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目錄

第一章 引言

1．IGF研究歷史及IGF信號(hào)途徑介紹

1．1 IGF-1的發(fā)現(xiàn)

1．2 IGF信號(hào)通路的組成

1．3 IGF配體

1．4 受體IR和IGF-R

1．5 IGF結(jié)合蛋白

1．6 GH-IGF內(nèi)分泌生長(zhǎng)調(diào)控軸

1．7 IGF-1的合成和體內(nèi)循環(huán)

2．IGF-1的功能研究

2．1 IGF1-1對(duì)生長(zhǎng)影響的研究

2．2 IGF-1對(duì)肌肉增殖的影響

2．3 IGF-1對(duì)代謝的影響

2．4 IGF-1對(duì)生殖的影響

2．5 IGF-1對(duì)衰老的影響

2．6 IGF-1的其他功能及臨床應(yīng)用

3．硬骨魚(yú)類(lèi)IGF信號(hào)途徑

3．1 斑馬魚(yú)IGF信號(hào)途徑的組成及序列分析

3．2 魚(yú)類(lèi)IGF-1系統(tǒng)功能總結(jié)

4．鯽魚(yú)作為研究材料的優(yōu)點(diǎn)

第二章 材料和方法

1．主要儀器與設(shè)備

2．主要試劑和試劑盒

2．1 培養(yǎng)基和常用試劑及其配制

2．2 主要分子生物學(xué)試劑

2．3 蛋白實(shí)驗(yàn)試劑及抗體

2．4 試劑盒

3．實(shí)驗(yàn)材料

3．1 載體及菌株

3．2 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)的養(yǎng)殖和管理

4．主要實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法

4．1 感受態(tài)細(xì)胞制備

4．2 基因組提取

4．3 總RNA提取(Trizol法)

4．4 cDNA合成

4．5 PCR產(chǎn)物膠回收

4．6 RNA探針制備

4．7 整體原位雜交(Whole Mount In Situ Hybridization)

4．8 組織切片及蘇木精-伊紅(HE)染色

4．9 免疫組織化學(xué)和免疫熒光技術(shù)

4．10 總蛋白提取及蛋白濃度測(cè)定

4．11 蛋白電泳及蛋白印跡檢測(cè)

4．12 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

5．實(shí)驗(yàn)過(guò)程

5．1 IGF-1轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建

5．2 顯微注射及表型觀察

5．3 轉(zhuǎn)基因魚(yú)篩選

5．4 生長(zhǎng)指標(biāo)評(píng)估以及肌肉組織的病理切片分析

5．5 組織切片及免疫組化

5．6 轉(zhuǎn)錄組分析

5．7 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)

5．8 實(shí)時(shí)定量熒光PCR

5．9 基礎(chǔ)代謝實(shí)驗(yàn)

5．10 肌肉組織中氨基酸含量檢測(cè)

5．11 肌肉組織中脂肪及ATP含量

5．12 其他組織切片及觀察

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

1．斑馬魚(yú)FO高表達(dá)IGF-1的表型

2．轉(zhuǎn)基因鯽魚(yú)的獲得與表型

3．轉(zhuǎn)基因鯽魚(yú)組織病理與相關(guān)分析

3．1 組織病理切片分析

3．2 肌肉組織免疫組織化學(xué)

3．3 轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析

3．4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

3．5 蛋白印跡雜交

3．6 基礎(chǔ)代謝實(shí)驗(yàn)

3．7 肌肉組織中游離氨基酸(BCAAs)檢測(cè)

3．8 肌肉組織中的脂肪及ATP檢測(cè)

3．9 IGF-1高表達(dá)對(duì)生殖系統(tǒng)的影響

第四章 討論

參考文獻(xiàn)

附錄

聲明

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