2013, 53(12).

摘要:

鄭衛(wèi)江, 侯艷君, 姚文

2013, 53(12):1251-1257.

摘要:摘要:雌馬酚是大豆苷原的微生物代謝產(chǎn)物，被認(rèn)為是大豆異黃酮發(fā)揮生理作用的關(guān)鍵，但僅有33%－50%的人群能夠產(chǎn)生雌馬酚。最新研究表明氫氣在雌馬酚生成過程中起著非常重要的作用。目前此類研究尚處于起步階段，本文總結(jié)了以往的研究結(jié)果，對雌馬酚的生成、生物學(xué)作用及影響雌馬酚生成的因素、氫氣與雌馬酚之間的關(guān)系作了較為詳細(xì)的介紹。

張文娣, 丁延芹, 姚良同, 劉凱, 杜秉海

2013, 53(12):1258-1266.

摘要:摘要:【目的】建立多粘類芽胞桿菌SC2 的基因敲除體系?！痉椒ā坷秒娹D(zhuǎn)化把溫敏型自殺質(zhì)粒pRN5101導(dǎo)入到多粘類芽胞桿菌SC2中。采用基因重組技術(shù)敲除SC2 中的多粘菌素基因E(pmxE)，得到突變株SC2-E。利用抗細(xì)菌性能檢測和高效液相色譜分析合成多粘菌素的能力，來證實(shí)pmxE基因是否被敲除?！窘Y(jié)果】成功構(gòu)建了多粘類芽胞桿菌SC2 的基因敲除體系。pRN5101轉(zhuǎn)入SC2后能夠在28℃復(fù)制，39℃自殺。突變株失去了合成多粘菌素的能力，成功敲除pmxE基因，驗(yàn)證了此體系的可用性?！窘Y(jié)論】首次構(gòu)建了多粘類芽胞桿菌的基因敲除體系，拓展了pRN5101的使用范圍，為研究多粘類芽胞桿菌的基因功能提供了高效的遺傳操作工具。

盧雪梅, 劉桂明, 王宇, 丁久元, 翁維琦

2013, 53(12):1267-1275.

摘要:摘要:【目的】在產(chǎn)聚-β-羥基丁酸酯(Poly-β-hydroxybutyrate，PHB)的羅氏真養(yǎng)菌(Ralstonia eutropha) H16突變株W50中建立完整的阿拉伯糖代謝途徑，引入高親和力阿拉伯糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，獲得能利用L-阿拉伯糖的重組菌株，為獲得能高效利用纖維質(zhì)降解物并積累PHB的工程菌株奠定基礎(chǔ)。【方法】利用PCR技術(shù)擴(kuò)增R.eutropha H16的PHB合酶啟動(dòng)子Ppha C1、大腸桿菌(Escherichia coli)W3110的阿拉伯糖代謝酶基因araBAD和高親和力阿拉伯糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因araFGH。將Ppha C1、araBAD與表達(dá)載體pBBR1MCS連接，構(gòu)建帶有阿拉伯糖代謝酶基因的表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化R.eutropha W50得到重組菌株W50-1。利用雙質(zhì)粒和染色體重組兩種方法將araFGH導(dǎo)入W50-1菌，分別得到重組菌株W50-2和W50-3。通過搖瓶發(fā)酵研究重組菌株W50-1、W50-2和W50-3的發(fā)酵特性。【結(jié)果】酶活分析結(jié)果表明，阿拉伯糖代謝酶基因?qū)崿F(xiàn)了表達(dá)。重組菌株W50-1、W50-2和W50-3均能利用L-阿拉伯糖，并且表達(dá)了轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的重組菌利用L-阿拉伯糖的能力提高。搖瓶發(fā)酵結(jié)果表明，W50-1可以在含0.1 mol/L阿拉伯糖的發(fā)酵培養(yǎng)基中生長，但不能利用低濃度(0.01 mol/L)阿拉伯糖。W50-2、W50-3菌株能夠利用低濃度阿拉伯糖生長，并且在含0.1 mol/L阿拉伯糖的培養(yǎng)基中，W50-3的生物量是W50-1的2.5倍，合成的PHB占菌體干重的38.6%。【結(jié)論】在R.eutropha W50中表達(dá)阿拉伯糖代謝酶基因及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，可以使其高效利用L-阿拉伯糖生長并積累一定水平的PHB。

岳峰, 杜昭勵(lì), 郭雪娜, 何秀萍, 張博潤

2013, 53(12):1276-1284.

摘要:摘要:【目的】研究絮凝基因FLO1 中靠近3'端重復(fù)DNA 序列缺失對絮凝蛋白Flo1功能的影響，為遺傳穩(wěn)定的最小絮凝功能基因的構(gòu)建及酵母菌絮凝特性的可控改造提供理論依據(jù)?！痉椒ā客ㄟ^融合PCR 的方法得到FLO1內(nèi)靠近3'端重復(fù)DNA 序列B、C和D全部缺失的衍生基因FLO1bcd，比較FLO1及FLO1bcd在非絮凝酵母細(xì)胞中表達(dá)后，菌株在不同條件下絮凝特性的差異?！窘Y(jié)果】與表達(dá)完整絮凝基因FLO1的酵母菌株YSF1相比，F(xiàn)LO1內(nèi)靠近3'端重復(fù)DNA 序列全部缺失的酵母菌株YSF1bcd的絮凝強(qiáng)度僅略有降低，而且其絮凝特性對鈣離子的依賴性、金屬離子的敏感性及乙醇敏感性均沒有明顯變化，但對環(huán)境pH以及溫度的變化表現(xiàn)出更廣泛的適應(yīng)性，受甘露糖抑制的敏感性也有所降低?！窘Y(jié)論】FLO1 中重復(fù)DNA序列B、C和D全部缺失與單獨(dú)缺失C或D一樣可以提高絮凝蛋白的構(gòu)象和功能穩(wěn)定性，使酵母細(xì)胞在極端酸堿環(huán)境下仍然表現(xiàn)出明顯的絮凝特性;這些重復(fù)序列的完全缺失對其他絮凝特性沒有明顯影響。因此可以通過重復(fù)序列刪減策略構(gòu)建遺傳穩(wěn)定的最小絮凝功能基因，為絮凝特性在發(fā)酵工業(yè)及環(huán)境修復(fù)方面的可控應(yīng)用奠定理論 基礎(chǔ)。

張飛官, 高雅慧, 任慧爽, 裘麗源, 左偉東, 周澤揚(yáng), 謝潔

2013, 53(12):1285-1294.

摘要:摘要:【目的】從健康桑樹內(nèi)生菌中分離獲得對桑疫病病原菌(Pseudomonas syringae pv. mori)具有顯著拮抗作用的菌株，優(yōu)化其產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)的發(fā)酵條件，為其生防利用奠定基礎(chǔ)。【方法】從嚴(yán)格表面消毒的桑樹根莖中分離內(nèi)生菌，采用平板劃線法純化內(nèi)生菌，用抑菌圈法篩選拮抗菌;根據(jù)菌株的形態(tài)與培養(yǎng)特征、生理生化特性、16S rDNA 序列分析對其進(jìn)行鑒定。通過單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化培養(yǎng)基組分及發(fā)酵條件?！窘Y(jié)果】從健康桑樹中分離獲得內(nèi)生菌77 株，其中，編號為SWg2 的菌株對桑疫病病原菌具有強(qiáng)而穩(wěn)定的抑制作用。菌株SWg2的形態(tài)與培養(yǎng)特征、生理生化特性和泛菌屬(Pantoea sp.)相符，而16S rDNA序列分析結(jié)果顯示它與成團(tuán)泛菌(P. agglomerans)的親緣關(guān)系接近。研究表明其最佳發(fā)酵配方和培養(yǎng)條件為:甘油(2.00%)、硝酸銨(2.00%)、KH2 PO4(0.10%)和MgSO4·7H2O(0.15%)，起始pH 為7.5，裝瓶量20 mL/100 mL，最適培養(yǎng)溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為170 r/min，種子液接種量為4%，搖瓶培養(yǎng)5 d?！窘Y(jié)論】經(jīng)鑒定，對桑疫病病原具拮抗作用的桑樹內(nèi)生菌SWg2為成團(tuán)泛菌(P.agglomerans)，命名為成團(tuán)泛菌SWg2。對其發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化后對桑疫病病原菌顯示出更強(qiáng)的拮抗作用。

董寧, 張迪, 俞勇, 苑孟, 張曉華, 李會(huì)榮

2013, 53(12):1295-1306.

摘要:摘要:【目的】獲得東南極格羅夫山地區(qū)土壤中可培養(yǎng)細(xì)菌組成信息，分析菌株胞外水解酶產(chǎn)生及抗菌活性情況?！痉椒ā肯♂屩苯油坎计桨宸ǐ@得可培養(yǎng)細(xì)菌菌株并根據(jù)其16S rRNA 基因序列對其進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。平板法初步鑒定菌株的胞外酶產(chǎn)生情況，瓊脂塊法分析菌株對5 種供試菌的抗性。【結(jié)果】所有土壤樣品共分離出39 株可培養(yǎng)細(xì)菌，分屬于厚壁菌門(Firmicutes，19株，48.7%)、變形菌門(Proteobacteria，分屬于α-、β-、γ-變形菌綱，共計(jì)10株，25.6%)、放線菌門(Actinobacteria，8株，20.5% )、擬桿菌門(Bacteroidetes，1株，2.6%)和異常球菌-棲熱菌門(Deinococcus-Thermus，1株，2.6%)等5門20個(gè)菌屬，優(yōu)勢菌屬為芽孢桿菌(Bacillus)。不同凍存溫度的土壤樣品分離菌株有所不同。33株細(xì)菌具有至少一種的胞外酶活力，其中產(chǎn)淀粉酶的菌株最多(25株，64.1%)。6株細(xì)菌可抑制至少一種供試菌的生長?！窘Y(jié)論】格羅夫山土壤可培養(yǎng)細(xì)菌組成在大分類上與南極其他地區(qū)一致，但在屬的水平上有所不同。分離出的具有胞外酶活性和抗菌活性的適冷菌株為進(jìn)一步開發(fā)利用南極低溫酶和抗菌活性物質(zhì)提供了良好的菌種資源。

何喬, 丁晨, 李貴中, 陳浩, 承磊, 張輝

2013, 53(12):1307-1317.

摘要:摘要:【目的】評估不同類型煤炭生物降解轉(zhuǎn)化為甲烷的潛力，研究原位煤層的微生物群落結(jié)構(gòu)特征。【方法】分別在原位模擬、補(bǔ)加烴降解產(chǎn)甲烷菌系和補(bǔ)加碳源下厭氧培養(yǎng)煤樣，利用氣相色譜監(jiān)測甲烷產(chǎn)生趨勢，及高通量測序技術(shù)研究原位煤層的細(xì)菌和古菌群落?！窘Y(jié)果】10個(gè)樣品中有3個(gè)高成熟度煤樣可以被厭氧降解轉(zhuǎn)化為甲烷。通過生物強(qiáng)化和添加外源底物可以促進(jìn)HF煤樣的產(chǎn)甲烷潛力。其中SL 煤樣中的古菌類群主要是氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌Methanoculleus和乙酸營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌Methanosaeta為主，細(xì)菌類群主要 屬于Firmicutes(54.4%)、Proteobacteria(30.9%)、未培養(yǎng)微生物(10.8%)、Caldiserica(1.5%)及Thermotogae(1.3%)?！窘Y(jié)論】不同成熟度煤樣降解產(chǎn)氣潛力不同，在部分原位煤層中可能存在參與烴降解與甲烷產(chǎn)生的功能菌。

彭堂見, 衷水平, 陳超然, 彭誠, 姜成英

2013, 53(12):1318-1325.

摘要:摘要:【目的】分離、培養(yǎng)獲得中高溫硫化礦浸取菌，為利用其進(jìn)行生物冶金研究及應(yīng)用奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坷枚r(jià)鐵或單質(zhì)硫?yàn)榈孜铮瑢λ嵝詿崛嗨畼悠愤M(jìn)行富集培養(yǎng)，以獲得能夠氧化二價(jià)鐵或還原性硫的菌株;根據(jù)形態(tài)學(xué)、生理生化特點(diǎn)及系統(tǒng)發(fā)育分析對分離菌株進(jìn)行分類鑒定;通過分析黃鐵礦的鐵氧化速率評估菌種在生物冶金中應(yīng)用的潛力?！窘Y(jié)果】從哥斯達(dá)黎加酸性熱泉泥水樣品中分離得到兩株好氧嗜酸兼性自養(yǎng)細(xì)菌Costa C和Costa E。兩株菌革蘭氏染色反應(yīng)為陽性，細(xì)胞大小相近，分別為(0.4－0.6)μm ×(2.5－4.0)μm和(0.4－0.7)μm×(2.4－4.9)μm，端生芽胞，生長溫度范圍均為30 ℃－55 ℃，最適生長溫度分別為50℃和40℃，生長pH 范圍分別為1.2－5.0和1.4－5.0，最適生長pH均為2.8。可以利用Fe(Ⅱ)、S、K2 S4O6等為能源進(jìn)行自養(yǎng)生長，也可利用酵母浸粉等有機(jī)物生長。兩株菌的16S rRNA基因與硫化桿菌屬(Sulfobacillus)其他菌種的最高相似性大于99%，(G + C)% 含量分別為56.1 mol%和56.7mol%?！窘Y(jié)論】形態(tài)學(xué)、生理生化特點(diǎn)及系統(tǒng)發(fā)育分析表明，研究中篩選獲得的兩株菌均屬于Sulfobacillus屬，分別定名為Sulfobacillus sp. strain Costa C 和Sulfobacillus sp. strain Costa E。浸礦結(jié)果顯示兩株菌在45℃時(shí)可以氧化黃鐵礦，氧化速率分別為63.0 mg/L·d 與56.8 mg/L·d，表明兩株菌具有在中高溫條件下浸取硫化礦的能力。

陳玲, 張菊梅, 楊小鵑, 吳清平, 徐明芳

2013, 53(12):1326-1333.

摘要:摘要:【目的】系統(tǒng)調(diào)查我國南方代表性地區(qū)食品中沙門氏菌污染情況，并對分離株進(jìn)行血清分型和腸桿菌基因間重復(fù)共有序列聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Polymerase Chain Reaction，ERIC-PCR)分型研究，為溯源和控制食品中沙門氏菌的污染提供數(shù)據(jù)?！痉椒ā坎捎枚ㄐ苑ê妥畲罂赡軘?shù)(Most Probable Number，MPN)法對七大類食品(肉與肉制品、水產(chǎn)品、速凍食品、熟食、蔬菜、乳制品和食用菌)中的沙門氏菌進(jìn)行檢測。利用血清分型和分子分型確定南方沙門氏菌血清型的分布和優(yōu)勢血清型，研究分離株的遺傳多樣性?！窘Y(jié)果】從400份食品樣品共檢出75 份沙門氏菌陽性樣品，污染率為18.8%(75/400)。其中，97.3%(73/75)的陽性樣品污染水平均低于10 MPN/g。對93株分離株進(jìn)行血清分型，分屬9個(gè)群、29種血清型。優(yōu)勢血清型為德爾卑沙門氏菌(Salmonella Derby)和鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhimurium)。利用ERIC-PCR對96株沙門氏菌(包括93株分離株和3株標(biāo)準(zhǔn)株)進(jìn)行分型研究發(fā)現(xiàn)，在相似系數(shù)為0.75時(shí)可分為15個(gè)聚類簇，56種型別，分離株的基因型別呈現(xiàn)多樣性?！窘Y(jié)論】南 方食品中沙門氏菌的污染率較高，但污染水平低。S. Derby和S. Typhimurium為優(yōu)勢血清型。初步建立了沙門氏菌ERIC-PCR指紋圖譜數(shù)據(jù)庫，南方食品中沙門氏菌的血清型和基因型呈現(xiàn)多樣性。

賴文彬, 汪世雄, 葉昕

2013, 53(12):1334-1339.

摘要:摘要:【目的】利用流感病毒啟動(dòng)子報(bào)告細(xì)胞株(HeLa-IAV-Luc)，從微生物代謝產(chǎn)物化合物庫中篩選具有抑制流感病毒(WSN/H1N1)效果的化合物，并初步探索其抑制流感病毒的機(jī)理。【方法】首先用化合物處理感染流感病毒的HeLa-IAV-Luc細(xì)胞，通過熒光素酶實(shí)驗(yàn)來篩選出能夠抑制流感病毒的化合物。其次通過在流感病毒感染的不同時(shí)間點(diǎn)加入化合物并檢測病毒蛋白的表達(dá)水平，以此來研究化合物在流感病毒復(fù)制的何時(shí)發(fā)揮作用，并用假病毒實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。同時(shí)通過流感病毒啟動(dòng)子報(bào)告實(shí)驗(yàn)來檢測化合物對流感病毒RNA 聚合酶(viral RNA polymerase，vRNP)活性的影響，探究化合物抑制流感病毒的機(jī)理。最后通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR來檢測化合物對流感病毒RNA 合成的影響。【結(jié)果】通過檢測流感病毒感染的HeLa-IAV-Luc細(xì)胞中熒光素酶活性從化合物庫中篩選出了具有抑制流感病毒活性的化合物Colletodiol。通過在流感病毒感染的不同時(shí)間點(diǎn)加藥以及假病毒實(shí)驗(yàn)證明了Colletodiol在流感病毒進(jìn)入細(xì)胞后發(fā)揮作用，對血凝素(hemagglutinin，HA)蛋白功能沒有影響。通過啟動(dòng)子報(bào)告系統(tǒng)證明了Colletodiol能顯著抑制流感病毒vRNP的活性，流感病毒RNA的合成也因此受到抑制?！窘Y(jié)論】通過HeLa-IAV-Luc細(xì)胞篩選出了具有抑制流感病毒活性的化合物Colletodiol，其抑制流感病毒的機(jī)理是能夠顯著降低流感病毒vRNP 復(fù)合物的活性。

殷月蘭, 趙丹, 康美琴, 談衛(wèi)軍, 連凱, 胡茂志, 陳祥, 潘志明, 焦新安

2013, 53(12):1340-1346.

摘要:摘要:【目的】結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群引起的嚴(yán)重危害人類健康的慢性傳染病，研制預(yù)防結(jié)核病的新型疫苗對于有效控制結(jié)核病具有重要的公共衛(wèi)生意義?！痉椒ā勘狙芯繉Ρ磉_(dá)M.tb 融合蛋白的重組李斯特菌LMΔhly::Ag85b-esat-6的免疫生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究?！窘Y(jié)果】實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，重組菌溶血活性喪失，對C57BL/6小鼠的半數(shù)致死劑量提高了4個(gè)log值，以0.1 LD50的劑量尾靜脈注射C57BL/6小鼠，5天時(shí)被完全清除，病理切片結(jié)果未顯示明顯病理變化，表明重組菌具有良好的安全性。以尾靜脈途徑免疫C57BL/6小鼠，對其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答測定結(jié)果表明，重組菌所運(yùn)送的結(jié)核抗原能誘導(dǎo)小鼠Th1型免疫應(yīng)答，激發(fā)較強(qiáng)的結(jié)核抗原特異性的CTL效應(yīng)?！窘Y(jié)論】上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，表達(dá)結(jié)核分枝桿菌融合蛋白的減毒重組李斯特菌是一種安全的結(jié)核病疫苗候選株，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

沈青春, 李聰研, 馮倩倩, 孫曄, 寧宜寶, 朱良全, 王芳

2013, 53(12):1347-1352.

摘要:摘要:【目的】使用半數(shù)變色單位法實(shí)現(xiàn)對支原體活菌滴度的精確測定，以替代當(dāng)前常用的CCU(變色單位)測定法?！痉椒ā繀⒖疾《镜味萒CID50(半數(shù)組織細(xì)胞感染量)的標(biāo)準(zhǔn)測定方法，對早期學(xué)者提出的支原體活菌滴度指標(biāo)—CCU50(半數(shù)變色單位)的測定方法進(jìn)行改進(jìn)，并做了重復(fù)性、敏感性試驗(yàn)以及與CCU的比對驗(yàn)證試驗(yàn)。為進(jìn)一步驗(yàn)證該方法的適用性，使用其對豬肺炎支原體和雞滑液支原體培養(yǎng)物進(jìn)行了活菌滴度精確測定和評價(jià)?！窘Y(jié)果】該方法可重復(fù)性良好，并具有較強(qiáng)的敏感性和適用性?！窘Y(jié)論】CCU50測定法能對支原體活菌滴度進(jìn)行精確評估，有望成為支原體培養(yǎng)工藝研究、支原體疫苗研發(fā)等方面的有效工具。

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