液體活檢的目標(biāo)與方法

腫瘤的液體活檢主要包括循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）、游離腫瘤細(xì)胞（CTC）及外泌體（exosome）。眾多研究表明三者與腫瘤的早診、治療、預(yù)后等均存在相關(guān)性。目前在臨床應(yīng)用最多的當(dāng)屬ctDNA檢測。

正常人的體液內(nèi)亦存在來自于機(jī)體正常細(xì)胞的游離DNA，簡稱循環(huán)游離DNA或cfDNA；在腫瘤患者體內(nèi)，循環(huán)游離DNA不僅僅來自于正常細(xì)胞，還有一部分來自于腫瘤細(xì)胞，即ctDNA，也是循環(huán)游離DNA的一部分，因此我們可以通過檢測ctDNA相關(guān)變異狀態(tài)作為來自腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志物。目前臨床腫瘤ctDNA檢測最常見的應(yīng)用領(lǐng)域為治療方案選擇及耐藥監(jiān)測。

由于ctDNA具有片段化程度高、豐度低等特點(diǎn)，其主流檢測方法包括Cobas法、Super-ARMS法、高通量二代測序（NGS）及數(shù)字PCR。

液體活檢的運(yùn)用與優(yōu)勢

液體活檢最大的優(yōu)勢在于微創(chuàng)、快捷，易于動態(tài)監(jiān)測；一定程度上全面反映腫瘤整體變異狀態(tài)，不受腫瘤異質(zhì)性影響；適用人群更廣泛，對于難以取得活檢腫瘤組織或取得腫瘤組織不夠基因檢測的患者，液體活檢提供了一個了解腫瘤基因變異狀態(tài)的有效途徑。

1. 早期診斷

腫瘤的早期診斷最大難點(diǎn)是由于腫瘤負(fù)荷很低，可能影像學(xué)上沒有明確的病灶，此時血液中ctDNA的含量亦極低，普通針對ctDNA突變的檢測難以滿足早診的要求。

但DNA甲基化改變是貫穿整個惡性轉(zhuǎn)化的表觀遺傳學(xué)改變。即使在腫瘤發(fā)展的最早期，DNA甲基化模式也已經(jīng)與正常細(xì)胞存在顯著差異；其次，甲基化水平的改變是具有組織特異性的，即對甲基化進(jìn)行檢測及比對，能夠進(jìn)行器官溯源，發(fā)現(xiàn)到底是哪里可能會發(fā)生或已經(jīng)發(fā)生了腫瘤。

因此，對ctDNA的甲基化水平進(jìn)行檢測，是一種有效的腫瘤早期篩查輔助手段。比如SEPT9基因甲基化檢測試劑盒對結(jié)直腸癌診斷的敏感度及特異性可達(dá)74.8%及97.5%[1]，現(xiàn)在已經(jīng)可以作為一種結(jié)腸鏡前的初篩手段。

2. 指導(dǎo)靶向治療

腫瘤的靶向治療是目前臨床最常見的ctDNA檢測應(yīng)用。根據(jù)《非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國專家共識》，如果有腫瘤組織，推薦使用腫瘤組織進(jìn)行驅(qū)動基因檢測；若無腫瘤組織樣本或腫瘤組織樣本不足的情況下，液體活檢可作為很多患者基因檢測的首選。

無論何種檢測方式，應(yīng)注意的是若組織活檢或者液體活檢有任何一個是陽性，患者應(yīng)當(dāng)考慮使用靶向藥物；當(dāng)液體活檢先行的時候，若液體活檢為陰性，應(yīng)提示患者可能存在假陰性，必要時再取活檢，以避免錯失可能的靶向治療機(jī)會。

3. 耐藥監(jiān)測

靶向治療終歸面臨耐藥的問題，而液體活檢由于微創(chuàng)快捷的優(yōu)勢，是理想的耐藥監(jiān)測材料。對于EGFR一代或者二代TKI用藥人群，約半數(shù)以上的患者出現(xiàn)EGFR 20號外顯子T790M而耐藥，因此對于此類患者的耐藥監(jiān)測可使用敏感度高且成本低的數(shù)字PCR法對T790M單點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)測。如果患者已經(jīng)出現(xiàn)了耐藥，亟需探索其耐藥機(jī)制以更換治療方案，此時推薦使用NGS對基因變異的整體狀態(tài)進(jìn)行檢測，以便全面尋找耐藥原因。

4. 預(yù)后評估

在預(yù)后評估方面，微小殘留病變（MRD）是目前研究的熱點(diǎn)。MRD指的是治療后傳統(tǒng)影像學(xué)和實驗室方法無法發(fā)現(xiàn)，但通過分子診斷可以發(fā)現(xiàn)的腫瘤來源的分子異常。多種腫瘤的相關(guān)研究表明，ctDNA突變狀態(tài)可提示接受根治性治療的患者的預(yù)后復(fù)發(fā)，并且已經(jīng)在部分臨床實驗中得到應(yīng)用。

液體活檢的樣本采集要求

血液的規(guī)范化處理是保證液體活檢結(jié)果準(zhǔn)確的基本前提。在血液樣本的送檢方面應(yīng)注意：

1.采血管的選擇

ctDNA檢測的血液需使用EDTA抗凝管或者cfDNA專用采血管。若使用EDTA抗凝管，血液離體后應(yīng)盡量保存于4℃，2小時內(nèi)需盡快進(jìn)行血漿分離；若使用cfDNA專用采血管，血液可在常溫保存3-5天。切記嚴(yán)禁使用肝素抗凝管，因為肝素在后續(xù)DNA提取過程中難以去除，并且會抑制PCR反應(yīng)，導(dǎo)致后續(xù)ctDNA檢測失敗。

2.采血量及采血注意事項

一般而言，ctDNA檢測需要采集8-10ml的全血。采血后嚴(yán)禁劇烈震蕩血液，或者使用注射器針頭對血液進(jìn)行轉(zhuǎn)移，因為這樣的操作均會導(dǎo)致血液中細(xì)胞破裂，從而造成基因組DNA的污染，增加ctDNA檢測的假陰性。采血后應(yīng)輕柔將采血管顛倒8-10次進(jìn)行混勻。

3. 患者采血時間的選擇

一般建議患者空腹進(jìn)行抽血，特別是血脂較高的患者。這是由于低密度脂蛋白對熒光有屏蔽和吸收的作用，會干擾后續(xù)ctDNA的相關(guān)檢測；三酰甘油會降低ctDNA的提取率；若使用微滴式數(shù)字PCR檢測技術(shù)，血液中的脂質(zhì)會影響后續(xù)微滴的生成。此外，對于正在進(jìn)行化療的患者，一般建議患者化療結(jié)束后進(jìn)行抽血。

參考資料：

[1] Jin P, Kang Q, Wang X, Yang L, Yu Y, Li N, et al. Performance of a second-generation methylated SEPT9 test in detecting colorectal neoplasm. Journal of gastroenterology and hepatology. 2015 May;30(5):830-3. PubMed PMID: 25471329.

文中圖片均已獲版權(quán)方授權(quán)

本文由“健康號”用戶上傳、授權(quán)發(fā)布，以上內(nèi)容（含文字、圖片、視頻）不代表健康界立場?！敖】堤枴毕敌畔l(fā)布平臺，僅提供信息存儲服務(wù)，如有轉(zhuǎn)載、侵權(quán)等任何問題，請聯(lián)系健康界（jkh@hmkx.cn）處理。

相關(guān)知識

【產(chǎn)檢建議】一文讀懂羊水穿刺
【收藏】體檢季，每年體檢到底查個啥？一文讀懂！
一文讀懂疾病評估
一文讀懂健康體重核心信息
讀懂體檢單丨尿常規(guī)檢查，能看出來腎好不好？ 一文教你看懂！
一文讀懂腫瘤基因檢測
讀懂體檢報告，這些話一定要聽
【科普】懷孕必查的 HCG，一文教你讀懂！
體檢報告怎么看？什么情況要復(fù)查？一文讀懂→
體檢報告不再難懂，在線工具幫你解讀健康數(shù)據(jù)

網(wǎng)址: 一文讀懂液體活檢 http://m.u1s5d6.cn/newsview896636.html