第I部分：

生物技術(shù)藥物的臨床前安全性評價

在1997年7月16日的ICH指導(dǎo)委員會會議上進(jìn)入ICH進(jìn)程第四階段，本指導(dǎo)原則被推薦給三方ICH管理機(jī)構(gòu)采納。

1. 前言

1.1 背景

生物技術(shù)藥物（生物藥物）的開發(fā)始于20世紀(jì)80年代初。80年代后期批準(zhǔn)了第一個上市許可。對于生物技術(shù)藥物的安全性評價，不同的管理機(jī)構(gòu)已發(fā)布了一些指導(dǎo)原則和考慮要點文件。管理機(jī)構(gòu)對這些文件的回顧，可能會為開發(fā)新生物藥物提供有用的背景資料。

目前，生物藥物的申報已積累了大量的經(jīng)驗。對這些經(jīng)驗的重要回顧，為本指導(dǎo)原則的制定奠定了基礎(chǔ)。本文的目的在于為設(shè)計科學(xué)合理的臨床前安全性評價試驗提供總體原則。

1.2 目的

目前，歐盟、日本和美國對于生物技術(shù)藥物的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)基本一致。三方均采用靈活、個案處理和基于科學(xué)的方法評價臨床前安全性，支持臨床開發(fā)和上市許可。在這一快速發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域，需要地區(qū)之間達(dá)成共識并且保持持續(xù)對話。

臨床前安全性評價的主要目的是： 1）確定人體使用的安全起始劑量和隨后的劑量遞增方案；2）確定潛在毒性靶器官并研究這種毒性是否可逆；以及3）確定臨床監(jiān)測的安全性參數(shù)。本文件提供的原則旨在提高支持性臨床前安全性數(shù)據(jù)的質(zhì)量和一致性，以利于生物藥物的開發(fā)。

1.3 范圍

本指導(dǎo)原則的主要目的是推薦一種評價生物技術(shù)藥物臨床前安全性的基本模式，適用于采用多種表達(dá)系統(tǒng)的已鑒定細(xì)胞（如細(xì)菌、真菌、昆蟲、植物和哺乳動物細(xì)胞）所制備的產(chǎn)品。這些產(chǎn)品可用于體內(nèi)診斷、治療或預(yù)防。其活性物質(zhì)包括蛋白質(zhì)、多肽及其衍生物或由其組成的產(chǎn)品；它們可能是細(xì)胞培養(yǎng)衍生物，或者采用重組DNA技術(shù)，包括通過轉(zhuǎn)基因植物和動物生產(chǎn)的產(chǎn)品。例如（包括但不限于）：細(xì)胞因子、纖維蛋白溶酶原激活因子、重組血漿因子、生長因子、融合蛋白、酶、受體、激素和單克隆抗體。

本文中的原則可能也適用于重組DNA蛋白疫苗、化學(xué)合成多肽、血漿衍生產(chǎn)品、從人組織
提取的內(nèi)源性蛋白和寡核苷酸藥物。

本文件適用范圍不包括抗生素、變應(yīng)原提取物、肝素、維生素、血細(xì)胞成分、常規(guī)的細(xì)菌或病毒疫苗、DNA疫苗或者細(xì)胞和基因療法。

2. 受試物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

安全性考慮可能涉及藥物中存在的雜質(zhì)或污染物。最好通過純化處理去除雜質(zhì)和污染物，而不是為確保其質(zhì)量建立一套臨床前研究計劃。在任何情況下，都應(yīng)該充分確證產(chǎn)品的特征，以便對臨床前安全性研究進(jìn)行合理設(shè)計。

宿主細(xì)胞如細(xì)菌、酵母、昆蟲、植物和哺乳動物細(xì)胞的污染存在潛在的危險性。宿主細(xì)胞污染物可導(dǎo)致過敏反應(yīng)和其他免疫病理學(xué)反應(yīng)。理論上有與核酸污染物相關(guān)的不良反應(yīng)，但也存在整合到宿主細(xì)胞基因組的可能性。源于昆蟲、植物和哺乳動物細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因植物和動物的產(chǎn)品，還可能有額外的病毒感染風(fēng)險。

一般來講，用于正規(guī)藥理和毒理試驗的產(chǎn)品應(yīng)與擬用于初期臨床試驗的產(chǎn)品具有可比性。但是，在藥物開發(fā)進(jìn)程中允許為提高產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量進(jìn)行正常的生產(chǎn)工藝改進(jìn)。但應(yīng)考慮這種變更對于動物試驗結(jié)果外推至人體的可能影響。

在藥物開發(fā)過程中，如果采用了一種新的或改進(jìn)的生產(chǎn)工藝，或者產(chǎn)品或處方出現(xiàn)了重大變更時，應(yīng)證明產(chǎn)品的可比性?？杀刃栽u價可基于生化和生物學(xué)特征（即鑒別、純度、穩(wěn)定性和效價）。有些情況下可能需要進(jìn)行附加研究（即藥代動力學(xué)、藥效學(xué)和/或安全性研究）。應(yīng)闡明所用方法的科學(xué)合理性。

3. 臨床前安全性試驗

3.1 一般原則

臨床前安全性研究的目的在于解釋人體研究啟動前至整個臨床開發(fā)過程中的藥理學(xué)和毒理學(xué)作用。體外和體內(nèi)研究都有助于確定這種特性。對于那些在結(jié)構(gòu)和藥理作用上與已大量臨床使用的產(chǎn)品類似的生物藥物，可酌情減少毒性試驗。

臨床前安全性試驗應(yīng)考慮：

1） 相關(guān)動物種屬的選擇；

2) 年齡；

3) 生理狀態(tài)；

4) 給藥方式，包括劑量、給藥途徑和給藥方案；

5) 受試品在使用條件下的穩(wěn)定性。

毒性試驗應(yīng)遵循藥物非臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）；但因為有些生物藥物往往需要采用特殊試驗系統(tǒng)，可能無法完全符合GLP的要求。應(yīng)區(qū)分不符合GLP的條件，并且評價其相對于總體安全性評價的相對意義。在某些情況下，不完全符合GLP要求并不一定意味著這些試驗數(shù)據(jù)不能用于支持臨床試驗和上市許可。

藥物毒性試驗的常規(guī)方法不一定適用于生物藥物，因為后者結(jié)構(gòu)和生物學(xué)性質(zhì)具有專一性和多樣性，包括種屬特異性、免疫原性和非預(yù)期的多功能活性。

3.2 生物活性/藥效學(xué)

生物活性可用體外測定法評價，以確定產(chǎn)品的何種作用及與臨床藥效的相關(guān)性。細(xì)胞系和/或原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用，可能有助于檢測藥物對細(xì)胞表型和增殖的直接作用。因為許多生物技術(shù)藥物具有種屬特異性，選擇相關(guān)動物種屬進(jìn)行毒性試驗非常重要。哺乳動物細(xì)胞系可用于預(yù)測體內(nèi)活性的特異性，并且可以定量評價生物藥物對不同種屬（包括人類）的相對靈敏度。設(shè)計此類試驗可測定受體結(jié)合、受體親和力和/或藥理作用，幫助選擇合適的動物種屬進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)藥理和毒理試驗。綜合考慮體外和體內(nèi)試驗結(jié)果有助于將發(fā)現(xiàn)的情況外推至人體。評價藥理作用的體內(nèi)研究，包括作用機(jī)理的解釋，通常用于支持臨床研究中產(chǎn)品擬定用途的合理性。

對于單克隆抗體，應(yīng)詳細(xì)描述抗體的免疫學(xué)特性，包括抗體的抗原特異性、補(bǔ)體結(jié)合、對人非靶組織的任何非預(yù)期反應(yīng)和/或細(xì)胞毒性。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)拿庖呓M織化學(xué)方法在一系列的人組織上進(jìn)行此類交叉反應(yīng)試驗。

3.3 動物種屬/模型選擇

由于許多生物技術(shù)藥物的生物學(xué)活性與種屬和/或組織特異性相關(guān)，通常無法在常用種屬（如大鼠和犬）中進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的毒性試驗，而應(yīng)使用相關(guān)種屬動物。所謂相關(guān)種屬，是指受試物在此類動物上，由于受體或抗原決定簇（對單克隆抗體而言）的表達(dá)，能產(chǎn)生藥理學(xué)活性?？梢允褂枚喾N技術(shù)（如免疫化學(xué)或者功能試驗）確定相關(guān)種屬。有關(guān)受體/抗原決定簇分布的知識，有助于更多的了解潛在的體內(nèi)毒性。

用于單克隆抗體試驗的相關(guān)動物種屬應(yīng)能表達(dá)所預(yù)期的抗原決定簇，并能證明其與人體組織具有類似的組織交叉反應(yīng)。這將使評價結(jié)合抗原決定簇所致毒性和任何非預(yù)期組織交叉反應(yīng)的能力顯著提高。如果能證明非預(yù)期的組織交叉反應(yīng)與人體相似，即使是一種不表達(dá)預(yù)期抗原決定簇的動物種屬，對毒性評價仍有一定意義。

安全性評價項目中一般應(yīng)包括兩種相關(guān)種屬的動物，但在某些已經(jīng)證明合理的情況下（如只能確定一種相關(guān)種屬的動物，或?qū)υ撋锼幬锏纳飳W(xué)活性已經(jīng)十分了解），一種相關(guān)種屬可能已足夠。此外，即使短期毒性研究中必須用兩種動物確定毒性，隨后的長期毒性研究可能仍有理由使用一種動物（如當(dāng)兩種動物的短期毒性試驗結(jié)果相似時）。

不相關(guān)種屬動物的毒性研究可能會產(chǎn)生誤導(dǎo)，因而應(yīng)避免。當(dāng)無相關(guān)種屬時，應(yīng)該考慮使用表達(dá)人源受體的相關(guān)轉(zhuǎn)基因動物或者使用同源蛋白。如果表達(dá)人源受體的相關(guān)轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)品與人源受體的相互作用和人體的預(yù)期生理結(jié)果相似，可以完善使用此類產(chǎn)品而獲取的信息。盡管使用同源蛋白也能得到有用的信息，但應(yīng)該注意到，同源蛋白和臨床擬用的產(chǎn)品之間，在生產(chǎn)工藝、雜質(zhì)/污染物的范圍、藥代動力學(xué)和確切的藥理學(xué)機(jī)制方面都可能有不同之處。如不能使用轉(zhuǎn)基因動物模型或者同源蛋白時，對采用單一種屬進(jìn)行的有限毒性評價（例如包括重要功能終點如心血管和呼吸系統(tǒng)評價的重復(fù)給藥<14天的毒性研究）中發(fā)現(xiàn)的某些潛在毒性的評價應(yīng)謹(jǐn)慎。

近年來，被認(rèn)為與人類疾病相似的動物模型開發(fā)取得了很大進(jìn)步。這些動物模型包括誘發(fā)的和自發(fā)的疾病模型、基因敲除和轉(zhuǎn)基因動物。這些模型不僅可對產(chǎn)品的藥理作用、藥代動力學(xué)和劑量確定提供進(jìn)一步的認(rèn)識，也有助于確定安全性（如評價疾病的不良進(jìn)展？）。在某些情況下，可以用動物疾病模型替代正常動物進(jìn)行毒性研究（注釋1）。應(yīng)注意提供使用動物疾病模型評價安全性的科學(xué)合理性。

3.4 動物的數(shù)量/性別

每個劑量使用的動物數(shù)量直接影響毒性檢測能力。樣本量小可能會由于僅考慮觀察次數(shù)而忽略嚴(yán)重程度，導(dǎo)致未能觀察到毒性事件。因受樣本量小所受到的限制（往往見于非人類靈長動物研究）可以通過增加觀察次數(shù)和延長觀察時間而得到部分補(bǔ)償。一般應(yīng)該使用兩種性別的動物，僅使用單一性別動物時，應(yīng)闡明其合理性。

3.5 給藥途徑/劑量選擇

應(yīng)該盡可能接近擬用于臨床的給藥途徑和次數(shù)。需要考慮產(chǎn)品在所用動物種屬中的藥代動力學(xué)和生物利用度，以及安全、人道？的給藥量。例如，如果活性成分在動物體內(nèi)清除較快或者溶解度低，可采用補(bǔ)償?shù)姆绞?，增加實驗動物的給藥次數(shù)（與臨床研究擬用的給藥方案相比）。此時，應(yīng)確定試驗動物的暴露水平，并與臨床暴露量相比較。同時還需要考慮到給藥量、濃度、制劑和給藥部位的影響。如受到生物利用度、給藥途徑、或者動物大小/生理狀態(tài)等限制而必須改變給藥途徑時，使用與臨床不同的給藥途徑也可以接受。

劑量選擇應(yīng)反映劑量-反應(yīng)關(guān)系，包括中毒劑量和未觀察到不良反應(yīng)的劑量（NOAEL）。對于某些毒性很小或無毒性的產(chǎn)品，不可能規(guī)定一個特定的最大劑量。在此情況下，應(yīng)提供劑量選擇及其預(yù)計人體暴露量倍數(shù)的合理性。高劑量選擇時，應(yīng)該考慮其預(yù)期的藥理/生理作用、足量受試物的可獲得性和預(yù)期的臨床應(yīng)用。當(dāng)產(chǎn)品與所選動物細(xì)胞的親和力或效價低于人體細(xì)胞時，使用更高劑量進(jìn)行試驗非常重要。用于確定足夠安全范圍的人用劑量倍數(shù)，可能隨每一類生物技術(shù)藥物及其臨床適應(yīng)癥而有所不同。

3.6 免疫原性

很多擬用于人的生物技術(shù)藥物對動物有免疫原性。因此這類產(chǎn)品進(jìn)行重復(fù)給藥毒性研究時，應(yīng)在給藥期間檢測抗體以幫助解釋研究結(jié)果。應(yīng)明確抗體反應(yīng)特點（如滴度、出現(xiàn)抗體的動物數(shù)量、中和或者非中和抗體），并將抗體的出現(xiàn)與所有藥理和/或毒理變化進(jìn)行綜合考慮。特別是在解釋數(shù)據(jù)時應(yīng)考慮抗體形成對藥代動力學(xué)/藥效學(xué)參數(shù)、不良反應(yīng)發(fā)生率和/或嚴(yán)重程度、補(bǔ)體活化、或者出現(xiàn)新毒性作用的影響。也應(yīng)注意評價與免疫復(fù)合物形成和沉積相關(guān)的病理學(xué)變化。

除非大多數(shù)動物的免疫反應(yīng)中和了生物藥物的藥理和/或毒理作用，否則檢出抗體不能作為早期終止臨床前安全性研究或者改變研究設(shè)計設(shè)定的持續(xù)時間的唯一標(biāo)準(zhǔn)。在大多數(shù)情況下，生物藥物的免疫反應(yīng)是可變的，正如在人體中觀察到的一樣。如對安全性研究數(shù)據(jù)的解釋不受這些問題的干擾，可以認(rèn)為抗體反應(yīng)沒有特殊意義。

在動物中誘導(dǎo)了抗體形成并不能預(yù)示在人體可能形成抗體。人體可能產(chǎn)生抗人源蛋白的血清抗體，當(dāng)往往出現(xiàn)抗體后仍存在治療作用。人體罕見出現(xiàn)對重組蛋白的嚴(yán)重過敏反應(yīng)。就此而言，對蛋白產(chǎn)品呈陽性的豚鼠過敏研究結(jié)果不能預(yù)測人體反應(yīng)；因此，這類研究對此類產(chǎn)品的常規(guī)評價幾乎沒有價值。

4. 特殊考慮

4.1 安全藥理學(xué)

用合適的動物模型研究潛在的不良藥理學(xué)活性很重要，必要時應(yīng)結(jié)合毒性研究和/或臨床研究，對這些作用進(jìn)行詳細(xì)的觀察。安全藥理學(xué)研究是檢測與潛在毒性相關(guān)的功能性指標(biāo)，這些功能性指標(biāo)可以通過單獨的研究也可以結(jié)合在毒性研究中考察。安全藥理學(xué)研究的目的是揭示任何對主要生理系統(tǒng)功能的影響（如心血管、呼吸、腎臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)）。研究可使用離體器官或其他非整體動物的試驗系統(tǒng)。所有這些研究可用于解釋特定器官毒性的發(fā)生機(jī)理，應(yīng)慎重考慮所發(fā)生的毒性與人體應(yīng)用和適應(yīng)癥的關(guān)系。

4.2 暴露評價4.2.1 藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)

很難制定統(tǒng)一的生物技術(shù)藥物的藥代動力學(xué)研究指導(dǎo)原則。在相關(guān)種屬中進(jìn)行單劑量和多劑量的藥代動力學(xué)、毒代動力學(xué)和組織分布研究是有用的；但試圖評價質(zhì)量平衡的常規(guī)研究用處不大。不同動物種屬間藥代動力學(xué)的差異對動物研究的預(yù)測性或評價毒性研究中的劑量-反應(yīng)關(guān)系有顯著影響。由免疫介導(dǎo)的清除機(jī)制引起的藥代動力學(xué)特征改變，可能會影響動力學(xué)特征和對毒性試驗數(shù)據(jù)的解釋。某些產(chǎn)品可能還出現(xiàn)固有藥效作用的表達(dá)比藥代動力學(xué)特征的明顯延遲（如細(xì)胞因子）的現(xiàn)象，或者可能藥效作用的持續(xù)時間比血漿濃度水平的更長。

在可能情況下，藥代動力學(xué)研究應(yīng)盡可能使用擬用于毒性試驗和臨床研究的制劑，給藥途徑也應(yīng)與臨床研究擬用途徑相關(guān)。制劑、濃度、給藥部位和/或給藥量都可能影響吸收模式。如有可能，應(yīng)在毒性研究中監(jiān)測全身藥物暴露情況。

當(dāng)使用放射性標(biāo)記蛋白時，重要的是要顯示放射標(biāo)記的受試物仍保持與非標(biāo)記物質(zhì)相當(dāng)?shù)幕钚院蜕飳W(xué)性質(zhì)。因為體內(nèi)代謝迅速或者放射性標(biāo)記連接不穩(wěn)定，可能難以解釋使用放射性標(biāo)記蛋白得到的組織放射活性濃度和/或放射自顯影數(shù)據(jù)。在解釋特定的放射性示蹤氨基酸研究時應(yīng)謹(jǐn)慎，因為氨基酸可進(jìn)入與藥物無關(guān)的蛋白/肽再循環(huán)。

臨床研究前應(yīng)提供相關(guān)動物模型中吸收、處置和清除的信息，以便根據(jù)暴露水平和給藥劑量預(yù)測安全范圍。

4.2.2 測定

應(yīng)該在個案分析的基礎(chǔ)上提出使用一種或多種測定方法，并闡述其科學(xué)合理性。通?？紤]
使用一種經(jīng)過驗證的方法。例如，一種放射標(biāo)記蛋白給藥后定量測定TCA沉淀部分的放射活性，
可能會提供足夠的信息，但優(yōu)先考慮使用分析物的特異性分析方法。比較理想的是在動物和人
體研究中使用相同的分析方法。應(yīng)該確定血漿/血清中的血漿結(jié)合蛋白和/或抗體對測定的可能
影響。

4.2.3 代謝

生物技術(shù)藥物代謝的預(yù)期結(jié)果是降解成為小肽和各種氨基酸。因此，通常對其代謝途徑已有了解，一般不需要進(jìn)行經(jīng)典的藥物生物轉(zhuǎn)化研究。

應(yīng)了解生物藥物在生物基質(zhì)（如血漿、血清、腦脊液）中的行為以及對結(jié)合蛋白的可能影響，這對于了解藥效學(xué)作用非常重要。

4.3 單次給藥毒性研究

單次給藥研究數(shù)據(jù)可能得到劑量與全身和/或局部毒性之間的關(guān)系的有用數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)可用于選擇重復(fù)給藥毒性研究的劑量。通過進(jìn)行單次給藥毒性研究（作為藥理或動物模型藥效研究的一部分）可收集到劑量-反應(yīng)關(guān)系的信息。應(yīng)考慮將安全藥理學(xué)參數(shù)結(jié)合在這些研究的設(shè)計中。

4.4 重復(fù)給藥毒性研究

重復(fù)給藥研究的動物種屬選擇考慮參見第3.3節(jié)。給藥途徑和方案（如每天給藥vs間斷給藥）應(yīng)該反映臨床擬用途徑或者用藥（暴露）情況。如果可行，這些研究應(yīng)該包括毒代動力學(xué)評價。

研究設(shè)計一般應(yīng)包括恢復(fù)期，以確定藥理學(xué)/毒理學(xué)作用的可逆性或潛在惡化和/或潛在的延遲毒性效應(yīng)。對于藥理/毒理作用持續(xù)時間較長的生物藥物，其恢復(fù)期試驗動物的監(jiān)測期應(yīng)延長，直至證實毒性反應(yīng)的可逆性。重復(fù)給藥研究的期限應(yīng)根據(jù)臨床暴露的預(yù)期持續(xù)時間和適應(yīng)癥確定。大多數(shù)生物技術(shù)藥物的動物給藥期限為1-3個月。對于計劃短期使用（如≤7天）或者治療危及生命的急性疾病的生物藥物，2周的重復(fù)給藥研究足以？可支持其臨床研究以及上市許可。對于擬用于慢性適應(yīng)癥的生物藥物，一般研究期限為6個月，盡管某些情況下研究期限短些或長些都已用于支持批準(zhǔn)上市。計劃長期使用的生物藥物，應(yīng)科學(xué)地闡明長期毒性研究期限的合理性。

4.5 免疫毒性研究

免疫毒理學(xué)評價的內(nèi)容之一是潛在的免疫原性（參見第3.6節(jié)）。很多生物技術(shù)藥物試圖用來刺激或抑制免疫系統(tǒng)，因而不僅影響體液免疫也影響細(xì)胞免疫。注射部位的炎癥反應(yīng)可能是一種刺激性反應(yīng)，重要的是應(yīng)認(rèn)識到單純注射損傷和/或制劑賦形劑的特定毒性作用也可導(dǎo)致注射部位的毒性反應(yīng)。此外，靶細(xì)胞表面抗原的表達(dá)可能被改變，這暗示有自身免疫的可能。免疫毒理學(xué)試驗中可能要進(jìn)行篩查試驗，而后進(jìn)行機(jī)理研究以闡明這些問題。但常規(guī)的階梯式試驗方法或者標(biāo)準(zhǔn)試驗組合不推薦用于生物技術(shù)藥物的免疫毒性評價。

4.6 生殖能力和發(fā)育毒性研究

應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品、臨床適應(yīng)癥和目標(biāo)患者人群決定是否需要進(jìn)行生殖/發(fā)育毒性研究（注釋2）。具體的研究設(shè)計和給藥方案可根據(jù)種屬特異性、免疫原性、生物學(xué)活性和/或較長的消除半衰期等問題加以修改。例如，當(dāng)存在某些涉及潛在發(fā)育免疫毒性的擔(dān)憂時，特別是對于某些具有長效免疫作用的單克隆抗體，應(yīng)對研究設(shè)計進(jìn)行修改，以評價新生動物免疫功能。

4.7 遺傳毒性研究

常規(guī)用于藥物評價的遺傳毒性研究的范圍和類型并不適用于生物技術(shù)藥物，因此不需要進(jìn)行這些研究，而且給予大量的多肽/蛋白質(zhì)可能得到無法解釋的結(jié)果。并不認(rèn)為這類物質(zhì)會直接與DNA或其他染色體物質(zhì)發(fā)生相互作用（參見注釋3）。

當(dāng)對產(chǎn)品有擔(dān)憂時（例如，一種結(jié)合蛋白產(chǎn)品中含有機(jī)連接分子），應(yīng)考慮采用已有和相關(guān)的試驗系統(tǒng)，包括新開發(fā)的系統(tǒng)進(jìn)行研究。用標(biāo)準(zhǔn)遺傳毒性研究并不適合檢測生產(chǎn)過程中的潛在污染物，如為此目的而進(jìn)行研究應(yīng)闡述其合理性。

4.8 致癌性研究

標(biāo)準(zhǔn)致癌性生物試驗一般不適用于評價生物技術(shù)藥物。但是，可能也需要根據(jù)產(chǎn)品（如生長因子、免疫抑制劑等）的臨床用藥療程、患者人群和/或生物活性，對其潛在致癌性進(jìn)行評價。當(dāng)存在潛在致癌性的擔(dān)憂時，可考慮采用多種方法評價其風(fēng)險。

具有支持或者誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖和克隆擴(kuò)增潛力的產(chǎn)品可能具有致瘤性，應(yīng)采用與研究患者人群可能相關(guān)的多種惡性細(xì)胞和正常的人體細(xì)胞，對其受體表達(dá)進(jìn)行評價。應(yīng)確定產(chǎn)品刺激表達(dá)該受體的正常或惡性細(xì)胞生長的能力。當(dāng)體外數(shù)據(jù)提示存在潛在致癌性擔(dān)憂時，可能需要用相關(guān)動物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究。在長期重復(fù)給藥毒性研究中檢測一些靈敏的細(xì)胞增殖指標(biāo)可能會提供有用的信息。

在某些情況下，如果產(chǎn)品在嚙齒類動物中具有生物活性且無免疫原性，而其他研究又未提供評價潛在致癌性的充分信息，則應(yīng)考慮使用一種嚙齒類動物進(jìn)行試驗。應(yīng)慎重選擇用藥劑量。將藥代動力學(xué)和藥效學(xué)終點與比較性受體特征和擬定人體暴露劑量結(jié)合起來考慮，是確定合適劑量的最科學(xué)的方法。應(yīng)闡述劑量選擇的合理性。

4.9 局部耐受性研究

應(yīng)評價局部耐受性。應(yīng)對計劃上市的制劑進(jìn)行試驗，但在某些已證明合理的情況下，對具有代表性的制劑進(jìn)行試驗是可行的。某些情況下，產(chǎn)品的該潛在不良反應(yīng)可在單次或重復(fù)給藥毒性研究中評價，因此可避免單獨進(jìn)行局部耐受性研究。

注釋

注釋 1

動物疾病模型可能有助于確定毒性終點、選擇臨床適應(yīng)癥和確定合適的制劑、給藥途徑和治療方案。評價研究結(jié)果時應(yīng)注意這些疾病模型往往缺乏歷史數(shù)據(jù)作為參考。因此，至關(guān)主要的是收集同期對照數(shù)據(jù)和基線數(shù)據(jù)以優(yōu)化研究設(shè)計。

注釋 2

關(guān)于特殊類型的化合物（如干擾素）的潛在生殖和/或發(fā)育作用（唯一相關(guān)動物種屬為非人靈長類動物）可能已有大量的資料發(fā)表。在這種情況下，如果機(jī)理研究提示，一個新的但相關(guān)的分子很可能引起相似的作用時，則可能無需進(jìn)行正式的生殖毒性和/或發(fā)育毒性研究。上述情況下均應(yīng)該提供評價其潛在生殖/發(fā)育作用的科學(xué)依據(jù)。

注釋 3

有些生物藥物可能擔(dān)心由于自發(fā)突變細(xì)胞的累積（如通過促進(jìn)增殖的選擇優(yōu)勢）而致癌。但標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性研究組合并不能用于檢測這類情況。針對這些問題，可能需要開發(fā)替代的體外或者體內(nèi)模型來進(jìn)行相關(guān)評價。

第II部分：

生物技術(shù)藥物的臨床前安全性評價

在2011年6月12日已經(jīng)達(dá)到ICH進(jìn)程第四階段，并在2011年6月結(jié)束時與總指導(dǎo)原則整合，本指導(dǎo)原則被推薦給三方ICH管理機(jī)構(gòu)采納。

序言：

閱讀本附錄時，應(yīng)該緊密結(jié)合ICH S6總指導(dǎo)原則。一般來說，附錄是指導(dǎo)原則的補(bǔ)充，當(dāng)
附錄與總指導(dǎo)原則內(nèi)容不同時，應(yīng)以附錄為準(zhǔn)。

1. 前言

1.1 附錄目的

本附錄旨在補(bǔ)充ICH S6總指導(dǎo)原則中討論的以下主題，并進(jìn)行闡述和更新：動物種屬選擇、研究設(shè)計、免疫原性、生殖和發(fā)育毒性、以及潛在致癌性的評價。自ICH S6總指導(dǎo)原則發(fā)表后取得的科學(xué)進(jìn)步和獲得的經(jīng)驗推動了本附錄的制定。本協(xié)調(diào)后的附錄將有助于定義目前的建議以及減小各地區(qū)間存在重大差異的可能性。

本指導(dǎo)原則應(yīng)有助于促進(jìn)臨床試驗的及時進(jìn)行，按照3R（減少/改善/替代）原則減少動物的使用，以及減少其他藥物開發(fā)資源的使用。雖然在本指導(dǎo)原則中未進(jìn)行討論，但應(yīng)考慮使用合適的體外替代方法進(jìn)行安全性評價。如果所有ICH管理機(jī)構(gòu)都接受，那么這些方法可以替代現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)方法。

本指導(dǎo)原則推動了新藥物安全且符合倫理要求的開發(fā)和上市。

1.2 背景

本附錄中的建議在歐盟（EU）、日本和美國之間進(jìn)一步協(xié)調(diào)了非臨床安全性研究，支持不同階段的臨床開發(fā)。當(dāng)前的附錄反映了生物技術(shù)藥物安全性評價的相關(guān)共識。

1.3 指導(dǎo)原則的范圍

本附錄并未改變ICH S6總指導(dǎo)原則的范圍。對于擬用于腫瘤學(xué)的生物技術(shù)藥物，請參考抗癌藥物的非臨床評價指導(dǎo)原則（ICH S9指導(dǎo)原則）。

2. 種屬的選擇

2.1 一般原則

在確定種屬相關(guān)性時，應(yīng)該考慮若干因素。通常從種屬間目標(biāo)序列同源性的比較開始，之后進(jìn)行體外分析，以便在種屬間進(jìn)行靶標(biāo)相對結(jié)合親和力、受體/配體結(jié)合率以及動力學(xué)的定性和定量比較。

另外還推薦進(jìn)行功能活性評價?？梢栽诜N屬特異性細(xì)胞系統(tǒng)和/或體內(nèi)藥理學(xué)或毒理學(xué)研究中證明功能活性。對已知的生物學(xué)反應(yīng)或藥效學(xué)（PD）標(biāo)記物的調(diào)控，能夠為支持種屬相關(guān)性的功能活性提供證據(jù)。

考慮到預(yù)期給藥方案背景下靶向結(jié)合和功能活性的種屬間差異，提供的模型應(yīng)有把握證實靶標(biāo)調(diào)控的潛在不良后果。當(dāng)?shù)湫偷慕】蹬R床前種屬靶標(biāo)表達(dá)水平非常低時（如炎性細(xì)胞因子或者腫瘤抗原），在細(xì)胞系統(tǒng)中的結(jié)合親和力和活性足以指導(dǎo)種屬的選擇。

評價動物組織交叉反應(yīng)對種屬選擇的意義有限（參見注釋1）。但在特定的情況下（如上述方法無法用于說明藥理學(xué)相關(guān)種屬時），組織交叉反應(yīng)（TCR）研究可以通過比較人體和動物組織預(yù)期的靶結(jié)合特征指導(dǎo)毒理學(xué)種屬的選擇。

如ICH S6指導(dǎo)原則所述，如果因為生物藥物與任何種屬的直系同源靶標(biāo)沒有相互作用而不能確定相關(guān)種屬，則可以考慮使用同源分子或者轉(zhuǎn)基因模型。

對于單克隆抗體和以外源性物質(zhì)（如細(xì)菌、病毒等）為靶標(biāo)的其他相關(guān)抗體產(chǎn)品，可以考慮在一個種屬（由申辦者說明種屬選擇的合理性）中進(jìn)行短期安全性研究（參見ICH S6指導(dǎo)原則），無需附加毒性研究，包括生殖毒性研究?；蛘?，當(dāng)動物疾病模型被用于評價原理論證時，可以納入安全性評價，提供與潛在靶標(biāo)相關(guān)的安全性信息。如果不可行，則應(yīng)該在臨床研究中采用適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險減輕策略。

對于與新型毒素/有毒物結(jié)合的抗體-藥物/毒素結(jié)合物（ADC），種屬選擇遵循的一般原則應(yīng)與非結(jié)合抗體相同（參見上述并參見注釋2）。

2.2 一或兩個種屬

如果有兩種藥理學(xué)相關(guān)的種屬作為臨床候選物（一種嚙齒類和一種非嚙齒類），那么應(yīng)該使用這兩個種屬進(jìn)行短期（持續(xù)時間不超過1個月） 毒性研究。如果這些研究的毒理學(xué)結(jié)果相似，或者根據(jù)產(chǎn)品的作用機(jī)制對結(jié)果有一定的理解，那么通常在一個種屬中進(jìn)行長期毒性研究即可。除非有使用非嚙齒類動物的科學(xué)原理支持，否則應(yīng)該使用嚙齒類動物種屬進(jìn)行研究。在兩個非嚙齒類種屬中進(jìn)行研究并不適當(dāng)。

當(dāng)臨床候選物僅在一個種屬中具有藥理學(xué)活性時，需要證明在所有一般毒性研究中使用該種屬的合理性。在第二種屬中進(jìn)行同源產(chǎn)品的研究對于風(fēng)險評估沒有進(jìn)一步的價值，因此不推薦進(jìn)行。

2.3 同源蛋白的使用

使用同源蛋白是ICH S6指導(dǎo)原則第3.3部分中描述的替代方法之一。使用同源蛋白的研究可
以用于檢測危害？？，并且可以了解因藥理作用放大而引起不良作用的可能性，但是使用同源
蛋白一般對定量風(fēng)險評估沒有幫助。因此，為了確定危害？？，只要已經(jīng)證明了研究設(shè)計和所
選劑量（如最大藥理學(xué)劑量）的科學(xué)合理性，就可以使用一個對照組和一個治療組進(jìn)行安全性
評價研究。

3. 研究設(shè)計

3.1 劑量選擇和PK/PD原則的應(yīng)用

大多數(shù)生物藥物的毒性都與其靶向作用機(jī)制相關(guān)；因此，相對高劑量會引起不良反應(yīng)，隨著藥理作用放大而變得明顯。

考慮劑量-反應(yīng)關(guān)系的特征，說明劑量選擇的合理性。通過確認(rèn)以下要素，藥代動力學(xué)-藥效學(xué)（PK-PD）方法（如簡單的暴露-反應(yīng)關(guān)系，或者更加復(fù)雜的模型和模擬方法）有助于高劑量選擇：1）在臨床前種屬中提供最大預(yù)期藥理學(xué)作用的劑量；以及2）提供達(dá)到臨床最大暴露約10倍暴露倍數(shù)的劑量。在臨床前毒性研究中應(yīng)該選擇上述兩種劑量中的較高者，除非有合理證據(jù)證明應(yīng)該選用較低劑量（如最大的可行劑量）。

在無法獲取體內(nèi)/離體PD終點時，可以以PK數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，并且從體外結(jié)合和/或藥理學(xué)數(shù)據(jù)中獲得高劑量選擇的依據(jù)。應(yīng)該考慮校正非臨床種屬和人體之間靶結(jié)合和體外藥理學(xué)活性的差異，以便調(diào)整最高預(yù)期臨床暴露的暴露界限。例如，結(jié)合親和力和/或體外效價之間相對較大的差異可能提示在非臨床研究中更適合采用較高劑量。如果在采用這種方法所選的劑量上也無法證實毒性，那么使用更高倍數(shù)人體劑量進(jìn)行額外毒性研究可能也無法提供其他有用的信息。

3.2 研究期限

對于長期使用的產(chǎn)品，只要按照上述第3.1節(jié)的原則選擇高劑量，那么在嚙齒類或者非嚙齒類中進(jìn)行6個月的重復(fù)給藥毒性研究即可。期限更長的研究通常也不會再提供能夠改變臨床開發(fā)進(jìn)程的有用信息。

對于擬用于晚期癌癥患者長期用藥的生物藥物產(chǎn)品來說，指導(dǎo)原則毒性研究持續(xù)時間的原則見ICH S9指導(dǎo)原則。

3.3 恢復(fù)

如果在與臨床相關(guān)的暴露水平出現(xiàn)具有潛在不良臨床影響的藥理和毒理作用，應(yīng)了解該現(xiàn)象是否會恢復(fù)?？梢酝ㄟ^了解觀察到的個別作用是否可逆，或者在至少一項研究中，至少在一個劑量水平設(shè)置一個非給藥期（由申辦者證明合理性）來獲取該信息。非給藥期的目的是檢查這些作用的可逆性，而不是評價延遲的毒性。證實完全恢復(fù)并不重要。也無需僅為了評價潛在免疫原性而額外設(shè)置恢復(fù)期。

3.4 探索性臨床研究

ICH M3（R2）指導(dǎo)原則中概述的探索性臨床研究的支持性靈活方法適用于生物藥物。建議討論這些方法，并與相關(guān)管理機(jī)構(gòu)達(dá)成共識。

4. 免疫原性

進(jìn)行免疫原性評價有助于研究結(jié)果解釋和隨后的研究設(shè)計。非臨床動物研究中的此類分析，與預(yù)測人源蛋白在人體的潛在免疫原性無關(guān)。

如果存在以下證據(jù)，應(yīng)該在非臨床研究中測定抗藥抗體：1）PD活性變化；2）在缺乏PD標(biāo)記物時出現(xiàn)非預(yù)期的暴露變化；或者3）出現(xiàn)免疫介導(dǎo)反應(yīng)（免疫復(fù)合物疾病、血管炎、過敏性反應(yīng)等）。由于在完成研究的活體階段之前很難預(yù)測是否需要進(jìn)行這種分析，因此這通常有助于確保在研究過程中獲得充分的樣本，以便在需要輔助解釋研究結(jié)果時，可以對其進(jìn)行后續(xù)分析。當(dāng)檢測到ADAs時，應(yīng)該評價它們對解釋研究結(jié)果的影響（亦可參見第I部分，第3.6節(jié)，第2段，對免疫原性的影響的進(jìn)一步指導(dǎo)）。

如果檢測到ADAs、并且在體內(nèi)毒性研究中沒有證實存在持續(xù)活性的PD標(biāo)記物時，需要評估中和作用的可能性?？梢栽陔x體生物活性分析中或者以適當(dāng)?shù)腜K-PD聯(lián)合分析形式間接評價抗體的中和作用，或者在特異性試驗中直接評估抗體的中和作用。

5. 生殖和發(fā)育毒性

5.1 一般評論

生殖毒性研究應(yīng)該按照ICH S5（R2）指導(dǎo)原則概述的原則來進(jìn)行。可以根據(jù)對種屬特異性、產(chǎn)品的性質(zhì)、以及作用機(jī)制、免疫原性和/或藥代動力學(xué)行為和胚胎–胎兒暴露的理解，修改具體的研究設(shè)計和給藥方案。

一般來講，最好可以在一個相關(guān)種屬中使用臨床候選物進(jìn)行生殖毒性評價。生殖毒性評價應(yīng)該只在藥理學(xué)相關(guān)種屬中進(jìn)行。當(dāng)臨床候選物在嚙齒類動物和兔中具有藥理學(xué)活性時，應(yīng)該使用兩個種屬進(jìn)行胚胎發(fā)育（EFD）研究，除非在一個種屬中已經(jīng)確認(rèn)有胚胎致死性或者致畸性。

當(dāng)非人靈長類動物（NHPs）是唯一的相關(guān)種屬時，應(yīng)該只在非人靈長類動物中進(jìn)行發(fā)育毒性研究。

當(dāng)臨床候選物只在NHPs具有藥理學(xué)活性時，在NHPs中進(jìn)行臨床候選物試驗是首選做法。如果可以提供充分的科學(xué)合理性，則可以使用替代模型替換NHPs。

如果沒有臨床候選物試驗的相關(guān)動物種屬，假設(shè)對模型具有充分的背景知識（如歷史背景數(shù)據(jù)），可以考慮使用表達(dá)人源靶標(biāo)的轉(zhuǎn)基因小鼠，或在表達(dá)人同源靶標(biāo)的種屬中使用同源蛋白（參見第I部分，注釋1）。對于以外源性物質(zhì)（如細(xì)菌和病毒）為靶標(biāo)的產(chǎn)品，一般不需要進(jìn)行生殖毒性研究（參見第2.1部分）。

當(dāng)證據(jù)的權(quán)衡結(jié)果（作用機(jī)制、基因修飾動物的表型數(shù)據(jù)、類別效應(yīng)）提示，會在生育能力或者妊娠結(jié)果方面出現(xiàn)不良反應(yīng)時，這些數(shù)據(jù)的信息足以進(jìn)行生殖風(fēng)險溝通？，并且在合適的條件下，可能無需進(jìn)行額外的非臨床研究。

5.2 生育能力

如果小鼠和大鼠都是某一產(chǎn)品的藥理學(xué)相關(guān)種屬，可以在這些嚙齒類動物的一個種屬中進(jìn)行生育能力的評價（參見ICH S5指導(dǎo)原則）。如果其他種屬也具有藥理學(xué)相關(guān)性，那么ICH S5指導(dǎo)原則也適用于其他種屬；此外，應(yīng)該酌情修改研究設(shè)計，例如說明產(chǎn)品的性質(zhì)和免疫原性的可能性。

交配研究對于NHPs并不實際。但是，當(dāng)NHPs是唯一的相關(guān)種屬時，可以在性成熟的NHPs中進(jìn)行至少持續(xù)3個月的重復(fù)給藥毒性研究，通過評價生殖系統(tǒng)（器官重量和組織病理學(xué)評價）評估對雄性和雌性生育能力的潛在影響。如果根據(jù)藥理學(xué)活性或者既往結(jié)果，存在導(dǎo)致?lián)鷳n的特殊原因，那么可以在重復(fù)給藥毒性研究中進(jìn)行特定的評價，如評價月經(jīng)周期、精子數(shù)、精子形態(tài)/精子活力、以及雄性或者雌性生殖激素水平。

如果由于在受精/著床方面有潛在影響，而存在藥理學(xué)活性相關(guān)的特殊擔(dān)憂，并且NHP是唯一的相關(guān)種屬時，可以實驗性說明該擔(dān)憂。當(dāng)受精或者著床是特殊擔(dān)憂時，同源產(chǎn)品或者轉(zhuǎn)基因模型可能是評估此類影響唯一實際的方法。但是，不建議僅為在嚙齒類動物中進(jìn)行交配研究，而生產(chǎn)同源產(chǎn)品或者建立轉(zhuǎn)基因模型。

在缺乏非臨床信息時，應(yīng)通過臨床試驗管理程序、知情同意、以及適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品說明書來降低患者的風(fēng)險。

5.3 胚胎–胎兒發(fā)育（EFD）和出生前/后的發(fā)育（PPND）

在設(shè)計和解釋發(fā)育毒性研究時，要考慮到生物藥物在胎盤轉(zhuǎn)移方面的潛在差異（參見注釋3）。

對于僅在NHPs中具有藥理學(xué)活性的產(chǎn)品，依據(jù)預(yù)期的臨床應(yīng)用和藥理學(xué)作用，可以考慮幾種研究設(shè)計。獨立的EFD和/或PPND研究、或者其他研究設(shè)計（由申辦者證明合理性）都可能適宜，尤其是存在某些擔(dān)憂，作用機(jī)制可能導(dǎo)致對胚胎–胎兒發(fā)育的不良反應(yīng)或者流產(chǎn)情況。但是，在NHPs中可以考慮設(shè)計良好且包含從妊娠第20天到出生之間的給藥研究（加強(qiáng)PPND，ePPND），而不是獨立的EFD和/或PPND研究。

對于上述描述的單一ePPND研究設(shè)計，無需設(shè)置剖腹產(chǎn)組，但是應(yīng)該在自然分娩時對妊娠結(jié)果進(jìn)行評價。該研究也應(yīng)該同時評價后代的生存力、外觀畸形、對骨骼的影響（如通過X-射線確定）、以及處死后尸體剖檢時的內(nèi)臟形態(tài)學(xué)。超聲檢查可用于追蹤妊娠狀態(tài)的維持，但是不適用于檢查畸形，后者的數(shù)據(jù)來源于產(chǎn)后的觀察結(jié)果。由于對母體哺育后代具有混雜的影響，所以一般不推薦母體產(chǎn)后給藥。如果與藥理學(xué)活性相關(guān)，那么也可以評價后代中的其他終點。產(chǎn)后階段的持續(xù)時間將取決于基于作用機(jī)制被視為相關(guān)的額外終點（參見注釋4）。

在NHPs中進(jìn)行的發(fā)育毒性研究只能用于確定危害？？。每組動物的數(shù)量應(yīng)該足以對數(shù)據(jù)做出有意義的解釋（參見注釋5）。

如果使用了其他NHP種屬，則申辦者應(yīng)該證明研究設(shè)計的合理性。上述在NHPs中進(jìn)行的發(fā)育毒性研究僅用于確定危害；只要已經(jīng)證明所選劑量水平的科學(xué)合理性，就可以使用一個對照組和一個給藥組來進(jìn)行研究。例如，適當(dāng)?shù)目茖W(xué)合理性證明可能是一個單克隆抗體，通過計劃達(dá)到靶結(jié)合飽和的臨床給藥方案，與可溶性靶標(biāo)結(jié)合。如果能夠在所選動物種屬中證實達(dá)到了這種靶結(jié)合的飽和，并且不超過治療藥物水平的10倍暴露倍數(shù)以上，則設(shè)置一個劑量水平組和對照組即可提供充分的胚胎發(fā)育危害證據(jù)。

5.4 研究的時間安排

如果在獲得胚胎–胎兒發(fā)育影響的信息之前，臨床研究需要包含有生育可能的婦女，那么需要適當(dāng)?shù)呐R床風(fēng)險管理措施，例如采用高效的避孕方法（參見ICH M3（R2）指導(dǎo)原則）。

對于只在NHPs中具有藥理活性的生物藥物，如果避孕措施充分（參見ICH M3（R2）指導(dǎo)原則，第11.3節(jié)，第2段），可以在III期進(jìn)行EFD或者ePPND研究，并在上市申請時提交報告。當(dāng)申辦者在臨床試驗中沒有采取充分的避孕措施時，應(yīng)該在III期試驗啟動之前提交完整的EFD研究報告或者ePPND研究的中期報告（參見注釋6）。當(dāng)產(chǎn)品只在NHPs中具有藥理學(xué)活性，并且其作用機(jī)制在胚胎發(fā)育方面有嚴(yán)重?fù)?dān)憂時，產(chǎn)品說明書應(yīng)該反映這一情況，無需在NHPs中進(jìn)行發(fā)育毒性研究，因此應(yīng)該避免對有生育可能的婦女用藥。

如果嚙齒類動物或者兔是相關(guān)種屬，則生殖毒性研究的時間安排應(yīng)參見ICH M3（R2）指導(dǎo)原則。當(dāng)嚙齒類動物是相關(guān)種屬時，進(jìn)行產(chǎn)品對生育能力影響的試驗的時間安排也應(yīng)該遵循ICH M3（R2）指導(dǎo)原則。

屬于ICH S9指導(dǎo)原則范圍內(nèi)的腫瘤產(chǎn)品，應(yīng)參見指導(dǎo)原則中與研究操作時間安排相關(guān)的部分。

6. 致癌性

應(yīng)該從臨床預(yù)期群體和治療持續(xù)時間方面，確定對生物藥物的潛在致癌性進(jìn)行產(chǎn)品特異性評價的需要（參見ICH S1A指導(dǎo)原則）。如果需要評價，申辦者應(yīng)該制定策略來說明潛在危害。

該策略可以將證據(jù)權(quán)衡法作為基礎(chǔ)，包括對不同來源相關(guān)數(shù)據(jù)的審查。數(shù)據(jù)來源可以包括已發(fā)表的數(shù)據(jù)（如來自轉(zhuǎn)基因、基因敲除或動物疾病模型、人類遺傳疾病的信息）、類別效應(yīng)的信息、靶標(biāo)生物學(xué)和作用機(jī)制的具體信息、體外數(shù)據(jù)、慢性毒性研究的數(shù)據(jù)以及臨床數(shù)據(jù)。在某些情況下，現(xiàn)有數(shù)據(jù)即可以充分說明潛在的致癌性，并且告知臨床風(fēng)險，而無需額外的非臨床研究。

某些生物藥物的作用機(jī)制，可能會引起潛在致癌性相關(guān)的擔(dān)憂（如免疫抑制劑和生長因子）。如果證據(jù)權(quán)衡結(jié)果支持潛在致癌性的相關(guān)擔(dān)憂，則無需進(jìn)行嚙齒類動物的生物試驗。在這種情況下，最好通過產(chǎn)品說明書和風(fēng)險管理來說明潛在的危害。當(dāng)證據(jù)權(quán)衡結(jié)果并不明確時，申辦者可以提議進(jìn)行額外研究，減少機(jī)制導(dǎo)致的擔(dān)憂（參見第I部分，第5.8節(jié)）。

對于產(chǎn)品具體特征和潛在致癌性相關(guān)的作用模式方面沒有充分認(rèn)知的產(chǎn)品，應(yīng)該進(jìn)行更加廣泛的評價（如理解潛在致癌性擔(dān)憂相關(guān)的靶標(biāo)生物學(xué)、在毒性研究中納入額外的終點）。

如果這種更加廣泛評價的證據(jù)權(quán)衡結(jié)果沒有提示潛在致癌性，則不推薦進(jìn)行額外的非臨床試驗?；蛘撸绻C據(jù)權(quán)衡結(jié)果提示存在潛在致癌性的相關(guān)擔(dān)憂，那么申辦者可以提議進(jìn)行附加非臨床研究，降低此類擔(dān)憂，或者在產(chǎn)品說明書中反映出這種擔(dān)憂。

產(chǎn)品特異性的潛在致癌性評價，可以用于風(fēng)險溝通，并且可以與說明書建議、臨床監(jiān)測、上市后監(jiān)測或者上述方法的組合，一起完善風(fēng)險管理計劃。

使用同源產(chǎn)品進(jìn)行的嚙齒類生物試驗（或者短期致癌性研究），通常對臨床候選物潛在致癌性評價的意義有限。

如果建立了新的策略/試驗，可以考慮作為替代方法。

注釋

注釋 1

組織交叉反應(yīng)（TCR）研究是采用免疫組織化學(xué)（IHC）技術(shù)進(jìn)行的體外組織結(jié)合試驗，確定單克隆抗體和相關(guān)類抗體產(chǎn)品與抗原決定簇在組織內(nèi)的結(jié)合特征?？梢允褂闷渌夹g(shù)代替IHC技術(shù)，說明靶標(biāo)/結(jié)合位點分布。

使用一組人體組織進(jìn)行的TCR研究，是支持此類產(chǎn)品進(jìn)行初始臨床給藥的系列安全性評價試驗推薦之一。但在某些情況下，臨床候選物并非有良好的IHC試劑，TCR研究可能在技術(shù)上并不可行。

TCR研究可以為靶標(biāo)分布的認(rèn)知提供有用的補(bǔ)充信息，還可以提供潛在非預(yù)期結(jié)合的信息。組織結(jié)合本身并不能說明在體內(nèi)具有生物學(xué)活性。此外，在體內(nèi)與抗體一般無法達(dá)到的區(qū)域（即細(xì)胞質(zhì)）結(jié)合通常并不相關(guān)。應(yīng)該在總體藥理學(xué)和安全性評價數(shù)據(jù)的背景下評價和解釋結(jié)果。

如果在人體組織中出現(xiàn)非預(yù)期結(jié)合，對所選動物組織進(jìn)行評價，能夠為存在或缺乏臨床前毒性潛在相關(guān)性方面提供補(bǔ)充信息。不推薦使用全套動物組織進(jìn)行TCR研究。

由于使用一組人體組織進(jìn)行的TCR研究將評價雙特異性抗體產(chǎn)品，因此沒有必要研究單獨的結(jié)合組分。

如果已經(jīng)在一組人體組織中使用臨床候選物進(jìn)行了TCR研究，同源產(chǎn)品的組織結(jié)合評價則不會再提供其他有價值的信息，因此不推薦進(jìn)行。

TCR研究不能檢測到關(guān)鍵質(zhì)量屬性的細(xì)微變化。因此，在整個開發(fā)項目中，不推薦工藝變更時用TCR研究評價受試品的可比性。

注釋 2

如果已經(jīng)使用了兩個種屬評價ADC的安全性，則應(yīng)該在至少一個種屬中，使用非結(jié)合毒素進(jìn)行額外的短期研究，或者在短期研究的一個研究臂中使用非結(jié)合毒素。在這種情況下，應(yīng)該首選嚙齒類，除非使用的毒素對嚙齒類沒有活性。如果只有一種藥理學(xué)相關(guān)的種屬，就應(yīng)該在該種屬中進(jìn)行ADC試驗。對于新型有毒物，需要以具體情況具體分析原則為基礎(chǔ)，采用與新型化學(xué)實體種屬選擇相似的方法（如抗癌產(chǎn)品遵循ICH S9指導(dǎo)原則）。如果不是新型的毒素或者有毒物，并且其現(xiàn)有科學(xué)信息體系充分，則無需對非結(jié)合毒素進(jìn)行獨立的評價。應(yīng)該提供數(shù)據(jù)來比較ADC在動物和人體中的代謝穩(wěn)定性。

注釋 3

在解釋研究時，應(yīng)該考慮妊娠期間胚胎暴露的種屬特異性特征。高分子量 （>5,000 D）的蛋白質(zhì)不會通過簡單的擴(kuò)散而穿過胎盤。對于分子量高至150,000 D的單克隆抗體，存在特異的轉(zhuǎn)運機(jī)制，即能夠決定胚胎暴露并且具有種屬間差異的新生兒Fc受體（FcRn）。

在NHPs和人類中，IgG的胎盤轉(zhuǎn)運率在器官形成期間很低，在妊娠中期的早期開始增加，在妊娠晚期的后期達(dá)到最高水平（5）。因此，盡管對胚胎的影響可以作為母體反應(yīng)的間接結(jié)果進(jìn)行評價，但是在NHPs中，給藥時間最早從妊娠第50天開始的標(biāo)準(zhǔn)胚胎研究，可能對評價器官形成期間的直接胚胎影響并沒有價值。此外，因為IgG只通過初始乳汁分泌（即在初乳中），在哺乳期的后期不再分泌，所以在NHPs中分娩后的母體給藥通常沒有意義。

嚙齒類動物的情況不同于NHPs和人類，因為IgG能夠通過FcRn轉(zhuǎn)運機(jī)制穿過卵黃囊，而且在妊娠期間，嚙齒類動物的暴露與NHPs和人類相比出現(xiàn)的相對較早。此外，嚙齒類動物的分娩是在發(fā)育階段，此時的幼崽沒有達(dá)到與NHPs或者人類新生兒相同的成熟水平。因此，應(yīng)該在哺乳期對大鼠/小鼠的分娩后母體給藥，實現(xiàn)藥物經(jīng)由乳汁對幼崽的暴露，通過至少9天的哺乳直至后代達(dá)到與人類新生兒相同的發(fā)育階段。

注釋 4

出生后觀察的最短持續(xù)時間應(yīng)該為1個月，以便進(jìn)行早期功能性試驗（如生長和行
為）。

通常，如果在一般毒性研究中，有證據(jù)表明存在免疫系統(tǒng)（或者免疫功能）的不良反應(yīng)，則應(yīng)該在出生前后加強(qiáng)發(fā)育（ePPND）研究的產(chǎn)后期間，在后代中進(jìn)行免疫功能試驗。適當(dāng)時，在出生后第28天即可盡早獲得免疫表型。根據(jù)所采用的功能性試驗，評價免疫功能的出生后觀察的持續(xù)時間可以為3-6個月。

神經(jīng)行為學(xué)評價可能僅限于臨床行為觀察結(jié)果。工具性學(xué)習(xí)需要一個訓(xùn)練期，該訓(xùn)練期持續(xù)時間至少為出生后9個月，因此不推薦。

注釋 5

決定獼猴ePPND研究中各組動物數(shù)量的方法詳細(xì)討論見Jarvis等2010年的文獻(xiàn)（6）。ePPND研究中各組動物數(shù)量應(yīng)該足以獲得充分的幼崽數(shù)量（出生后第7天時，每組6-8個后代），以評價出生后發(fā)育，并在需要時（如評價免疫系統(tǒng)）能夠進(jìn)行專家評價。

大多數(shù)ePPND研究經(jīng)過數(shù)周或數(shù)月實現(xiàn)動物妊娠。當(dāng)某個試驗項目組出現(xiàn)提示治療相關(guān)作用的流產(chǎn)時，應(yīng)該考慮終止研究中妊娠動物的進(jìn)一步增加，并調(diào)整研究設(shè)計（如采用剖腹產(chǎn)）。

提倡經(jīng)溶劑-對照處理母體動物的再利用。

如果存在作用機(jī)制可能導(dǎo)致對EFD的影響或流產(chǎn)的擔(dān)憂，則可以在限定數(shù)量的動物中進(jìn)行研究，以便確定危害。

注釋 6

在NHPs中進(jìn)行的ePPND研究中期報告應(yīng)該包括如下研究終點：

母體數(shù)據(jù)：生存情況、臨床觀察、體重、妊娠暴露數(shù)據(jù)（如果可以獲得）、任何特異性的PD終點；

妊娠數(shù)據(jù)：研究開始時妊娠動物的數(shù)量、器官形成結(jié)束時（GD50）和GD100時的懷孕狀態(tài)、出現(xiàn)的流產(chǎn)和流產(chǎn)的時間。在中期報告中，不需要超聲檢查來確定胚胎大小；因為可以獲得實際的出生體重，因此這些檢查并不重要；

懷孕結(jié)果數(shù)據(jù)：死胎/活胎的數(shù)量、幼崽出生體重、產(chǎn)后7天的幼崽存活情況和體重、外部形態(tài)學(xué)定性評價（即確定外觀屬于正常范圍內(nèi)）、幼崽暴露數(shù)據(jù)（如可獲得）、幼崽的任何特異性PD終點（如適當(dāng)）。

參考文獻(xiàn)

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