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金花茶鮮葉的毒理學(xué)安全性研究.pdf

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2024年12月24日 15:53

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中圖分類號:R944.4文獻標識碼:B文章編號:1002 3127(2011)01 0072 03安全性評價金花茶鮮葉的毒理學(xué)安全性研究彭亮，趙鵬，李彬，黃超培，姚思宇，覃輝艷(廣西自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣西南寧530028)關(guān)鍵詞:金花茶鮮葉;安全性;小鼠;大鼠作者簡介:彭亮，碩士，主管醫(yī)師，研究方向:保健食品的毒理和功能學(xué)研究。金花茶Camellia chrysantha(Hu)Tuyama 屬于山茶花科山茶屬金花茶組植物，20 世紀 60 年代初在我國廣西首次被發(fā)現(xiàn)，是世界珍稀的植物資源，僅產(chǎn)于我國廣西南部和西南部的亞熱帶地區(qū)，可供園藝觀賞、生物研究和保健食用。金花茶葉含有多種微量元素、氨基酸以及黃酮、皂甙、多酚、維生素等，具有抑制腫瘤、抗衰老，增強免疫力，增強心肌收縮力和血管彈性，降血脂及降血壓等多種功效 1-3。金花茶葉中很多成分在人體內(nèi)一定含量范圍可以促進健康，但若蓄積量過大，不排除可能會對人體產(chǎn)生慢性危害。本實驗對金花茶鮮葉的急性毒性、亞慢性毒性和遺傳毒性經(jīng)行了研究，為其安全性評價提供依據(jù)。1材料與方法1.1樣品由廣西某金花茶產(chǎn)業(yè)公司提供的普通種金花茶鮮葉(采摘后 24 h 內(nèi))。樣品處理依據(jù)參考文獻 4:稱取2 000 g 樣品，剪碎后加入 10 倍量的85 熱水恒溫浸泡 30 min，過濾取濾液，再以同樣方法對濾渣浸泡提取 1 次，然后合并 2 次濾液，置85 熱水浴中減壓濃縮至1 000 mL，即得2 000 mg/mL 濃度的樣品提取液(以樣品鮮葉計)，測得其比重為 1.1。1.2實驗動物及環(huán)境清潔級昆明種小鼠，由廣西醫(yī)科大學(xué)提供，實驗動物合格證號:NO.0001101;SPF 級SD 種大鼠，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物合格證號:NO.0045799。實驗動物使用許可證號:SYXK 桂 2007-0003。實驗動物室溫度:22 25 ，相對濕度:55%70%。1.3菌株鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型 TA97、TA98、TA100 和 TA102 四種菌株，由中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所提供。1.4實驗儀器日立 KY2000 半自動生化儀，西森美康 XT1800i 全自動血球計數(shù)儀，西德萊茲 EHF 照相顯微鏡，香港步琪 R-200 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。1.5試驗方法 41.5.1急性毒性:采用小鼠急性經(jīng)口毒性試驗，選18 22 g 昆明種小鼠 20 只，雌雄各半，以 0.2 mL/10 g的體積給小鼠灌胃樣品提取液 3 次(每次間隔 5 h)，總劑量為66 000 mg/kg(以樣品提取液計)，觀察記錄動物的中毒表現(xiàn)和死亡情況，為期 2 周。1.5.2遺傳毒性:采用 Ames 試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗進行檢測，試驗流程依據(jù)GB15193-2003 相關(guān)章節(jié)進行。1.5.3亞慢性毒性:采用大鼠 90 d 喂養(yǎng)試驗，選 60 80 g SD 大鼠 80 只，雌雄各半，隨機均分為 4 組。根據(jù)新資源食品的要求，設(shè)20 000、13 333 和6 667 mg/kg(以樣品鮮葉計)3 個劑量組和 1 個陰性對照組，以1.0 mL/100 g 的體積給大鼠灌胃相應(yīng)濃度的樣品溶液和蒸餾水，每天 1 次，連續(xù)灌胃 90 d。試驗期間動物單籠飼養(yǎng)，每天觀察動物的活動和生長情況，記錄大鼠每周進食量和體重。試驗第 45 日對大鼠進行血常規(guī)檢測，第 91 日上午處死大鼠，取血作血常規(guī)和血清生化檢測，同時對大鼠進行大體解剖觀察，取肝臟、腎臟、脾臟和睪丸等臟器進行稱重，計算臟/體比值，并對主要臟器進行病理組織學(xué)檢查。1.6統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用 SPSS13.0 統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析和兩兩比較。2結(jié)果2.1急性毒性觀察期內(nèi)各小鼠均未見中毒癥狀和死亡，觀察期結(jié)束處死動物，大體解剖觀察未見異常，據(jù)此判斷該樣品的小鼠急性經(jīng)口 LD50 66 000 mg/kg，屬無毒級。2.2遺傳毒性Ames 試驗中四種菌株的回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的 2 倍，亦無劑量-反應(yīng)關(guān)系;各樣品組與陰性組的小鼠骨髓細胞微核率都在0.8 1.2 之間，小鼠精子畸形率都在 1.27%1.33%之間，微核率與精子畸形率的組間比較結(jié)果均27毒理學(xué)雜志 2011 年 2 月第 25 卷第 1 期J Toxicol February 2011 Vol.25No.1無統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。表明該樣品無遺傳毒性。2.3亞慢性毒性2.3.1對大鼠體重、總攝食量和總食物利用率的影響:試驗期間各組大鼠生長狀況良好，各樣品組大鼠每周及總的體重、增重、進食量和食物利用率與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)，見表 1，表明該樣品對大鼠的體重增長和食物利用率無明顯影響。2.3.2對大鼠血象及生化指標的影響:各樣品組大鼠在試驗中期和末期的各項血常規(guī)指標及 9 項血液生化指標均在正常范圍，且與對照組值的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)，見表 2，表明該樣品對大鼠的血象及血液生化指標無明顯影響。表 1金花茶鮮葉 90 d 喂養(yǎng)試驗各組大鼠體重變化及進食情況(珋x s，n=10)性別劑量組(mg/kg)初重(g)終末體重(g)總增重(g)總進食量(g)總利用率(%)雄20 00071.0 2.2541.1 44.8470.1 43.72550 28718.5 1.413 33371.7 2.8546.7 40.7475.0 42.52619 25518.2 1.16 66771.7 3.1523.1 30.6451.4 31.02415 20518.8 1.6對照組71.1 2.8536.6 37.7465.5 38.62622 26717.8 0.9雌20 00068.6 2.9301.3 21.8232.7 21.42017 18211.5 0.713 33368.2 2.1294.5 16.1226.3 16.51886 22012.1 1.06 66769.0 1.8307.0 13.4238.0 13.01900 16812.6 1.0對照組68.4 2.6295.5 20.1227.1 19.81943 17811.7 1.2表 2金花茶鮮葉 90 d 喂養(yǎng)試驗各組大鼠血清生化指標檢查結(jié)果(珋x s，n=10)性別劑量組(mg/kg)谷草轉(zhuǎn)氨酶(u/L)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(u/L)尿素氮(mmol/L)肌酐(mol/L)膽固醇(mmol/L)三酰甘油(mmol/L)血糖(mmol/L)總蛋白(g/L)白蛋白(g/L)雄20 000108.8 12.344.1 4.45.94 0.3634.6 3.61.77 0.200.84 0.135.22 0.6082.4 4.539.0 3.713 333115.3 11.547.0 7.16.23 0.5137.1 4.21.83 0.240.91 0.185.41 0.4578.6 5.236.1 4.16 667111.2 16.342.8 4.06.29 0.4437.0 3.31.87 0.280.95 0.125.23 0.4580.0 7.236.5 3.2對照組107.4 10.544.9 5.56.08 0.4436.1 5.01.77 0.230.87 0.125.02 0.3583.5 7.937.8 3.8雌20 000101.4 9.138.6 4.77.07 0.5636.8 5.42.12 0.311.10 0.155.97 0.4386.6 8.138.9 4.113 33396.5 10.041.3 4.66.80 0.4733.3 4.61.98 0.351.05 0.165.66 0.3386.7 5.941.9 3.66 66795.8 10.838.9 5.77.16 0.4836.2 5.62.28 0.381.06 0.145.81 0.4485.9 4.839.9 3.6對照組98.4 7.840.4 7.76.99 0.4437.9 5.52.14 0.380.99 0.125.70 0.4788.1 9.841.1 4.62.3.3對臟器的影響及病理組織學(xué)觀察結(jié)果:各樣品組大鼠臟器重和臟體比與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。對肝臟、腎臟、脾臟、胃、十二指腸、睪丸和卵巢等臟器的組織病理切片檢查結(jié)果顯示，各組均有 1 2 只大鼠的肝臟匯管區(qū)和腎間質(zhì)部有輕度的炎癥細胞浸潤，以上組織病變屬動物的自發(fā)病變，且各組動物的病變程度相似，故可以排除是樣品所致。表明該樣品對大鼠的上述臟器組織無損害作用。3討論金花茶是廣西特有的世界稀有茶種，其茶葉不但色味俱佳，還能祛病駐顏，被喻為“茶族皇后”。近年來隨著工人繁育金花茶的成功，金花茶茶葉也開始步入人們的生活。一般傳統(tǒng)認為，飲茶是安全的，但是近年來，由于工業(yè)污染以及茶屬植物對氟、鋁元素的富集屬性，已證實長期飲茶有可能會引起慢性中毒，所以對新茶種的安全性研究顯得愈發(fā)重要。本研究從毒理學(xué)角度出發(fā)，以金花茶的鮮葉為研究對象，對其急性毒性、遺傳毒性和亞慢性毒性(大鼠 90 d 喂養(yǎng)試驗)進行了研究，各項研究結(jié)果均未提示樣品有毒作用，最大未觀察到有害作用劑量(NOAEL)大于20 000 mg/kg，以人體敏感性為實驗動物的 100 倍計，成人每日飲用1 200 mL 濃度為 1%的金花茶，是相對安全的，而李奕和曹進 5的研究結(jié)果表明，每日攝入 700 mL 的 1%的37毒理學(xué)雜志 2011 年 2 月第 25 卷第 1 期J Toxicol February 2011 Vol.25No.1市售普通紅茶、綠茶或茶磚都有可能導(dǎo)致慢性鋁中毒。金花茶的安全性較高可能跟其生長于原生環(huán)境或植物自身屬性有關(guān)。上述研究結(jié)果，可為金花茶葉的安全性評價提供一定依據(jù)，但由于金花茶葉的成分復(fù)雜，飲用史尚短，長期飲用是否會對人體產(chǎn)生慢性或者蓄積性危害，目前還缺乏資料。要系統(tǒng)完整的評價其安全性，還需要進行亞慢性毒性中的生殖毒性試驗和代謝試驗，并對其慢性(致癌)毒性進行深入的研究。參考文獻1 秦小明，寧恩創(chuàng)，李建強.金花茶食品新資源的開發(fā)利用 J.廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2005，97(2):20-22.2 陳全斌，湛志華，張巧云，等.金花茶葉中黃酮甙元的分離提純及其表征J.廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2005，101(6):10.3 梁機，楊振德.從茶多酚及氨基酸含量比較 8 種金花茶制茶適宜性J.廣西科學(xué)，1999，6(1):72.4 中華人民共和國衛(wèi)生部中國國家標準化管理委員會.食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法(GB15193.1-15193.21)S.北京:中國標準出版社，2003:17-58，86-88.5 李奕，曹進.茶中鋁元素的安全性評估J.國外醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)地理分冊，2005，26(1):26-28.(收稿日期:2010 03 11)中圖分類號:TQ658.3文獻標識碼:B文章編號:1002 3127(2011)01 0074 03安全性評價12 種染發(fā)劑對中國倉鼠卵巢細胞的染色體畸變試驗王翀，張宏偉，李立，魏嵐(中國疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所，北京 100021)關(guān)鍵詞:特殊用途化妝品;染發(fā)劑;染色體畸變試驗作者簡介:王翀，助理研究員，研究方向:環(huán)境毒理學(xué)?；瘖y品是指以涂擦、噴灑或者其他類似的方法，散布于人體表面的任何部位，如皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇等，以達到清除不良氣味、護膚、美容和修筋目的的日用化學(xué)品 1。隨著生活水平的提高及審美觀念的不斷變化，人們對外表的追求也日新月異。而特殊用途化妝品是指用于育發(fā)、染發(fā)、燙發(fā)、脫毛、美乳、健美、除臭、祛斑和防曬的化妝品 1。近來的監(jiān)測發(fā)現(xiàn)化妝品皮膚病逐年增多，尤其是特殊用途的化妝品。因此特殊用途化妝品的安全性已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注。特殊化妝品的申報需經(jīng)過檢驗、整理申報材料、申請初審、初審、申請終審、終審等程序。本研究按照化妝品衛(wèi)生規(guī)范(2007)規(guī)定從毒理學(xué)方面為評審提供可靠依據(jù)。1材料與方法1.1材料1.1.1受試物:所有特殊用途化妝品均為送檢產(chǎn)品，包括染發(fā)劑及焗染膏共計 13 件。均由兩劑組成，按照一定比例混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不含血清的 DMEM 培養(yǎng)液稀釋后用于試驗。1.1.2細胞:中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株。1.1.3主要儀器:DKB-600B 型電熱恒溫水箱(上海一恒科技有限公司)，LD4-8 型低速離心機(北京醫(yī)用離心機廠)，NAPCO-5410 型二氧化碳孵箱(美國Precision Scientific 公司)，SCI-BRIDGE 無菌超凈工作臺(北京賽伯樂實驗儀器有限公司)，日本 OLYMPUSIX70-S8F 型倒置顯微鏡，日本 SANYO 全自動高壓滅菌鍋。1.1.4主要試劑:胎牛血清(Hyclone 公司)，絲裂霉素(Kyowa Hakko Kogyo，日本)，環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限公司)，DMEM 培養(yǎng)基(Hyclone 公司)，6-磷酸葡萄糖(G-6-P)、輔酶 NADP 均由美國 Sigma 公司提供。1.1.5所用溶液及配制 S9混合物:S94 ml，0.02 ml6-磷酸葡萄糖(G-6-P)，1.791 mg 的 NADP(氧化型輔酶)和 1.65 mol/l 的 KCl 各 0.02 ml 組成及 0.4mol/L 的 MgCl20.02 ml。S9終濃度為 2%。絲裂霉素:終濃度為 0.8 g/ml。環(huán) 磷酰胺:終濃度為10 g/ml。1.1.6代謝活化系統(tǒng):使用經(jīng)苯巴比妥鈉和-萘黃酮聯(lián)合誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿并加相應(yīng)的輔助因子配制成47毒理學(xué)雜志 2011 年 2 月第 25 卷第 1 期J Toxicol February 2011 Vol.25No.1

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