本發(fā)明涉及藥品制造技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從番石榴葉提取槲皮素的方法。

背景技術(shù)：

番石榴屬桃金娘科，番石榴葉含揮發(fā)油及鞣質(zhì)等，供藥用，有止痢、止血、健胃等功效，因其降血糖的功效顯著，在國外常用來治療糖尿病。中外民間醫(yī)藥多有采用番石榴葉治療糖尿病及腹瀉等疾病。中醫(yī)認(rèn)為，番石榴葉性平，味甘澀，具有生津止渴、除煩、收斂止瀉，消炎止血、止癢等功用。1980年，廣西醫(yī)學(xué)院將番石榴的鮮綠葉洗凈晾干，干葉用水煮沸騰提取，濾液濃縮成膏狀。膏狀提取物再與干葉打成粗粉混合干燥、打碎、過篩而得番石榴葉浸膏粉，加10％淀粉做黏合劑制成顆粒，干燥后加硝酸鎂壓片，制得降糖片一號。提取番石榴葉的總黃酮制成膠丸得降糖片二號。將番石榴連果皮帶核壓碎，制成果汁，與羅漢果煎熬液混合，制得消渴飲。3種制品用于臨床試驗都獲得較好的降血糖療效。目前研究認(rèn)為，番石榴降糖有效成分主要是黃酮類化合物，番石榴多糖中的黃酮類物質(zhì)可以保護(hù)溶酶體膜的穩(wěn)定性，防止溶酶體破裂造成N-乙酰氨基糖苷酶的釋放，維持血糖的穩(wěn)定，也能刺激糖原合成，降低血糖。

番石榴葉的開發(fā)利用已經(jīng)有很長的歷史，它的主要功效成分為芳香類二級代謝產(chǎn)物多酚類物質(zhì)。在它的葉子中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)含有槲皮素、蔚蓄苷、番石榴苷(即槲皮素-3-Q-L-吡喃阿拉伯糖苷)，并含有揮發(fā)油，如丁香油酚，順-3-己烯-卜醇等。文獻(xiàn)表明正是這些酚類化合物賦予番石榴葉降低血糖等多種功效。目前以番石榴葉為原料開發(fā)的系列產(chǎn)品有：番石榴葉袋泡茶、番石榴葉顆粒、番石榴葉飲料等，這些產(chǎn)品主要是原藥材或以水為溶劑提取的番石榴葉浸膏為原料制成的產(chǎn)品。由于不能溶于水，具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用的槲皮素存在于提取番石榴葉浸膏后的番石榴葉渣中被當(dāng)作廢物丟棄，造成巨大的資源浪費。目前對利用番石榴葉提取槲皮素缺乏系統(tǒng)的研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種從番石榴葉提取槲皮素的方法，以番石榴葉干品為原料，經(jīng)醇提取液制備、浸膏粉制備、沸水重結(jié)晶、乙醇重結(jié)晶和葡聚糖凝膠柱色譜分離得槲皮素，具有工藝簡單、成本低、產(chǎn)率高、適合于工業(yè)生產(chǎn)等特點。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種從番石榴葉提取槲皮素的方法，以番石榴葉干品為原料，包括如下步驟：

1)番石榴葉醇提取液制備：向盛有番石榴葉的容器中加入乙醇，回流提取3次，每次1h，經(jīng)100目篩過濾后，合并藥液，得番石榴葉醇提取液，并測定提取液中總黃酮含量；

2)番石榴葉浸膏粉制備：將番石榴葉醇提取液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃下濃縮至相對密度為1.0～1.25的浸膏，加入10倍浸膏質(zhì)量的水，靜置12h，過濾，噴霧干燥，干燥至進(jìn)料質(zhì)量的70％，得番石榴葉浸膏粉；

3)沸水重結(jié)晶：用水將番石榴葉浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得蘆丁粗品，用沸水重結(jié)晶，70～80℃干燥后得蘆丁純品；

4)乙醇重結(jié)晶：向盛有蘆丁純品的容器中加入稀硫酸，再文火加熱2h，冷卻，抽濾，將濾渣水洗至中性，然后用體積濃度為95％的乙醇重結(jié)晶，葡聚糖凝膠柱色譜分離(SphadexLH20)，用甲醇做洗脫劑，因蘆丁不能被洗脫，從而得到槲皮素黃綠色純品。

根據(jù)以上方案，所述乙醇與番石榴葉的質(zhì)量比為6～10:1，所述乙醇的體積濃度為70％。

根據(jù)以上方案，所述噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為175～185℃。

根據(jù)以上方案，所述稀硫酸與蘆丁純品的質(zhì)量比為70～90:1，所述稀硫酸的體積濃度為2％。

根據(jù)以上方案，所述總黃酮含量采用紫外分光光度法(UV)測定，于510nm處測定樣品溶液吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線所得到回歸方程中計算出樣品溶液中總黃酮的濃度(mg/m1)。

根據(jù)以上方案，所述槲皮素的鑒定采用薄層色譜法(TLC)：硅膠G板，用體積比為5:4:1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸展開，3wt％三氯化鋁乙醇液檢驗，紫外燈365nm處觀察。

根據(jù)以上方案，所述槲皮素的含量測定采用高效液相色譜儀法(HPLC)：色譜柱：Ultimate XB-C18(5um，4.6mm×250mm)，流動相：乙腈-0.4％磷酸(45：55)，流速：1.0ml·min-1，檢測波長：360nm，柱溫：25℃。

本發(fā)明的有益效果是：

1)本發(fā)明為從番石榴葉中提取槲皮素提供了一種新的方法，有效地減少了番石榴葉中槲皮素的浪費，節(jié)約了資源；

2)本發(fā)明的原料廉價易得，對環(huán)境基本不產(chǎn)生污染，工藝簡單易行、快捷，所獲得的槲皮素成本較低、純度高、產(chǎn)率高，適合于工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行說明。

實施例1：

本發(fā)明提供一種從番石榴葉提取槲皮素的方法，以番石榴葉干品為原料，包括如下步驟：

1)番石榴葉醇提取液制備：向盛有番石榴葉的容器中加入番石榴葉7倍質(zhì)量的70v％乙醇，回流提取3次，每次1h，經(jīng)100目篩過濾后，合并藥液，得番石榴葉醇提取液，用UV法測定提取液中總黃酮含量，于510nm處測定樣品溶液吸光度，樣品溶液中總黃酮的濃度96mg/m1；

2)番石榴葉浸膏粉制備：將番石榴葉醇提取液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃下濃縮至相對密度為1.1的浸膏，加入10倍浸膏質(zhì)量的水，靜置12h，過濾，在進(jìn)風(fēng)溫度為175℃的條件下進(jìn)行噴霧干燥，干燥至進(jìn)料質(zhì)量的70％，得番石榴葉浸膏粉；

3)沸水重結(jié)晶：用水將番石榴葉浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得蘆丁粗品，用沸水重結(jié)晶，75℃干燥后得蘆丁純品，用薄層色譜法鑒定黃酮醇化合物中的槲皮素，經(jīng)展開、顯色，顯示槲皮素的斑點，Rf值＝0.58，精制槲皮素與標(biāo)準(zhǔn)品在相應(yīng)的位置分別顯黃色斑點；

4)乙醇重結(jié)晶：向盛有蘆丁純品的容器中加入蘆丁純品70倍質(zhì)量的2v％稀硫酸，再文火加熱2h，冷卻，抽濾，將濾渣水洗至中性，然后用體積濃度為95％的乙醇重結(jié)晶，葡聚糖凝膠柱色譜分離(SphadexLH20)，用甲醇做洗脫劑，因蘆丁不能被洗脫，從而得到槲皮素黃綠色純品。

采用高效液相色譜儀法鑒別測定，提取物結(jié)晶在11.60min出現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)槲皮素相似的色譜峰，證明所得晶體為槲皮素，經(jīng)制定標(biāo)準(zhǔn)品曲線，得提取物結(jié)晶的槲皮素含量為94.8％。

實施例2：

本發(fā)明提供一種從番石榴葉提取槲皮素的方法，以番石榴葉干品為原料，包括如下步驟：

1)番石榴葉醇提取液制備：向盛有番石榴葉的容器中加入番石榴葉9倍質(zhì)量的70v％乙醇，回流提取3次，每次1h，經(jīng)100目篩過濾后，合并藥液，得番石榴葉醇提取液，用UV法測定提取液中總黃酮含量，于510nm處測定樣品溶液吸光度，樣品溶液中總黃酮的濃度110mg/m1；

2)番石榴葉浸膏粉制備：將番石榴葉醇提取液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃下濃縮至相對密度為1.2的浸膏，加入10倍浸膏質(zhì)量的水，靜置12h，過濾，在進(jìn)風(fēng)溫度為180℃的條件下進(jìn)行噴霧干燥，干燥至進(jìn)料質(zhì)量的70％，得番石榴葉浸膏粉；

3)沸水重結(jié)晶：用水將番石榴葉浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得蘆丁粗品，用沸水重結(jié)晶，80℃干燥后得蘆丁純品，用薄層色譜法鑒定黃酮醇化合物中的槲皮素，經(jīng)展開、顯色，顯示槲皮素的斑點，Rf值＝0.58，精制槲皮素與標(biāo)準(zhǔn)品在相應(yīng)的位置分別顯黃色斑點；

4)乙醇重結(jié)晶：向盛有蘆丁純品的容器中加入蘆丁純品80倍質(zhì)量的2v％稀硫酸，再文火加熱2h，冷卻，抽濾，將濾渣水洗至中性，然后用體積濃度為95％的乙醇重結(jié)晶，葡聚糖凝膠柱色譜分離(SphadexLH20)，用甲醇做洗脫劑，因蘆丁不能被洗脫，從而得到槲皮素黃綠色純品。

采用高效液相色譜儀法鑒別測定，提取物結(jié)晶在11.58min出現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)槲皮素相似的色譜峰，證明所得晶體為槲皮素，經(jīng)制定標(biāo)準(zhǔn)品曲線，得提取物結(jié)晶的槲皮素含量為96.1％。

實施例3：

本發(fā)明提供一種從番石榴葉提取槲皮素的方法，以番石榴葉干品為原料，包括如下步驟：

1)番石榴葉醇提取液制備：向盛有番石榴葉的容器中加入番石榴葉10倍質(zhì)量的70v％乙醇，回流提取3次，每次1h，經(jīng)100目篩過濾后，合并藥液，得番石榴葉醇提取液，用UV法測定提取液中總黃酮含量，于510nm處測定樣品溶液吸光度，樣品溶液中總黃酮的濃度123mg/m1；

2)番石榴葉浸膏粉制備：將番石榴葉醇提取液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃下濃縮至相對密度為1.25的浸膏，加入10倍浸膏質(zhì)量的水，靜置12h，過濾，在進(jìn)風(fēng)溫度為180℃的條件下進(jìn)行噴霧干燥，干燥至進(jìn)料質(zhì)量的70％，得番石榴葉浸膏粉；

3)沸水重結(jié)晶：用水將番石榴葉浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得蘆丁粗品，用沸水重結(jié)晶，75℃干燥后得蘆丁純品，用薄層色譜法鑒定黃酮醇化合物中的槲皮素，經(jīng)展開、顯色，顯示槲皮素的斑點，Rf值＝0.58，精制槲皮素與標(biāo)準(zhǔn)品在相應(yīng)的位置分別顯黃色斑點；

4)乙醇重結(jié)晶：向盛有蘆丁純品的容器中加入蘆丁純品90倍質(zhì)量的2v％稀硫酸，再文火加熱2h，冷卻，抽濾，將濾渣水洗至中性，然后用體積濃度為95％的乙醇重結(jié)晶，葡聚糖凝膠柱色譜分離(SphadexLH20)，用甲醇做洗脫劑，因蘆丁不能被洗脫，從而得到槲皮素黃綠色純品。

采用高效液相色譜儀法鑒別測定，提取物結(jié)晶在11.56min出現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)槲皮素相似的色譜峰，證明所得晶體為槲皮素，經(jīng)制定標(biāo)準(zhǔn)品曲線，得提取物結(jié)晶的槲皮素含量為96.2％。

以上實施例僅用以說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，盡管上述實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的相關(guān)技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：可以對本發(fā)明進(jìn)行修改或者同等替換，但不脫離本發(fā)明精神和范圍的任何修改和局部替換均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。

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