奶牛乳中酮體檢測方法的對(duì)比研究

牛奶酮病是由體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)和養(yǎng)分代謝障礙引起的一種全身功能障礙的營養(yǎng)代謝性疾病。它的特點(diǎn)是血糖濃度降低、血液、尿液和乳房中的酮體含量增加，導(dǎo)致酮綜合征、酮尿癥和酮乳癥。近年來,隨著我國奶牛業(yè)的發(fā)展和奶牛單產(chǎn)水平的不斷提高,奶牛酮病特別是隱性酮病也越來越嚴(yán)重,酮病能夠?qū)е履膛．a(chǎn)奶量顯著下降,乳成分變化,奶牛出現(xiàn)產(chǎn)后發(fā)情延遲,屢配不孕等,給奶牛業(yè)帶來了相當(dāng)大的損失。奶牛隱性酮病沒有明顯的臨床癥狀,但其發(fā)病率超過臨床酮病10~20倍。檢測奶牛血液酮體含量能夠判定奶牛是否患有酮病,但由于血樣的采集操作不便,會(huì)給奶牛造成應(yīng)激,限制了其在奶牛生產(chǎn)中的應(yīng)用。有研究發(fā)現(xiàn),荷斯坦奶牛血液、尿、乳中酮體含量存在顯著的相關(guān)性,一般認(rèn)為乳酮含量超過10mg/dL,即有隱性酮病。因此,通過檢測乳酮含量進(jìn)行奶牛酮病的監(jiān)測,對(duì)于指導(dǎo)奶牛生產(chǎn)具有很好的意義。本試驗(yàn)在南京地區(qū)某奶牛場進(jìn)行采集奶樣,測定其酮體含量,比較不同泌乳時(shí)間、產(chǎn)奶水平、日糧結(jié)構(gòu)等,找出酮病發(fā)生和產(chǎn)奶量、泌乳時(shí)間、日糧能量等之間可能的相關(guān)性,為奶牛場、臨床獸醫(yī)和養(yǎng)牛專業(yè)戶早期發(fā)現(xiàn)和診斷酮病提供依據(jù),使奶牛的隱性酮病發(fā)病率下降,從而增加經(jīng)濟(jì)效益。1材料和方法1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料試驗(yàn)?zāi)膛?南京地區(qū)某奶牛場40頭奶牛,分為3組,并分別標(biāo)號(hào)。其中高產(chǎn)奶牛20頭,日產(chǎn)奶量在30kg以上;中產(chǎn)奶牛10頭,日產(chǎn)奶量在20kg~30kg;低產(chǎn)奶牛10頭,日產(chǎn)奶量15kg左右。樣品采集:本試驗(yàn)分別于2007年11月13日、12月11日及2008年3月18日分3次采集該奶牛場40頭已選荷斯坦奶牛的奶樣和飼料樣。乳樣采集是棄去剛擠出的奶,然后接取乳樣裝于干凈塑料瓶內(nèi),每頭奶牛的奶樣大概為150mL。采集后的乳樣立即送南京農(nóng)業(yè)大學(xué)草食動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室4℃下保存,進(jìn)行奶樣酮體含量的檢測;飼料樣采集后,在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行65~70℃烘干預(yù)處理,粉碎進(jìn)行飼料總能的測定。DHI資料的收集:在奶牛場收集已選定的40頭奶牛3個(gè)月的DHI資料,根據(jù)奶牛DHI資料,分析奶牛隱性酮病發(fā)生機(jī)理和可能的原因。1.2測定總酮含量的方法酮體定性:對(duì)酮體定性檢測的方法有很多種,本試驗(yàn)采用試劑法(累加耳試驗(yàn))、酮粉法、列斯法和乳酮法。酮體定量:采用水楊醛比色法測定總酮體含量。將樣品中的乙酰乙酸、B-羥丁酸轉(zhuǎn)化為丙酮后,測定樣品中的丙酮總量,其主要步驟為除蛋白、蒸餾、水楊醛顯色及比色等。飼料能量測定:采用氧彈式熱量計(jì)進(jìn)行日糧總能的測定。1.3數(shù)x標(biāo)準(zhǔn)差sd的表示應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0對(duì)乳中酮體含量的測定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以平均數(shù)(X)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示。根據(jù)資料報(bào)道和本次測定結(jié)果,按通常的標(biāo)準(zhǔn),乳酮在10mg/dL(1.722mmol/L)以下為酮體正常值。對(duì)被檢牛乳中的乳酮值和日糧能量水平,進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)和相關(guān)性分析。2結(jié)果與分析2.1酮體測試的結(jié)果2.1.1乳酮法和酮粉法檢測效果比較由表1可見,利用4種定性方法判定奶樣酮體陽性率,酮粉法檢出率(16.67%)高于其他3種方法的檢出率(分別為8.33%、8.33%、5.83%)。而乳酮法檢測的效果最不明顯,陽性檢出率只有5.83%。對(duì)于易發(fā)生隱性酮病的高產(chǎn)奶牛來說,酮粉法檢測的效果也是最明顯的,酮病陽性檢出率為25%,而用試劑法(13.33%)、列斯法(11.67%)、乳酮法(5.00%)檢測效果都較酮粉法要低。對(duì)于中、低產(chǎn)(日產(chǎn)奶量30kg以下)的奶牛,其隱性酮病的發(fā)病率較高產(chǎn)奶牛要低。2.1.2不同產(chǎn)牛奶乳酮含量的比較對(duì)3次采樣結(jié)果進(jìn)行綜合處理(除去缺失或未檢測的奶樣),樣品數(shù)共有89頭份,其中高產(chǎn)40頭份,中產(chǎn)24頭份,低產(chǎn)25頭份,泌乳牛酮體含量見表2。從表2可知,中產(chǎn)、低產(chǎn)奶牛與高產(chǎn)奶牛的乳酮含量差異均極顯著(P<0.01),說明在高產(chǎn)奶牛中,乳酮的含量較中低產(chǎn)奶牛要高,其隱性酮病的發(fā)病率也較高。而中產(chǎn)奶牛和低產(chǎn)奶牛酮體含量差異極顯著(P<0.01)。乳酮含量在高、中、低奶牛群體中,均表現(xiàn)為差異極顯著,說明酮體含量水平和泌乳量有關(guān)。2.2飼料能量與酮病的相關(guān)分析2.2.1高產(chǎn)牛奶中患隱性酮病的日糧能量水平相關(guān)性分析若干酮病奶牛,檢測這些奶牛平均的酮體含量(見表3)。根據(jù)高產(chǎn)奶牛日糧能量水平,分析高產(chǎn)奶牛中患隱性酮病的奶牛和其日糧能量水平的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)奶牛中患隱性酮病的奶牛和其日糧能量水平相關(guān)系數(shù)為-0.51,呈負(fù)相關(guān)。2.2.2日糧能量水平對(duì)乳狀液中隱性酮病發(fā)生率的影響對(duì)不同產(chǎn)奶水平下隱性酮病奶牛進(jìn)行分析,由表4可知,日糧的能量水平不僅僅影響高產(chǎn)奶牛的隱性酮病發(fā)生率,而且對(duì)整個(gè)奶牛群體的酮病發(fā)生情況影響也較強(qiáng),其相關(guān)系數(shù)為-0.846,呈現(xiàn)極強(qiáng)的負(fù)相關(guān),表明該奶牛場奶牛群體酮病的發(fā)生很依賴于日糧能量水平,日糧能量水平越低,奶牛特別是高產(chǎn)奶牛的隱性酮病發(fā)生率越高,能量水平越高,酮病發(fā)生率越低。2.3高產(chǎn)牛奶中患隱性酮病的情況通過對(duì)收集所選40頭奶牛3次DHI資料,除去缺失或未檢測的奶牛,資料總計(jì)98份,根據(jù)奶牛隱性酮病的監(jiān)測,對(duì)各泌乳月的奶牛酮病發(fā)生情況分析表明:奶牛產(chǎn)后酮病的發(fā)生大部分集中在2個(gè)泌乳月內(nèi),發(fā)病率高達(dá)46.15%;其他各泌乳時(shí)間內(nèi)的隱性酮病發(fā)病率較2月內(nèi)低(見表5)。分析高產(chǎn)奶牛中患隱性酮病的奶牛和其泌乳時(shí)間的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)奶牛中患隱性酮病的奶牛和其泌乳時(shí)間相關(guān)系數(shù)為-0.764,呈負(fù)相關(guān)。故在奶牛泌乳早期,要密切注意奶牛的采食情況及能量攝入,及時(shí)進(jìn)行奶牛隱性酮病監(jiān)測,盡量減少酮病的發(fā)生。3討論3.1酮粉法定性檢測奶牛隱性酮病的臨床診斷較為困難,尋找快速、準(zhǔn)確、實(shí)用的早期診斷方法一直是研究奶牛酮病的熱點(diǎn)。有研究指出酮粉法可用于乳酮的檢測,并可作為酮病早期診斷的方法。本次試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)酮粉法定性檢測較準(zhǔn)確,乳酮陽性以上的15頭牛中,有10頭定量予以確認(rèn),另5頭乳酮含量也接近10mg/dL。酮粉法定性檢測酮體雖具有方便、快捷等優(yōu)點(diǎn),但因所使用的試劑容易吸潮,必須保存在干燥的棕色玻璃瓶中。本試驗(yàn)分別對(duì)高、中、低產(chǎn)奶牛的酮病監(jiān)測表明,結(jié)合水楊醛比色法,有利于提高酮粉法定性檢測的靈敏性、準(zhǔn)確性,并有利于早期診斷。3.2日糧能量水平和泌乳時(shí)間與乳狀“n”的關(guān)系通過對(duì)DHI資料的綜合分析,發(fā)現(xiàn)該場高產(chǎn)奶牛隱性酮病的發(fā)病率仍然較高。從泌乳時(shí)間上看,仍以泌乳60d以內(nèi)的奶牛較多,這與Geishauser和Melendez報(bào)道的一致。從本研究來看,日糧能量水平和泌乳時(shí)間都與奶牛隱性酮病的發(fā)生有較強(qiáng)的相關(guān)性。因此,加強(qiáng)奶牛產(chǎn)前產(chǎn)后的飼養(yǎng)管理,并在2個(gè)泌乳月內(nèi)做到定期監(jiān)測,對(duì)控制隱性酮病的發(fā)生具有重要意義。Bareille研究也發(fā)現(xiàn),奶牛隱性酮病與泌乳時(shí)間有關(guān)。所以,產(chǎn)前通過加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、調(diào)整合理的日糧搭配,分娩后重視隱性酮病的監(jiān)測,提高奶牛干物質(zhì)(尤其是生糖物質(zhì))攝食量,防止奶產(chǎn)量上升過快,可有效預(yù)防酮病的發(fā)生。3.3日糧能量水平對(duì)乳酮的影響從生化角度來說,酮病的發(fā)生與能量代謝密切相關(guān)。反芻動(dòng)物體內(nèi)的能量代謝主要是丙酸和葡萄糖的代謝。體內(nèi)能量大多來自丙酸和葡萄糖,在泌乳時(shí)葡萄糖大多被奶牛利用合成乳糖。而丙酸則參與奶牛的脂肪代謝,當(dāng)奶牛產(chǎn)奶的能量(主要是乳脂)需要超過其食入的能量時(shí),奶牛就開始動(dòng)用體脂,脂肪首先被分解為非酯化脂肪酸(NEFA),并且運(yùn)送到肝臟。在肝臟,NEFA被分解為乙酸,產(chǎn)生的乙酸被徹底分解為二氧化碳和水以生成更多的能量,如果該過程沒有足夠的丙酸和葡萄糖可被利用,過多的乙酸就會(huì)在肝臟中聚集,乙酸分子能在酶的作用下轉(zhuǎn)化為丙酮、乙酰乙酸和β-羥丁酸,這些產(chǎn)物進(jìn)入血液和乳汁中,蓄積到一定水平而引起酮病癥狀。奶牛群體酮病的發(fā)生依賴于日糧能量水平,日糧能量水平越低,奶牛特別是高產(chǎn)奶牛的隱性酮病發(fā)生率越高,能量水平越高,酮病發(fā)生率越低。對(duì)該牛場的隱性酮病的監(jiān)測表明,其隱性酮病的發(fā)生率較低,說明該牛場整體能量水平能滿足奶牛產(chǎn)奶需要,但高產(chǎn)奶牛的隱性酮病發(fā)生率較整體高,說明高產(chǎn)奶牛的日糧能量水平不能滿足產(chǎn)奶需要。對(duì)所選40頭奶牛的乳酮水平和日糧能量水平的綜合監(jiān)測表明,其整體的乳酮酮體水平遠(yuǎn)低于隱性酮病酮體水平(10mg/d

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