低聚半乳糖(GOS),是一種天然的功能性低聚糖,其分子結(jié)構(gòu)一般是在乳糖分子的一側(cè)以β(1→3)、β(1→4)、β(1→6)糖苷鍵連接1-7個(gè)半乳糖糖基。因其具有優(yōu)越的生理功能和理化性質(zhì)而在近年來(lái)獲得廣泛關(guān)注。本研究利用乳酸克魯維酵母來(lái)源的β-半乳糖苷酶水解乳糖進(jìn)行酶法合成低聚半乳糖的研究,首先對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化研究,應(yīng)用薄層層析定性、HPLC-ELSD定量技術(shù)對(duì)低聚半乳糖進(jìn)行分析;在確定了檢測(cè)方法后對(duì)低聚半乳糖合成條件進(jìn)行優(yōu)化;并嘗試?yán)肔C-MS技術(shù)分析其分子量,從而確定生成的低聚半乳糖的聚合度并分析其結(jié)構(gòu)。最后利用硅膠柱分離方法對(duì)反應(yīng)所得的混合物進(jìn)行分離,得到的主要結(jié)論如下:(1)定性檢測(cè)利用薄層法,展開(kāi)劑為正丁醇:乙醇:水=5:3:2;顯色劑:1g二苯胺、1ml苯胺、5ml磷酸共溶于50ml的丙酮,可以很好的對(duì)低聚半乳糖進(jìn)行定性。定量檢測(cè)利用HPLC-ELSD檢測(cè)技術(shù),采用氨基柱,色譜條件為流動(dòng)相為乙腈:水=80:20;柱溫35℃;流速1.0 m L/min;進(jìn)樣量20μL。檢測(cè)器條件為:檢測(cè)器溫度80℃,氣體流速2.0 m L/min,增益為1。在以上條件下樣品中物質(zhì)峰型良好,利于定量,且峰面積與濃度成線性關(guān)系,可以根據(jù)樣品中各峰面積利用歸一化法定量計(jì)算。(2)以乳糖為底物,采用商業(yè)乳酸克魯維酵所產(chǎn)β-半乳糖苷酶進(jìn)行催化作用,生成低聚半乳糖。試驗(yàn)結(jié)果表明,反應(yīng)時(shí)間、p H、溫度、底物濃度、加酶量對(duì)GOS合成均產(chǎn)生不同程度影響,其中最佳反應(yīng)條件為底物(乳糖)濃度50%,加酶量40 U/g,p H7.5,50℃反應(yīng)2h,最大產(chǎn)率為23.4%。(3)利用ESI-MS對(duì)分離組分進(jìn)行檢測(cè),兩組分分子量分別為527和689,經(jīng)判斷其聚合度為3和4,即兩組分分別為低聚半乳三糖和低聚半乳四糖。其中低聚半乳三糖通過(guò)β(1→4)糖苷鍵連接β(1→6)糖苷鍵組成,低聚半乳四糖在還原... （共53頁(yè))

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