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細(xì)菌生長(zhǎng)曲線

來源:泰然健康網(wǎng) 時(shí)間:2024年12月06日 06:09

細(xì)菌生長(zhǎng)曲線

以時(shí)間為橫坐標(biāo),以活菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),可得出一條生長(zhǎng)曲線,曲線顯示了細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖的4個(gè)時(shí)期:遲緩期,對(duì)數(shù)期,穩(wěn)定期,衰亡期。 [1]

遲緩期

遲緩期(lag phase):又叫調(diào)整期。細(xì)菌接種至培養(yǎng)基后,對(duì)新環(huán)境有一個(gè)短暫適應(yīng)過程(不適應(yīng)者可因轉(zhuǎn)種而死亡)。此期曲線平坦穩(wěn)定,因?yàn)榧?xì)菌繁殖極少。遲緩期長(zhǎng)短因素種、接種菌量、菌齡以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等不同而異,一般為1~4小時(shí)。此期中細(xì)菌體積增大,代謝活躍,為細(xì)菌的分裂增殖合成、儲(chǔ)備充足的酶、能量及中間代謝產(chǎn)物。生物制藥中常通過加入酶激活劑如鎂離子等縮短遲緩期。 [1]

對(duì)數(shù)期

對(duì)數(shù)期(logarithmic phase):又稱指數(shù)期。此期生長(zhǎng)曲線上活菌數(shù)直線上升。細(xì)菌以穩(wěn)定的幾何級(jí)數(shù)極快增長(zhǎng),可持續(xù)幾小時(shí)至幾天不等(視培養(yǎng)條件及細(xì)菌代時(shí)而異)。此期細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活性都很典型,對(duì)外界環(huán)境因素的作用敏感,因此研究細(xì)菌性狀以此期細(xì)菌最好??股刈饔?,對(duì)該時(shí)期的細(xì)菌效果最佳。

穩(wěn)定期

穩(wěn)定期(stationary phase):該期的生長(zhǎng)菌群總數(shù)處于平坦階段,但細(xì)菌群體活力變化較大。由于培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗、毒性產(chǎn)物(有機(jī)酸、H2O2等)積累pH下降等不利因素的影響,細(xì)菌繁殖速度漸趨下降,相對(duì)細(xì)菌死亡數(shù)開始逐漸增加,此期細(xì)菌增殖數(shù)與死亡數(shù)漸趨平衡。細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活性可出現(xiàn)改變,并產(chǎn)生相應(yīng)的代謝產(chǎn)物如外毒素、內(nèi)毒素、抗生素、以及芽胞等。 [1]

衰亡期

衰亡期(decline phase):隨著穩(wěn)定期發(fā)展,細(xì)菌繁殖越來越慢,死亡菌數(shù)明顯增多?;罹鷶?shù)與培養(yǎng)時(shí)間呈反比關(guān)系,此期細(xì)菌變長(zhǎng)腫脹或畸形衰變,甚至菌體自溶,難以辨認(rèn)其形。生理代謝活動(dòng)趨于停滯。故陳舊培養(yǎng)物上難以鑒別細(xì)菌。

體內(nèi)及自然界細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖受機(jī)體免疫因素和環(huán)境因素的多方面影響,不會(huì)出現(xiàn)象培養(yǎng)基中那樣典型的生長(zhǎng)曲線。掌握細(xì)菌生長(zhǎng)規(guī)律,可有目的地研究控制病原菌的生長(zhǎng),發(fā)現(xiàn)和培養(yǎng)對(duì)人類有用的細(xì)菌。 [1]

測(cè)定原理

將細(xì)菌接種到一只具有側(cè)壁試管的三角燒瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液中,在適宜的培養(yǎng)溫度和良好的通氣狀態(tài)下,定時(shí)取出此三角燒瓶,用"721"分光光度計(jì)測(cè)定菌濃度(光密度值,OD值),并將所得結(jié)果與相對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間繪制出坐標(biāo)圖,就可獲得該菌的生長(zhǎng)曲線。此測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)是不改變菌液體積并用同一培養(yǎng)容器的正常生長(zhǎng)條件下,連續(xù)讀取OD值,故不但可測(cè)出細(xì)菌生長(zhǎng)曲線,還可比較同一菌株在不同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)規(guī)律。 [2]

測(cè)定步驟

(1)菌液培養(yǎng):在菌株的斜面培養(yǎng)物上挑取一環(huán)菌苔,接種千肉湯培養(yǎng)基中,3TC靜止培養(yǎng)12h左右,此菌液即為種子培養(yǎng)液。 [3]

(2)分裝培養(yǎng)液及校正零點(diǎn):用無菌移液管吸取25mL培養(yǎng)基加至有側(cè)臂試管的三角燒瓶中。將未接種的培養(yǎng)液傾入其側(cè)臂試管中,并在光電比色計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn)。即使光電比色計(jì)上的OD值在零點(diǎn)上。 [3]

(3)接種及零時(shí)測(cè)定:用移液吸管吸取2.SmL種子培養(yǎng)液接種瓶中,并充分搖勻。將剛接種的培養(yǎng)液傾入側(cè)臂試管中,測(cè)定光電比色計(jì)OD值。此時(shí)的讀數(shù)為接種后菌種生長(zhǎng)曲線中的零時(shí)讀數(shù)值(即接種拭)。

(4)培養(yǎng)及生長(zhǎng)量測(cè)定將零時(shí)測(cè)定后的三角燒瓶立即放入恒溫水浴搖床上震蕩培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為3TC,搖床的頻率為100次/min 左右(溫度和頻率可隨時(shí)調(diào)節(jié))。在培養(yǎng)中,應(yīng)每隔30min從搖床上取下三角燒瓶, 將菌液傾入側(cè)臂試管中,并在光電比色計(jì)上讀取OD值。記錄每次所測(cè)得的數(shù)據(jù)。在每次測(cè)定時(shí),均要用空白對(duì)照管的培養(yǎng)液來校正光電比色計(jì)的零點(diǎn)。

(5)繪制生長(zhǎng)曲線:以測(cè)定的時(shí)間為橫坐標(biāo),菌數(shù)的對(duì)數(shù)(OD值)為縱坐標(biāo),在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上描點(diǎn)繪圖,所得的曲線即為被測(cè)蔭在實(shí)驗(yàn)條件下的生長(zhǎng)曲線。 [2]

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