【目的】應(yīng)用RNA干擾技術(shù)同時抑制大豆脂肪氧化酶(Lox)和胰蛋白酶抑制劑(KTi)基因的表達(dá),改良大豆品質(zhì),培育缺失Lox和KTi的大豆新材料?！痉椒ā繎?yīng)用RNAi原理,以雙價(jià)RNAi植物表達(dá)載體pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi為基礎(chǔ),以植物表達(dá)載體pCAMBIA3301的質(zhì)粒DNA為模板,利用CaMV35S啟動子的上游引物和CaMV35S終止子的下游引物,PCR擴(kuò)增含有除草劑抗性基因bar的整個表達(dá)原件,然后將其插入到pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi中,構(gòu)建以除草劑為篩選標(biāo)記的雙價(jià)RNAi表達(dá)載體,并通過花粉管通道法轉(zhuǎn)化至大豆吉農(nóng)18、吉農(nóng)28和吉農(nóng)27 3個品種中,對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR、Southern雜交、RT-PCR分子水平檢測和除草劑抗性檢測?！窘Y(jié)果】質(zhì)粒PCR和酶切鑒定以及測序結(jié)果表明,雙價(jià)RNAi植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar構(gòu)建成功。將其轉(zhuǎn)入到大豆中,分別獲得吉農(nóng)18、吉農(nóng)28、吉農(nóng)27T1代籽粒47,25和86粒,以及T2代轉(zhuǎn)基因植株50株。RT-PCR結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因株系中脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制劑mRNA積累受到明顯抑制?！窘Y(jié)論】獲得了轉(zhuǎn)pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar的T2代轉(zhuǎn)基因大豆。 （共6頁)

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網(wǎng)址: 大豆胰蛋白酶抑制劑和脂肪氧化酶基因雙價(jià)RNAi表達(dá)載體的改造及轉(zhuǎn)化 http://m.u1s5d6.cn/newsview343086.html