【文檔說(shuō)明】血液樣本采集和血涂片制備醫(yī)學(xué)課件.pptx，共(48)頁(yè)，1.025 MB，由小橙橙上傳

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血液樣本采集和血涂片制備ppt醫(yī)學(xué)課件（一）血液的組成血液由（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板）和血漿組成血漿：血液加抗凝劑后分離出的淡黃色液體血清：離體后的血液自然凝固析出的淡黃色透明液體血漿與血清的區(qū)別：血清缺少某些凝

血因子，如：凝血因子Ⅰ（纖維蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ等。一、血液生理概要二、采血方法（一）靜脈采血法1、采血部位：肘部靜脈、手背靜脈、內(nèi)踝靜脈或股靜脈小兒可采頸外靜脈血液2、操作方法：準(zhǔn)備試管檢查注射器選擇靜脈消毒扎壓脈帶穿刺抽血放血與混勻3、注意事項(xiàng)：（

1）采血前應(yīng)向患者耐心解釋?zhuān)韵蓱]和恐懼心理（2）所用針頭應(yīng)銳利、光滑、通氣、針筒不漏氣若靜脈暴露不明顯，可用左手食指消毒后，觸摸采血部位，發(fā)現(xiàn)靜脈后憑手感的方向性穿刺（3）抽血時(shí)只能往外抽，不能往里推（二）皮膚采血法：1、概述：又稱(chēng)為毛細(xì)血管采血法，是采集微動(dòng)脈、微靜脈和毛細(xì)

血管的混合血，同時(shí)含細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。采血部位：世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦采集左手無(wú)名指指端內(nèi)側(cè)血液，嬰幼兒可采集大踇趾或足跟內(nèi)側(cè)緣血液，嚴(yán)重?zé)齻颊?，可選擇皮膚完整處采血。目前可用激光無(wú)痛采指血儀采血。2、操作方法：準(zhǔn)備取合適試管，加適量稀釋液取微量試

管與乳膠吸頭相連并檢查是否漏氣，或取一次性微量采血管按摩按摩左手中指或無(wú)名指指端內(nèi)側(cè)，使局部組織充血消毒用75%的乙醇棉簽擦拭采血部位，待干針刺左手捏緊采血指端，右手持一次性消毒采血針自指端腹內(nèi)刺入，深度2～3mm拭血血液流出后，用無(wú)菌棉球擦去第一滴

血吸血用一次性微量吸管吸血，止血。若血流不暢，可用左手自采血部位遠(yuǎn)端向指端施壓使血液流出稀釋用無(wú)菌干棉球擦去吸管外部血液，將吸管伸入裝有稀釋液的試管底部，慢慢排試管內(nèi)的出血液，并用上清液清洗管內(nèi)余血2～3次，最后將試管內(nèi)的血液混勻3、注意事

項(xiàng)（1）所選采血部位皮膚應(yīng)完整，無(wú)燒傷、凍瘡、發(fā)紺水腫或炎癥，除特殊情況外，不要耳垂采血（2）應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止采血部位感染，做到一人一針一管，避免交叉感染。（3）消毒后，待乙醇揮發(fā)后采血，否則流血不易成滴（4）因第一滴血混有組織液，應(yīng)擦去，應(yīng)向結(jié)果的準(zhǔn)確性（三）真空采血法：真空采血裝置有套筒

式、頭皮靜脈式兩種。封閉式采血避免了容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，能有效保護(hù)血液有形成分，保證待檢樣本原始性狀的完整性，是檢驗(yàn)結(jié)果更可靠。能有效避免醫(yī)護(hù)人員與患者之間的交叉感染。各種真空采血容器根據(jù)需要

標(biāo)有不同的色碼，適用于不同檢驗(yàn)項(xiàng)目（表1-1-1）。表1-1-1常用彩色真空采血容器的用途蓋子顏色添加劑注意事項(xiàng)用途紅色無(wú)凝塊形成約需30～60min化學(xué)、血清學(xué)、血庫(kù)紫色EDTA須顛倒混勻8次全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）淡藍(lán)色枸櫞酸鈉須顛倒混勻

3～4次；血液與抗凝劑比例為9:1凝血檢查（PTA、PTT、因子測(cè)定）綠色肝素鈉、肝素鋰、肝素鋰根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇不同類(lèi)型肝素；須顛倒混勻8次化學(xué)灰色氟化鈉須顛倒混勻8次葡萄糖、糖耐量黃色多聚茴香腦磺酸鈉須顛倒混勻8次血培養(yǎng)金黃色分離膠/凝塊激活劑須顛倒混勻

5次化學(xué)淡綠色分離膠/肝素鋰須顛倒混勻8次化學(xué)黑色枸櫞酸鈉須顛倒混勻8次，血液與抗凝劑比例為4:1血沉橘紅的促凝劑須顛倒混勻8次，靜置5min快速生化（四）方法學(xué)評(píng)價(jià)1、皮膚采血法：缺點(diǎn)易溶血、凝血、混入組織液，局部皮膚揉擦、刺針深度不一等影響檢驗(yàn)結(jié)果；結(jié)果重復(fù)性差、準(zhǔn)確性不好2、靜脈采血法：

開(kāi)放式采血法，操作環(huán)節(jié)多、難于規(guī)范、易造成血液污染；封閉式采血法，操作規(guī)范，利于樣本運(yùn)送和保存，防止院內(nèi)血源性傳染病。（五）質(zhì)量控制1、患者患者活動(dòng)情況、精神狀態(tài)、藥物等會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果2、采血止血帶結(jié)扎應(yīng)＜1min3、溶血容器不潔凈、劇烈震蕩、操

作不當(dāng)引起溶血使血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血漿、血清化學(xué)成分改變等多項(xiàng)指標(biāo)檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)生變化4、樣本處理采血后立即送檢，標(biāo)本保存不當(dāng)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析應(yīng)考慮藥物、飲食等因數(shù)對(duì)結(jié)果的影響，同時(shí)密切結(jié)合臨床三、抗凝劑的選擇抗凝：是用物理或化學(xué)的方法除去或抑制血液中的某些凝

血因子的活性，以阻止血液凝固?？鼓齽┗蚩鼓镔|(zhì)：能夠阻止血液凝固的物質(zhì)常用的抗凝物質(zhì)如下：1、乙二胺四乙酸（EDTA）鹽鈉鹽（EDTA﹒Na?H?O）鉀鹽（EDTA﹒K?H?O），能與血液中的鈣離子結(jié)合成螯合物，使鈣離子失去凝血作用，阻止血液凝固。

其有效抗凝濃度為1～2mg/ml血液。血細(xì)胞分析儀用EDTA-K2作抗凝劑，用量為EDTA-K2?2H2O1.5～2.2mg/ml血液2、草酸鹽草酸根離子能與樣本中的鈣離子形成草酸鈣沉淀，使鈣離子失去作用，阻止血液凝固。草酸

鹽：溶解度好、廉價(jià)，但對(duì)凝血因子Ⅴ的保護(hù)作用差，影響凝血酶原時(shí)間測(cè)定，因此草酸鹽不適用于凝血檢查。3、草酸鹽雙草酸鹽：不影響紅細(xì)胞形態(tài)和體積，可用于血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)可使血小板聚集、

影響白細(xì)胞形態(tài)，不適用于血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類(lèi)數(shù)4、肝素加強(qiáng)抗凝血酶（AT）滅活絲氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，從而阻止血液凝固。肝素具有抗凝力強(qiáng)、不影響紅細(xì)胞體積、不易溶血等優(yōu)點(diǎn)，絕大都數(shù)檢查都可用肝素做抗

凝劑，是紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)的的理想抗凝劑。可影起白細(xì)胞聚集瑞，氏染色后產(chǎn)生藍(lán)色背景，不適用于CBC、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查5、枸櫞酸鹽常用有枸櫞酸鈉，能與血液中的鈣離子結(jié)合形成螯合物，阻止血液凝固。應(yīng)用范圍：血沉、凝血象、血小板功能檢查及血液保養(yǎng)液。凝血:10

9mmol/L水溶液,與血液之比為1:9；血沉:106mmol/L水溶液,與血液之比為1:4。四、血液涂片制備（一）載玻片的清潔1.新玻片1mol/LHCl泡24小時(shí)→水洗→干燥。2.舊載玻片肥皂水或其他合成洗滌劑水中煮沸20分鐘→熱水洗→自來(lái)水洗→干燥。(→9

5%乙醇泡1小時(shí)→蒸餾水洗→干后備用)。（二）血涂片的制備方法1.取血滴。2.散開(kāi)血滴。3.推片。4.干燥1、手工推片法：取血液一滴，置于載玻片一端．以邊緣平滑的推片（推片兩端應(yīng)平整光滑，比載玻片稍窄或磨去兩角）的一端，放在血滴前方

，逐漸后移接觸血滴，血液立即沿推片散開(kāi)。1、手工推片法：將推片與載片保持30°-45°夾角，平穩(wěn)向前推進(jìn)至載玻片的另一端，殘片上即留下一薄層血膜。1、手工推片法：血膜的影響因素1.血滴大小、2.推片與載玻片之間的角度、3.推片時(shí)的速度有

關(guān)。血滴愈大、角度愈大、推片時(shí)速度愈快，則血膜愈厚；反之血膜愈薄。2、厚血膜涂片法載玻片中央置血1滴鏡檢↓↑用推片角將血由內(nèi)向外旋染色轉(zhuǎn)涂成厚薄均勻、直徑約↑1.5cm的圓形血膜待干↓↑待干→加蒸餾水使紅細(xì)胞溶解→待干鏡一張良好的血涂片的要求厚薄

適宜頭體尾分明細(xì)胞分布均勻血膜邊緣整齊，并留有一定空隙五、血液細(xì)胞染色（一）瑞氏染色法瑞氏染液是有酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料溶于甲醇而成。甲醇的作用：溶解亞甲藍(lán)和伊紅固定細(xì)胞形態(tài)1、染色原理伊紅系不易解離的弱酸性染料，通常用伊紅鈉鹽（Ｎａ+Ｅ－），其有色部分是伊紅，為陰離子，

所以伊紅是酸性染料。1、染色原理【原理】美藍(lán)又名亞甲藍(lán)，為四甲基硫堇染料，有對(duì)醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)，通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)（Ｍ+ＣＩ-）。其有色部分是美藍(lán)，為陽(yáng)離子，所以是一種堿性染料。1、染色原理【

原理】細(xì)胞的受色既有化學(xué)親和作用，也有物理吸附作用。細(xì)胞中的嗜酸性物質(zhì)（如血紅蛋白、嗜酸性顆粒）易與酸性染料伊紅結(jié)合，染成粉紅色；細(xì)胞中的嗜堿性物質(zhì)（如核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒）易與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合

，染成藍(lán)色；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫紅色。2、PH對(duì)細(xì)胞染色的影響1.在酸性環(huán)境中，染色偏紅；2.在堿性環(huán)境中,染色偏藍(lán)。染色時(shí)應(yīng)用pH6.4～6.8的緩沖液維持恒定的酸堿環(huán)境。3、試劑調(diào)配（1）Ⅰ液：瑞氏染料1.0g、純甲醇（AR級(jí)

以上）600ml、甘油15ml。染料放入清潔干燥的乳缽中，加入少量甲醇慢研30min以上，將充分溶解的染料后倒入潔凈的棕色瓶?jī)?nèi)，乳缽內(nèi)再加入少許甲醇細(xì)研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止，最后加入15ml甘油，密封保存。

試劑調(diào)配（2）Ⅱ夜：磷酸鹽緩沖液（PH6.4～6.8）由磷酸二氫鉀（KH?PO?）0.3g、磷酸氫二鈉（Na?HPO?）0.2g、蒸餾水加至1000lm。配好后用磷酸鹽溶液矯正pH，塞緊瓶口保存。4、染色

方法采血在距離載玻片一端1cm處加血液1滴血液。推片左手拿載玻片，右手持推片，制成舌狀、頭、體、尾分明的血涂片。干燥在空氣中晃動(dòng)，使其快速干燥，天氣寒冷或潮濕時(shí)，可置37℃溫箱中保溫促干。標(biāo)記在載玻片一端做好標(biāo)記。4、染色方法染色將血涂片平置于染色架上，滴加Ⅰ夜3～5滴使其迅速蓋

滿血涂片，約0.5～1min后，滴加等量或稍多的Ⅱ夜，用吸球吹氣，使染料充分混合。沖洗5～10min后用流水洗去染液，待干鏡檢。5、注意事項(xiàng)（1）血涂片干透后固定，否則細(xì)胞在染色過(guò)程中容易脫落。（2）加染料應(yīng)適量，過(guò)少易蒸發(fā)形成沉淀

，使細(xì)胞不易檢查。（3）不能先倒染料，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，以防脫色。（4）染色過(guò)淡可以復(fù)染，復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液，后加染液。（二）吉姆薩染色法1、染色原理吉姆薩染液由天青、伊紅組成。染色原理

和結(jié)果與瑞氏染色基本相同2、試劑配制吉姆薩染料1.0g、甘油66ml、甲醇66ml。將染料倒入盛有66ml甘油的圓錐燒瓶?jī)?nèi)，在56℃水浴鍋上加熱90～120min，使染料與甘油充分溶解然后加入60℃預(yù)熱甲醇，充分搖勻后

置棕色瓶中，在室溫下放置7天，過(guò)濾后使用。3、染色方法采血在距離載玻片一端1cm處加血液1滴血液。推片左手拿載玻片，右手持推片，制成舌狀、頭、體、尾分明的血涂片。干燥在空氣中晃動(dòng)，使其快速干燥，天氣寒冷或潮濕時(shí)，可置37℃溫箱中保溫促干。標(biāo)記在載玻片一端做好標(biāo)記。

3、染色方法固定將干燥血涂片用甲醇固定3～5min。染色將血涂片置于磷酸鹽緩沖液（PH6.4～6.8）稀釋10～20倍的吉姆薩染料中，浸泡10～30min。沖洗取出用流水沖洗，待干鏡檢。六、方法學(xué)評(píng)價(jià)（一）血涂片制備手工推片法，用血量少、操作簡(jiǎn)單，是應(yīng)用最廣泛

的方法。棕黃層涂片法可提高異常情況的陽(yáng)性檢出率。此外瘧原蟲(chóng)、微絲蚴等檢查可用厚血涂片法。（二）血液細(xì)胞染色瑞氏染色法是最經(jīng)典、最常用染色法，尤其對(duì)于細(xì)胞質(zhì)成分、中性顆粒等獲得很好的染色效果，但對(duì)細(xì)胞核的著色能力略差。

吉姆薩染液對(duì)細(xì)胞核、寄生蟲(chóng)（如瘧原蟲(chóng)）著色較好，結(jié)構(gòu)跟清晰，但對(duì)細(xì)胞質(zhì)成分的著色能力略差。采用瑞-吉復(fù)合染液可使細(xì)胞質(zhì)、顆粒、細(xì)胞核等均獲得滿意的染色效果。制作人：李金輝

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