhǎng)激素異常引起的疾病和/或病癥。

34、在某些實(shí)施方式中，所述疾病和/或病癥包括生長(zhǎng)激素缺乏癥。

35、另一方面，本技術(shù)還提供了一種延長(zhǎng)生長(zhǎng)激素在體內(nèi)半衰期的方法，其包括施用所述的融合蛋白。

36、本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠從下文的詳細(xì)描述中容易地洞察到本技術(shù)的其它方面和優(yōu)勢(shì)。下文的詳細(xì)描述中僅顯示和描述了本技術(shù)的示例性實(shí)施方式。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到的，本技術(shù)的內(nèi)容使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)λ_(kāi)的具體實(shí)施方式進(jìn)行改動(dòng)而不脫離本技術(shù)所涉及發(fā)明的精神和范圍。相應(yīng)地，本技術(shù)的附圖和說(shuō)明書(shū)中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。

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