孫萬林,王福財,王淑芳,白天俊

(1.天祝縣松山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心, 甘肅 天祝 733299;2.天?？h動物疫病預(yù)防控制中心)

天祝藏族自治縣是甘肅省傳統(tǒng)的高寒牧區(qū)之一,轄區(qū)內(nèi)海拔2 040～4 874 m,年均氣溫-1～1.3℃,無絕對無霜期,年降水量265～630 mm,草原面積廣闊,牧區(qū)草場多位于海拔3 000 m以上,屬典型高山草甸草場。牛羊養(yǎng)殖以牧區(qū)草原放牧、農(nóng)區(qū)舍飼養(yǎng)殖為主要養(yǎng)殖方式,天祝草地型藏羊具有體質(zhì)高大健壯,耐高寒善攀爬,耐粗飼而飼養(yǎng)成本小,抗病能力和高寒牧區(qū)適應(yīng)能力強等優(yōu)點,是天祝縣旦馬、祁連、朵什、西大灘等牧區(qū)長期以來飼養(yǎng)的主要綿羊品種。近年來,天?？h充分發(fā)掘區(qū)域優(yōu)勢資源,積極推廣應(yīng)用藥物誘導(dǎo)藏羊同期發(fā)情、人工授精等先進改良育種技術(shù),加速藏羊品種選育、改良進程,大力發(fā)展羊產(chǎn)業(yè)。電刺激采精技術(shù)是模仿自然射精過程中的神經(jīng)和肌肉對各種由副交感神經(jīng)、交感神經(jīng)等神經(jīng)纖維介導(dǎo)的不同的化合物反應(yīng)的生理學(xué)反射,通過利用低電壓小脈沖交流電刺激公畜薦錐部低級神經(jīng)中樞而引起動物性生殖器興奮并不自覺的產(chǎn)生射精來完成采精的一項種畜采精技術(shù)。高寒牧區(qū)藏系羊具有較大的野心,電刺激采集時對動物具有一定的刺激性,為研究該技術(shù)能否在甘肅高寒牧區(qū)藏系羊繁殖中推廣應(yīng)用,是否對公羊精液品質(zhì)和采集量有影響,“天祝高寒牧區(qū)藏羊高效繁殖技術(shù)集成”項目課題組進行了牧區(qū)藏羊種公羊電刺激采精試驗。

1 試驗材料

1.1 試驗動物選擇

本試驗于2021年9月藏羊配種季,在天祝縣旦馬鄉(xiāng)某規(guī)模養(yǎng)殖場進行,選用該場選育留用的歐拉型藏種公羊4只為實驗對象,體重和年齡分別是:1號羊3.5歲72 kg,2號羊3歲69 kg,3號羊4歲78 kg,4號羊3.5歲73 kg。4只藏羊種公羊均在該場生活2年以上,健康,平時采用自然交配方式進行配種,對飼養(yǎng)人員具有良好的親和性。

1.2 試驗場地與器械

1.2.1 采精室 該養(yǎng)殖場設(shè)置有專門的人工授精室和受配母羊活動場地,人工授精室包括采集室10 m2和精液處理室8 m2,在采精室外單獨設(shè)置輸精場地。室內(nèi)光線充足,地面采用水泥硬化處理,堅實平整,保持正常通風(fēng)。

1.2.2 采精器械與設(shè)備 倍特雙動物電刺激采精器(北京倍特雙科技發(fā)展有限公司,型號:BTS-QP),電子顯微鏡、電熱恒溫培養(yǎng)箱以及假陰道、集精杯、培養(yǎng)皿、玻璃棒、溫度計、酒精棉球、凡士林等采精設(shè)備,保持220V正常電源。

1.2.3 器材清洗和消毒 對配種室內(nèi)外環(huán)境用0.1%新潔爾滅溶液噴灑消毒。用具、器械用3%碳酸鈉溶液清洗后,用溫水沖洗備用。消毒時,除不易放入或不能放入高壓消毒鍋(或蒸籠)的金屬器械、玻璃輸精器及膠質(zhì)的內(nèi)胎以外,都采用高壓蒸汽消毒法消毒,其他器械設(shè)備采用酒精擦拭消毒,使用前用生理鹽水沖洗。

1.3 實驗種公羊管理

實驗種公羊日常管理中采用放牧加補飼的方式進行。每天青干草自由采食,補飼混合精料1.0 kg,雞蛋2枚和豆奶粉200 g?；旌暇辖M成是:玉米54%,豆類20%,餅粕7%,麩皮16%,食鹽2%,鈣粉1%。保證種羊自由飲用清潔飲水。

2 試驗方法

2.1 試驗設(shè)計

配種期種公羊每日每只采精2次,即:首日(標(biāo)注為d1)早上采用傳統(tǒng)的假陰道采精法采精,下午采用電刺激法采精,次日(標(biāo)注為d2)早上采用電刺激法采精,下午采用傳統(tǒng)的假陰道采精法采精,依次不同采精方法交叉采精,減少誤差,連續(xù)采精6 d。

2.2 假陰道采精法采精

按照參考文獻規(guī)定的采精方法采精,并檢查精液量、精子活力等情況,記錄實驗數(shù)據(jù)。

2.3 電刺激采精法采精

保定種畜、控制電刺激儀開關(guān)、采集精液各1人協(xié)作配合完成采精操作。

2.3.1 種羊采精前準(zhǔn)備 將公羊側(cè)臥或站立保定,剪掉陰莖基部周圍的長毛,陰莖及包皮用清水沖洗后,再用生理鹽水沖洗,直至干凈,最后用滅菌脫脂棉擦干陰莖及包皮。用酒精棉球?qū)㈦姌O棒與肛門消毒,然后涂抹凡士林將電刺激棒輕輕插入肛門直腸內(nèi),來回前后左右抽動旋轉(zhuǎn),以刺激棒全部進入直腸為止(約15 cm)。兩塊金屬條方向朝正下方,置于緊貼直腸底壁靠近輸精管壺腹部。

2.3.2 種公羊保定 種羊保定人員左手固定頭部,右手緊握住待采藏羊種公羊背部大腿基部,保持臀部略高于頭姿勢,兩腿自然分開。保定員要適度用力,既要避免種羊過度緊張,又要防止掙脫。

2.3.3 儀器操作 控制電刺激儀開關(guān)人員將電源線一端連接儀器面板插座,插頭端插入220V交流電電源插板上。將刺激電極棒連線兩插頭插入“輸出”處。在開啟“電源”開關(guān)前,應(yīng)先將右下角開關(guān)搬向中間“關(guān)閉”狀態(tài),“電源輸入”處于關(guān)閉狀態(tài)。電壓選擇開關(guān)向上旋轉(zhuǎn)選擇0～50V電壓輸出模式,將“輸出選擇”開關(guān)選擇至“點動”狀態(tài),使儀器處于“手動”操作,向上撥動為工作,松開后自動歸為“關(guān)閉”狀態(tài),人為控制刺激輸出時間,順時針旋轉(zhuǎn)“電壓調(diào)節(jié)”開關(guān)電壓或電流增大;反之,電壓或電流減小,可在電壓表上看到相應(yīng)輸出電壓值。

2.3.4 采精 采精人員右手中指與無名指指尖固定好已經(jīng)消毒好的集精杯(杯口向外),左固定插入公畜肛門內(nèi)的手持電極棒端。儀器控制人員打開采精儀電源開關(guān),接通電源刺激,刺激電壓由低到高,同時采精員持電極繞直腸壁做圓周運動。重復(fù)通電刺激3～5次,每次通電持續(xù)5 s,斷電5 s,并根據(jù)公畜反應(yīng),不斷升高電壓,至排精。公畜有排精表現(xiàn)時,采精員右手迅速反轉(zhuǎn),立即將集精杯口移至陰莖口下方,接取精液。

2.3.5 規(guī)整 采精結(jié)束后,采精人員立即將精液送檢,儀器控制人員將采精儀各調(diào)節(jié)旋鈕逐檔回零,切斷電源,然后拔出電極棒,洗凈,消毒。

2.4 精液品質(zhì)檢查

2.4.1 外觀檢查 外觀觀察法檢查精液顏色、性狀、氣味。

2.4.2 精液密度判定標(biāo)準(zhǔn) 用顯微鏡檢查精子密度,公羊精子的密度分為“密”、“中”和“稀”三級。

密:精液中精子數(shù)目很多,充滿整個視野,精子與精子之間的空隙很小,不足一個精子的長度,由于精子非常稠密,所以很難看出單個精子的活動情形。

中:在視野中看到的精子也很多,但精子與精子之間有著明晰的空隙,彼此間的距離相當(dāng)于1～2個精子的長度。

稀:在視野中只有少數(shù)精子,精子與精子之間的空隙很大,超過兩個精子的長度。另外,在視野中如看不到精子,則以“0”表示

2.4.3 精子活力判定標(biāo)準(zhǔn) 以直線運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率作為精子活力評定指標(biāo)。一般采用十級評分制,呈直線運動的精子達100%,評為1.0級,呈直線運動的精子達90%,評為0.9級,呈直線運動的精子達80%,評定為0.8級,以此類推。

3 結(jié)果

3.1 采精量數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果

4只種公羊每天采精早晚各1次,假陰道采精法采精量為0.78～0.93 mL,電刺激采精法平均采精量在0.80～0.96 mL,詳見表1。

表1 藏羊種公羊采精量統(tǒng)計表 mL

3.2 精液外觀檢查結(jié)果

4只藏羊種公羊兩種方法采集的精液外觀檢查,精液顏色呈乳白色或略顯黃白色,無氣味或略呈腥膻味、淡腥臭味,性狀呈現(xiàn)上下漩渦狀翻滾云霧狀。

3.3 精子活力檢查結(jié)果

兩種方法采集的藏羊種公羊平均精子活力均在0.80以上,詳見表2。

表2 藏羊種公羊精子活力統(tǒng)計表

3.4 精子密度檢查結(jié)果

兩種方法采集的藏羊種公羊平均精液密度均“中”以上,平均密度達到“密”級標(biāo)準(zhǔn),詳見表3。

表3 藏羊種公羊精液密度統(tǒng)計表

4 討論

據(jù)文獻報道,電刺激采集技術(shù)在國外動物人工采精中使用廣泛,我國畜牧生產(chǎn)中電刺激采精技術(shù)應(yīng)用也越來越廣泛,尤其在野生動物或人工馴養(yǎng)的大熊貓、猴、烏蘇里貂、野生及雜交盤羊等動物人工采精中常采用電刺激采精法采集精液。張建濱等人用電刺激采集技術(shù)完成對熊的精液采集,孔慶松在狐貍?cè)斯な诰夹g(shù)研究中采用電刺激法采精,孫廣生、洪振銀等人分別進行了梅花鹿、小靈貓的電刺激采精研究,尚未見甘肅高寒牧區(qū)藏羊電刺激采精研究的相關(guān)文獻報道。余忠祥在青海省祁連縣進行了青海省高寒牧區(qū)藏羊公羊電刺激采精試驗研究,應(yīng)用電刺激采精儀(型號:EJ6CCGS,澳大利亞產(chǎn)),未對公羊麻醉和調(diào)教訓(xùn)練的情況下進行電刺激采精,參與試驗的9只青年藏種公羊,平均采精量、密度、活力分別為0.6 mL、“中等”以上、0.7。楊俊等人對山東煙臺本地種山羊采用電刺激采精研究表明,用電刺激采精法采精對山東煙臺山羊品種精液量和精子活力影響較小,精子活力良好,都在80%左右,這與本次實驗結(jié)果一致,在天祝牧區(qū)藏羊種公羊電刺激采精平均精子活力均在0.80以上,平均精液密度均“中”以上,4只藏羊種公羊采集的精液外觀檢查,精液顏色呈乳白色或略顯黃白色,無氣味或略呈腥膻味、淡腥臭味,性狀呈現(xiàn)上下漩渦狀翻滾呈云霧狀,精液品質(zhì)符合人工授精精液品質(zhì)要求。本次在天祝牧區(qū)藏系種羊電刺激采精法所得精液量均在0.80～0.96 mL之間,符合藏系羊正常精液量,但楊俊等人在山羊電刺激采精時平均采精量相對較少,這就需要進一步開展電刺激采精對采精數(shù)量影響的相關(guān)試驗研究,確定電刺激采精對精液量是否有影響。

藏羊電刺激采精技術(shù)比較成熟,對種公羊刺激影響不大,采精儀器價格廣大規(guī)模養(yǎng)殖戶易于接受,另外,采精儀器攜帶方便,操作方法簡單易于掌握,采集的精液活力、平均密度等品質(zhì)符合人工授精標(biāo)準(zhǔn),可應(yīng)用于甘肅高寒牧區(qū)藏系羊繁殖生產(chǎn)實踐。在天祝牧區(qū)藏系羊繁殖中,電刺激采精的推廣應(yīng)用可以有效解決牧區(qū)藏系羊種公羊配種控制或調(diào)教訓(xùn)練的困難和藏系羊選育種應(yīng)種公羊管理不到位產(chǎn)生的系譜混亂不清、血統(tǒng)不純不明,甚至出現(xiàn)近交退化等問題,提高牧區(qū)藏羊繁育水平和生產(chǎn)性能。

加強種公羊管理,控制采精頻率,有助于種公羊的合理利用和保證精液品質(zhì)穩(wěn)定。應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)的天然或人工草場放牧,補飼日糧應(yīng)富含蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì),品質(zhì)優(yōu)良、易消化、體積較小和適口性好等。在管理上,可采取單獨組群飼養(yǎng),并保證有足夠的運動量。實踐證明,種公羊最好的飼養(yǎng)方式是放牧加補飼。在羊群配種高峰季節(jié),健康的種公羊可采精2次/d,每天每只公羊除提供充足的青干草外,補充胡蘿卜1 kg,雞蛋2個,精料0.5～1 kg,每天運動保持在早晚2h以上,如無特殊需要,一般不得提高采精頻率。

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