磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）羧化酶活性的測定是了解該酶功能的重要手段，其基本原理主要基于酶在特定條件下的催化反應(yīng)。PEP羧化酶在C4植物和CAM植物中扮演著固定CO2的關(guān)鍵角色。

催化反應(yīng)過程

在Mg2+的存在下，PEP羧化酶能夠催化PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）與HCO3-（碳酸氫根離子）發(fā)生反應(yīng)，生成草酰乙酸（OAA）。這一反應(yīng)是植物固定CO2的關(guān)鍵步驟之一。

隨后，生成的草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶（MDH）的催化下，進一步被NADH（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的還原態(tài)）還原為蘋果酸（Mal）。這一連串的反應(yīng)不僅體現(xiàn)了PEP羧化酶在碳固定過程中的核心作用，還展示了酶偶聯(lián)法在測定酶活性中的應(yīng)用。

為了定量測定PEPC的活性，通常采用酶偶聯(lián)法，并借助紫外分光光度計在340nm處測定反應(yīng)體系的吸光度變化。這是因為NADH在340nm處具有特征吸收峰，其消耗速率與PEP羧化酶的活性密切相關(guān)。

在實驗過程中，通過監(jiān)測NADH的吸光度變化（即ΔA=A0-A1，其中A0為反應(yīng)前的吸光度，A1為反應(yīng)后的吸光度），可以計算出NADH的消耗速率。進一步地，根據(jù)NADH的消耗速率和反應(yīng)體系中的酶濃度等參數(shù)，可以推算出PEPC的活性。返回搜狐，查看更多